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1、钟），方法灵 敏度高，血浆用量少 （ 仅 1 0 0 l5 ,8 ,9 ， 精 密 度 高 ，重 现 性 好 ， 操 作 简 便，试剂的毒性小，且几乎无干扰物存在， 因而更宜于人群普查和临床应用。我们选用 V A 醋酸酯一种内 标物，而 B i e r i 选用 了 两 种7 ， D e L e e n h e e r 选用的一种是T o c o l 8 。 正如D r i s k e l l 指出的那样，一种内标物可节 省洗脱时间，减少处理的峰数，而精密度与 准确度不变 9 。我们选用V A 和 - V E乙醇液 的U V 最佳吸收波长3 2 5 和2 9 2 n m 检测，比 单 独用2
2、8 0 n m、 2 9 0 n m及用2 9 2 n m检测 更灵敏，且比文献 7 - 9 减少了内标物的用 量。此外，制样时不经皂化处理也同样得到 满意的回收率 5。最后，与采用峰高比定量 的方法 8 ,9 相比较，我们采用的峰面积比定 量法应当有更高一些的准确性。 我们以此法对食管癌高发区林县正常人 进行了V A 和 - V E 的抽样分析，结果表明个 体间 V A 和 - V E 水平差异较大， 说明饮食状况 和生活水平不一； 这些个体血浆的 V A 和 - V E 水平的均值比欧美人的8 ,9 低，说明其营养 较差。 林县人血浆中V A 和 - V E 水平较低是否 与食管癌高发正相
3、关，尚待进一步作人群调查。 致谢：本工作所用标准物均由中国医科院肿瘤 所病因室馈赠。 实验初期，王天丁、秦裕民 同志参 加了技术工作，特此一并致谢。参考文献1 E . B j e l k e , I n t . J . C a n c e r , 1 5 , 5 6 1 ( 1 9 7 5 ) . 2 D . Je r e m y e t a l. , J .N .C .I , 6 6 ( 1 ) ,7 ( 1 9 8 1 ) . 3 N . Wa l d e t a l . , N u t r . C a n c e r , 1 ( 3 ) , 6 8 ( 1 9 7 9 ) . 4 M.
4、G . C o o k e t a l . , C a n c e r R e s e a c h , 4 0 ( 4 ) , 1 3 2 9 ( 1 9 8 0 ) . 5 L . J . H e t a m e t a l . , J . L i p i d R e s e a c h , 2 0 , 6 3 9 ( 1 9 7 9 ) . 6 B . J . Z a s p e l e t a l . , A n a l . B i o c b e m , I S O ( 1 ) , 1 4 6 ( 1 9 8 3 ) . 7J . G. B i e r i e t a l . , Am
5、 . J . C l i n . Nu t r . , 3 2 , 2 1 4 3 ( 1 9 7 9 ) . 8 A . P . D e L e e n h e e r e t a l . , J . C h r o m a t o g r . , 1 6 2 , 4 0 8 ( 1 9 7 9 ) . 9 W. J . D r i s k e l l e t a l . , J . C h r o m a t o g r . , 2 3 1 , 4 3 9 ( 1 9 8 2 ) . 1 0 J . G . B i e r i e t a l . , P r o c . S o c . E
6、 x p . B i o . M e d ., 1 2 0 , 5 5 4 , 1 9 6 5 . （ 收稿日 期：1 9 8 5 年6 月）D e t e r mi n a t i o n o f V A a n d - VE i n H u ma n P l a s ma ( S e r u m ) b y R e v e r s e d - P h a s e H P L C Z h a o Fn, e C h o n g l e , L i J i e a n d C h e n J u n l i n g , He n a n T u m o r I n s t i t u t e
7、, Z h e n g z h o u T h i s p a p e r d e s c r i b e s a r a p i d , s e n s i t i v e a n d r e p r o d u c i b l e p r o c e d u r e f o r t h e s i m u l t a n e o u s d e t e r - m i n a t i o n o f r e t i n o l ( V A ) a n d - t o c o p h e r o l (- V E ) i n h u m a n p l a s m a ( s e r u m
8、) b y h i g h p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y ( H P L C ) a n d U V d e t e c t i o n . 1 0 0 o f p l a s m a ( s e r u m ) w e r e p r e t r e a t e d , i n e l o - d i n g d e p r o t e i n i z a t i o n , e x t r a c t i o n , e v a p o r a t i o n a n d d r y i n g
9、. T h e r e s i d u e r e d i s s o l v e d i n E t O H c o n - t a i n i n g t h e i n t e r n a l s t a n d a r d o f r e t i n y l a c e t a t e a n d t h e n a n a l y s e d b y H P L C w i t h a Z O R B A X O D S c o l u m n a n d a m o b i l e p h a s e o f l 0 0 M e O H . D e t e c t i o n w
10、a v e l e n g t h s w e r e a t 3 2 5 n m a n d 2 9 2 n m f o r V A a n d V E , r e s p e c t i v e l y . T h e r e c o v e r y . f o r V A a n d - V E u s i n g t h i s m e t h o d a r e 9 0 5 4 2 8 1 a n d 9 7 .0 2 2 .8 7 ， r e s p e c t i v e l y T h e m i n i m u m d e t e c t a b l e l i m i t
11、s a r e 0 .1 4 n g / 1 0 0f o r V A a n d 3 . 1 5 n g / 1 0 0f o r - V E . T h e l i f e t i m e o f t h e HP L C c o l u mn u s e d i n t h i s wo r k i s o v e r 1 0 0 0 r u n s . T h i s m e t h o d p r o v e d u s e f u l i n c l i n i c a l a n d e p i d e m i o l o g i c a l wor k.鬼臼脂素及其木质素的高效
12、液相色谱分析段志兴李景新田暄陈耀祖（ 兰州 大学化 学系）桃儿七 （ P o d o p h y l l u m e m o d i Wa l l . V a r C h i n i n s i s S p r a g u e1 根茎中分离得到的鬼臼脂素是一种具有很大毒性的抗癌天然 产物 2 ，是抗癌新药V P 1 6 - 2 1 3 和V M 2 6 等的 半 合 成 原 料3 ,4 5 。 早期文献报道，鬼臼脂素定量分析用薄 层色谱一洗脱分光 光度法 6 ,7，该法步骤 多、费时、斑点定位困难，因而误差较大；同时难以将鬼臼脂素和苦鬼臼脂素分离。近 年，液相色谱广泛用于鬼臼 脂素类化合物的
13、分析 8 , 9 , 1 0。但是多属于合成鬼臼脂素成分 分析，或是提取物纯样制备。本文用高效液 相色谱法对西北地区产的桃儿七根茎中的鬼 臼 脂素类化合物在P a r t i s i l -5 柱上以 正己 烷 -二氯甲烷-甲醇三元混合流动相，使得难 分离的鬼臼脂素和苦鬼臼脂素获得了良好的 分离，建立了一个实用于生产 “ 商品鬼臼 脂 素”的简便分析方法。实验部分（ 一）仪 器和设备1 色谱仪美国T R AC OR - 9 0 0 系列 液相色谱仪。 2 检测器T R AC O R - 9 7 0 A可变波 长UV 检测器，检测波长2 7 0 n m。 3 色谱柱 Wh a t m a n P
14、 a r t i s i l - 5 ， 2 5 0 4 .6 毫米，柱填料表面积4 0 0 米2 克，孔 径约4 . 5 1 0 - 4 微米，理论塔板数约1 1 5 0 0 。 4 进样阀R h e o d y n e - 7 1 2 5型六 通阀。 5 记录器美国S p e c t r a - p h y s i c s 产 S P - 4 1 0 0 计算积分仪。（ 二）标样和试 剂 1 标样本实验所用标样均由兰州大学化学系有机分析研究室提供。实测样品为 兰州合成制药厂从甘肃产桃儿七根茎中提取 的 “ 商品鬼臼脂素”。2 溶剂 除正己 烷为化学纯外，其余 试剂均为分析纯。结 果 与 讨
15、 论为获得良 好的分离效果，实验在流动相 组成、流速、检测波长和柱填料粒度等几个 方面进行了一些探讨。 实验结果表明：以正己 烷-二氯甲 烷- 甲 醇 组 成的 三 元 混 合 物 （ 配比 为9 0 : 1 0 : 6 ， 体积）做流动相能给出天然鬼臼脂素类化 合物的理想分离。表1 为改变体系甲 醇含量 对欲分离化合物保留值的影响。表2 为固定 正己 烷和甲醇配比，而仅改变二氯甲 烷含量 对欲分离物质保留值的影响。实验证明甲醇 和二氯甲烷在流动相中配比降低，保留值均 增大；反之，保留值变小。但是二氯甲烷远 不及甲醇对其保留值影响那么大。实验也发 现，正己烷-二氯甲烷-甲醇比例在以体积 计量配
16、制时，尽管表观比例控制在9 0 : 1 0 : 6 ， 但是真正比例总会有微小增减，故保留值自 然会有所变化。图1 为选定色谱条件下鬼臼 木质素类各化合物的色谱流出图。由图可见 鬼臼 脂素、表鬼臼脂素及苦鬼臼脂素是难分 离物质。 采用1 0 微米粒度硅胶做吸附剂，在选定 色谱条件下，虽可将鬼臼脂素、表鬼臼脂素 和苦鬼臼脂素分离，但它们相互交迭程度变 大，所以用5 微米粒度硅胶做柱填料，柱效 大为提高。表 1甲 醇对鬼臼木质素类化合物保留 值的影响表 2二氯甲 烷对鬼臼 木质素类化合物保留值的 影响关于检测波长， 文献 9 , 1 0 报道各异。本文用“ 停泵紫外扫描法” 对欲测物质扫描，查 明它们在选定流动相体系中于2 7 0 2 7 3 n m 有最大吸收。 定量所用标准鬼臼 脂素经N MR 和MS 已 知标准样对照，图谱相符。碳氢元素分析数 据也与理论计算值相符。液相色谱分析纯度达9 9 . 5 4 。 标准鬼臼脂素和 “ 商品鬼臼脂素”分别 以选择流动相溶液配成千分之二浓度，于选 定色
