人参皂苷rh2对人结肠癌细胞株sw620和lovo生长的抑制作用

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1、人参皂苷Rh2对人结肠癌细胞株SW620 和LOVO生长的抑制作用代 群 刘 培 浙江省中医院 杭州310006摘 要 目的:探讨人参皂苷Rh2对人结肠癌细胞株S W620和LOVO生长的抑制作用。方法:体 外培养人结肠癌细胞株S W620和LOVO,加入终浓度分别为20100mol/L的人参皂苷Rh2。采 用MTT法测定药物对细胞的的增殖抑制率( IR) ,并计算半数抑制浓度( IC50)。倒置显微镜观察 细胞形态。结果:人参皂苷Rh2作用S W620和LOVO 24小时IC50分别为36mol/l和40mol/L; 显微镜观察,药物作用后细胞出现明显的凋亡形态。结论:人参皂苷Rh2对S W

2、620和LOVO细胞的生长具有抑制作用,且呈时间剂量依赖性。 关键词 人结肠癌细胞株 人参皂苷Rh2 细胞增殖I nhibition Effect of Ginsenoside Rh2 on Proliferation of SW620 and LOVO cells DA I Qun, L I U Pei .ZhejiangProvince Herbalist Hospital, Hangzhou (310006) , ChinaAbstract Objective: To investigate the effect of ginsenoside Rh2 on human colon can

3、cer cell line S W620 and LOVOcells . M ethods: Human colon cancer cellswas cultured in vitro andwas treatedwith Rh2 of the final concentration of 20100m /L.Inhibition rate was evaluated by MTT assay and the half maximal inhibitory concentration ( IC50) wascalculated. Morphology of apoptosiswas studi

4、ed bymicroscope. Results:The IC50valuesof S W620 andLOVO were 36m /Land 40m /L after 24h, respectively . Apoptosis was obvious . Conclusion: Ginsenoside Rh2 can inhibit the proliferation ofS W620 and LOVO cells in a ti me2and dosage2dependentmanner .Key words human colon cancer cells ginsenoside Rh2

5、 proliferation肠癌是人类高发的消化系统恶性疾病,在恶性 肿瘤发病率中排第4位,转移和复发是大肠癌患者 死亡的主要原因之一。目前临床以手术治疗并辅以术后放、 化疗为主要治疗手段,但对晚期肠癌效果并 不显著。人参皂苷是从中药人参中提取的具有抗癌 作用的主要活性成分,以往的研究表明其能诱导细 胞分化和凋亡而发挥抗肿瘤作用。国内外文献先后 报道人参皂苷Rh2对多种肿瘤细胞如人肝癌细胞SK2HEP21、 乳腺癌细胞及白血病细胞HL60等具有 抑制增殖和诱导凋亡作用。本实验旨在研究人参皂 苷Rh2对人结肠癌细胞增殖的抑制作用。1 资料与方法 1. 1 药品与试剂 人结肠癌细胞株S W620和

6、LO2VO购自上海中国科学院细胞库。胎牛血清购自Hyclone公司, F12和L215培养基购自吉诺公司,噻 唑蓝(MTT)购自AMERSCO公司,人参皂苷Rh2购 自中国药品制品检定所。1. 2 细胞培养 细胞S W620单层接种在含10%胎 牛血清的L215培养液中,细胞LOVO单层接种在含10%胎牛血清的F12培养液中, 37, 5% CO2培养 箱中培养。1. 3 实验方法 1. 3. 1 细胞增殖抑制实验 收集对数生长期的S W620和LOVO细胞,以1105/L密度接种于96 孔培养板中,每孔100l,待细胞贴壁后加入终浓度 为20、30、40、50、60、70、80、100mol

7、的Rh2,每个浓 度设平行孔4个,于37, 5%CO2培养箱中继续培 养24、48和72小 时,每 孔 加 入5mg/mL的MTT20L,继续培养4小时后,离心弃上清,加入150L DMSO溶解,酶标仪490nm处检测OD值,计 算药物的体外生长抑制率( IR) I R = (1 -给药孔平 均值/对照孔平均值)100% ,计算50%抑制率时 所对应的药物浓度( IC50 )。1. 3. 2 细胞形态学观察 上述细胞在加入MTT之 前,倒置显微镜照相,记录细胞形态学变化。1. 4 统计学方法 采用SPSS13. 0进行统计学分 析,所有数据用(?xs)表示,采用t检验。2 结 果 664浙江中

8、西医结合杂志2010年第20卷第8期 Zhejiang J ITCWM (Vol120 No18 2010)2. 1 人参皂苷Rh2对人结肠癌细胞株S W620和LOVO生长的抑制作用 不同浓度Rh2作用于细胞 后不同时间,细胞毒作用呈明显的时间和剂量依赖 性,见图15。Rh2对S W620细胞的IC50为36mol/L,而对LOVO细胞的I C50为40mol/L(作用时间均为24小时)。2. 2 细胞形态观察 加药组细胞体积变小、 变形出现皱缩、 变圆、 脱落现象,细胞核固缩凝块,见图67。764浙江中西医结合杂志2010年第20卷第8期 Zhejiang J ITCWM (Vol120

9、No18 2010)易桂枝汤之甘草,倍生姜而成黄芪桂枝五物汤。全方旨在用益气方法来补虚行气,温煦活血,共奏益气 通阳温脉、 调畅营卫气血之功,气行血行,则血痹自 愈。该方仍有酸甘化阴,辛甘化阳,在内补益气血阴 阳,在外调和营卫之意。用黄芪易甘草,除了由于甘 草之甘缓外,更重要的是黄芪的补益作用远大于甘 草。诚如明 徐彬金匮要略论注 所述:“立法之意,重在引阳,故嫌甘草之缓小,若黄芪之强有力 耳。 ” 黄芪配芍药,有形之血,生于无形之气,故“ 血 脱者,益其气 ”;黄芪配桂枝调营卫、 通经络、 利气 血、 除血痹,使气血运行周身而止痛。故用黄芪在于 其为补药之长,益气作用强。历代医家都认为生黄芪

10、偏于生肌固表,炙黄芪偏于补中益气。血痹根本 是在于气血不足,根据金匮要略 脏腑经络先后 病脉证第一 曰:“ 夫病痼疾,加以卒病,当先治其卒 病,后乃治其痼疾也。 ” 所以血痹病出现肌肤麻木不 仁,如风痹状等症状,不能只祛风,而应从气血根本上治疗。炙黄芪甘温作用加强,是在生品的基础上加大补中益气的作用。因此,炙黄芪既能补偿甘草的作用,继续发挥桂枝汤调和气血的作用,又能更大 程度补气生血。气血充盛,正气就能源源不断地赴 表抗邪,卫气充足,腠理致密,虚邪贼风也就难以乘 虚而入。炙黄芪既能解决根本矛盾,又能改善表虚 汗出的问题,岂不一举两得,何必削弱其补中的作 用,以生黄芪固表来抵御外邪?况且仲景已倍

11、用生姜来加强桂枝的温煦之力,助桂枝走表以散外邪。 全方正如清 陈念祖金匮方歌括 说:“ 此即桂枝 汤去甘草之缓,加黄芪之强有力者,于气分中调其 血,更妙倍用生姜以宣发其气,气行则血不滞而痹 除,此夫唱妇随之理也。 ”综上所述,笔者认为黄芪桂枝五物汤选用炙黄芪 治疗血痹证优于生黄芪。血痹乃形气不足之证候,其 主因则由气虚感邪之后而致血行不利,故用甘温益 气,补气活血之法。即 灵枢 邪气脏腑病形 所云: “ 阴阳形气俱不足,勿取以针,而调以甘药 ” 之意。收稿日期: 2010204206(上接第467页)3 讨 论 以往研究显示,人参皂苷Rh2作为抗肿瘤作用 非常显著的中药单体,可以通过降低细胞内

12、Ca2 +浓度抑制PKC的转位和激活,进一步抑制细胞内PKC蛋白的表达,最终阻碍PKC介导的增殖信 号传导过程1 ,抑制肿瘤细胞增殖,同时抑制端粒 酶活性,使肿瘤细胞的端粒长度不能维持而进入衰 老并最终死亡2 。Rh2可通过线粒体途径诱导细胞凋亡3 ,且其作用后使DNA含量较多的S期细胞数量减少,而DNA含量较少的G1期细胞数量增 多4 ,进一步发挥阻滞细胞周期的作用。同时Rh2 是特异性抑制P2gp功能的逆转剂5,一定程度提高 肿瘤对多种化疗药物的敏感性,减少化疗药物的临 床用药剂量和毒副作用6, 7。我们研究发现,人参皂苷Rh2单体对结肠癌细胞株S W062和LOVO的 生长有抑制作用,且

13、与时间和浓度呈依赖性。同时, 还发现Rh2有体外诱导细胞凋亡的作用,显微镜下 观察细胞出现浓缩、 变圆、 脱落等细胞凋亡形态学改 变。本研究结果表明,人参皂苷Rh2单体有抑制结肠癌细胞增殖和诱导其凋亡的作用,有潜在治疗结 肠癌的应用价值,但其具体机制尚有待于进一步 研究。参 考 文 献1 曾小莉,涂植光.人参皂苷Rh2对人肝癌细胞S MMC2721信号传导的影响 J .中华肝脏病杂志, 2004, 12(9) : 5652566.2 Zeng XL, Tu ZG . In vitro induction of differentiation byginsenoside Rh2 in S MMC

14、27721 hepatocarcinoma cell lineJ . Pharmacol Toxico, 2003, 93(6) : 2752283.3 Fei XF,WangBX, Tashiro S, et al . Apototic effects of gin2senoside Rh2 on human malignant melanoma A 3752S2cellsJ . Acta Phar macol Sin, 2002, 23(4) : 3152322.4 周桂华,孟艳,李扬,等.人参单体皂苷Rh2对前列腺癌细胞株PC23细胞移行周期的影响J .中国病理生理杂志, 2002, 1

15、8(7) : 7232825.5 张晖,王华庆,张会来,等.人参皂苷Rh2逆转P2gp介导的MCF27/ADM多药耐药性的基础研究J .肿瘤,2007, 27(5) : 3652369.6 焦玉莲,王强修,李建峰,等.人参皂苷Rh2增强紫杉醇诱导Hela细胞的凋亡 J .中华肿瘤防治杂志,2006, 13(21) : 623221626.7 侯毅鞠,袁忠海,郭素红,等.人参皂苷Rh2对Ara2c诱导HL60细胞增殖抑制和凋亡作用的影响J .山东医药杂志, 2009, 49(23) : 14215.收稿日期: 2010203226674浙江中西医结合杂志2010年第20卷第8期 Zhejiang J ITCWM (Vol120 No18 2010)