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1、北京工商大学毕业论文（设计）编号： 1002070109 毕业论文(设计)题目： 院（系） 食品学院 专 业 食品科学与工程 学生姓名 成 绩 指导教师 （职称） 讲师 2013 年 5 月北京工商大学毕业论文（设计）诚信声明本人郑重声明：所呈交的毕业设计(论文)是我个人在导师指导下, 由我本人独立完成。有关观点、方法、数据和文献等的引用已在文中指出,并与参考文献相对应。据我查证，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表和撰写的研究成果，也不包含为获得其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。我承诺，论文中的所有内容均真实、可信。如在文中涉及到抄袭或剽窃行为，本人愿承担由此
2、而造成的一切后果及责任。毕业论文(设计)作者签名： 签名日期： 年 月北京工商大学毕业论文（设计）摘要摘要红曲的药用价值和保健功效日益引人关注，其中洛伐他汀作为红曲主要的调脂因子成为科研热点和红曲产业发展的重点。聚酮化合物 Monacolin K 是其中一种高效的降胆固醇药物，由红曲菌和土曲霉次级代谢产生，本实验研究红曲霉的代谢产物 Monacolin K，通过对红曲霉次级代谢产物的测定，我们确定它产生 Monacolin K 最多的生长期，然后我们对其菌液进行 RNA 提取，通过对RNA 的逆转录，我们得到 cDNA，进行 PCR 扩增，验证 Mokf 和 Mokh 两段目的基因的存在，以及
3、它们对红曲霉代谢产生 Monacolin K 的重要作用。对红曲菌功能基因组的深入研究，以及相应遗传转化体系的建立与完善，我们还需更加努力。关键字：红曲 Monacolin K PCR RNA 提取 红曲霉北京工商大学毕业论文（设计）Abstract The medicinal value and health care function of red rice is becoming more and more attractive to people, Lovastatin as red rice main lipid factor become research hot spot and
4、 focus of red rice industry development. Monacolin K, one of potent cholesterol-lowering polyketide compounds, could be produced by Monascus spp and Aspergillus terreus. we experiment on Monacolin K which is one of monascus metabolites. According to the determination of monascus secondary metabolite
5、s，We determined the growing period when it produce Monacolin K fastest. Then we extract RNA on its microbial. Based on the reverse transcription of RNA, we obtain cDNA, then we amplify cDNA using PCR. We validate the existence of two aim genes Mokf and Mokh and their importance to monascus producing
6、 Monacolin K . With the further study on Monascus functional genomics, as well as the establishment and improvement of the corresponding genetic transformation system, we have to work harder.Key words：Monacolin K red rice PCR extract RNA monascus北京工商大学毕业论文（设计）第一章第一章 绪论绪论.71.1 红曲和红曲霉 .71.1.1 红曲和红曲霉的概
7、述.71.1.2 红曲和红曲霉的发展前景 .71.2 红曲霉的生物学特征 .101.2.1 红曲霉的分类 .101.2.2 红曲霉的形态学特征 .101.3 红曲霉的代谢产物 .111.3.1 莫纳克林 K .111.3.2 红曲红素.131.3.3 桔霉素.141.4 红曲霉的培养.141.4.1 固态发酵 .141.4.2 液态发酵 .151.5 洛伐他汀（Monacolin k）.151.5.1 他汀化合物的简述.151.5.2 他汀类化合物的结构.161.5.3 红曲洛伐他汀.161.6 研究内容和意义 .17第二章第二章 实验材料与方法实验材料与方法.182.1 实验材料 .182.
8、1.1 实验所用菌种.182.1.2 实验所用培养基.182.1.3 主要仪器和试剂药品 .182.2 实验方法 .202.2.1 菌种培养.202.2.2 菌落观察及菌落生长情况及代谢产物测定.212.2.3 DNA 的提取及检测 .21北京工商大学毕业论文（设计）2.2.4 RNA 的提取 .222.2.5 逆转录 RNA 成 cDNA（建立 20ul 反应体系）.242.2.6 PCR 扩增逆转录得到的 cDNA.25第三章第三章 实验结果与分析实验结果与分析.263.1 实验结果 .263.1.1 菌落形态观察.263.1.2 菌种生长曲线.273.1.3 莫纳克林 K 代谢情况.27
9、3.1.4 红曲霉 DNA Pcr 扩增琼脂糖凝胶荧光观察（mokf 和 mokh）.283.1.5 红曲霉种子液 RNA 提取结果.293.2 实验结果分析 .293.3 注意事项 .303.3.1 培养菌中的相关事项.303.3.2 提取 RNA 和 DNA 中的相关事项：.30第四章第四章 结论与展望结论与展望.314.1 结论 .314.2 展望 .32致谢致谢.34参考参考文文献献.35附录附录.36文献翻译文献翻译.39文献文献原原文文.52第一章第一章 绪论绪论1.11.1 红曲和红曲霉红曲和红曲霉1.1.1 红曲和红曲霉的概述红曲和红曲霉的概述红曲是以籼米为原料采用现代生物工程技术分离出的优质红曲霉菌(Monascus purpureus)经液体深层发酵而成，是一种纯天然、安全性高、有益于北京工商大学毕业论文（设计）人体健康的食品添加剂。红曲生产历史悠久，是我国传统的发酵食品，也是现代社会应用广泛、药食同源的保健品。目前关于红曲定义的范围有所延伸，广义的红曲是指以红曲霉为菌种发酵(包括固态和
