人教版教学课件课题一 微生物的实验室培养 课件

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1、专题2 :微生物的培养与应用了解有关微生物及培养基的基础知识， 进行无菌技术的操作，进行微生物的培养。一、知识目标：掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和平 板划线法等基本操作技术，熟练、规范地 进行无菌操作，成功地培养微生物。无菌技术的操作。三、课题重点和难点：二、技能目标：一、基础知识：（一）培养基 人们按照微生物对营养物质的不同需求， 配制出供其生长繁殖的营养基质。（1）按物理状态分：固体培养基和液体培养 基。其中固体培养基用于菌种保存及分离、鉴 定菌落、活菌计数等，液体培养基常用于发酵 工业。 （2）按功能分：选择培养基和鉴别培养基。 （3）按成分分：天然培养基和合成培养基。1.培养基的类型

2、和用途液体培养基与固体培养基选择培养基:从微生物群中选择 具有特定表型的细胞.使之进行繁 殖所用的培养基,称为选择培养基. 加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物天然培养基有血清、 血浆、和组织提取液 （如鸡胚和牛胚浸液 ）。 优点：营养成分丰富 ，培养效果好 缺点：来源受限;成分 复杂，影响对某些实 验产物的提取和实验 结果的分析;易发生支 原体污染;根据细胞生存所需物质的 种类和数量，用人工方法模 拟合成的。合成培养基主要成分是 氨基酸、维生素、碳水化合 物、

3、无机盐和其它一些辅助 物质。优点：标准化生产，组分 和含量相对固定;成本低 缺点： 缺少某些成分，不 能完全满足体外细胞生长需 要。 合成培养基:天然培养基：2.不同的微生物往往需要采用不同的培养 基配方 (参考教材附录内容)3.不管哪种培养基，一般都含有水、碳源 、和氮源、 无机盐、等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营 养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需，而 自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基 酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气等的要求。 营养物 质定义作用主要来源碳源凡能提 供所需 碳元素 的物质构成生物 体的细胞 物质和一 些代谢产 物，有些 是异养生 物的能源 物质无机化

4、合物：CO2、 NaHCO3 有机化合物：糖类、脂 肪酸、花生粉饼、石油 等营养物 质定义作用主要来源氮源凡能提供 所需氮元 素的物质合成蛋白质、 核酸以及含氮 的代谢产物无机化合物： N2、NH3、铵盐 、硝酸盐 有机化合物： 尿素、牛肉膏 、蛋白胨等生长因 子生长必不 可少的微 量有机物酶和核酸的组 成成分维生素、氨基 酸、碱基等二、无菌技术二、无菌技术1.无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中， 所有防止杂菌污染的方法。无论是随后将要 学到的倒平板、平板划线操作，还是稀释涂 布平板法，其操作中的每一步都需要做到“ 无菌”，即防止杂菌污染。只有熟练、规范 地进行无菌操作，才可能成

5、功地培养微生物 。 （）消毒定义：指使用较为温和的物理或化学方法仅 杀死物体表面或内部一部分对人体有害的 微生物。（不包括芽孢和孢子）2.消毒与灭菌的概念及两者的区别 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休 眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣 的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以 后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度 、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.孢子 在生物体的一定部位产生一种特殊的生殖 细胞叫孢子。孢子的特点是能直接长成新 个体。 （2）灭菌的定义：使用强烈的理化因素杀死物体内外 所有的微生物，包括

6、芽孢和孢子，而达 到完全无菌之过程。灭菌消毒技术是微生物有关工作中最 普通也是最重要的技术。1、煮沸消毒法:100煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 下煮30min或 80 下煮15min 3、化学药剂消毒法:用75%酒精进行皮肤 消毒;氯气消毒水源 4、紫外线消毒 (1)消毒的方法：3.常用的消毒与灭菌的方法1、灼烧灭菌(2)灭菌的方法：2、干热灭菌：160- 170 下加热1-2h 。3、高压蒸气灭菌： 100kPa、121 下 维持15-30min.最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀 灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体 ，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏

7、。有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防 止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧 瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也 可采用硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的 其他微生物不能通过。1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他 外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌 。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。三、实验操作1.制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）牛肉

8、膏 5.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1000ml，调 节PH为7.07.2。在肉汤培养基中加入1520g的琼 脂，即制成牛肉膏蛋白胨固体培养基。1计算 2称量 3溶化 4灭菌 5倒平板操作步骤倒平板技术倒平板技术1.培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时 ，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基 的温度？答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶， 感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可 以进行倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物 污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小

9、心将培养 基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板 还能用来培养微生物吗？为什么？答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固 后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置， 既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之 间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板 培养微生物。2、纯化大肠杆菌接种方法有： 平板划线法和稀释涂布平板法平板划线法:通过接种环在琼脂固体培 养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种 逐步稀释分散到培养基的表面.在数次划线后,可以分离到由一个细胞 繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就 是菌落.微生物的接种技术微生物的

10、接种技术平板划线操作菌落： 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖 时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定 形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落细菌的菌 落特征因 种而异平板划线时不能划破培养基的原因 一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离 单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的 菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条 状的菌落。1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前 都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需 要灼烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接 种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划 线前灼烧接种环是为了杀死上次划线

11、结束后， 接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种 环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而 通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数 目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧 接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避 免细菌污染环境和感染操作者。2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后 再进行划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操作时，为 什么总是从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起 始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能 使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少 ，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。稀释涂布平板法涂布平板操作

12、涂布平板的所有操作都应在火焰附近 进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要 求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？应从操作的各个细节保证“无菌”。例如 ，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要 接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围 等等。四、课题成果评价 培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同（一）培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温12 d后无菌落 生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制 备。 （二）接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致， 并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求 的；如果培养基上出现

13、了其他菌落，则说明接种过程中， 无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录菌种的保存菌种的保存1、临时保藏： 接种到固体斜面培 养基，菌落长成后 置于4冰箱保存。2、长期保存： 甘油冷冻管藏法本课题知识小结:【典例解析】例1关微生物营养物质的叙述中，正确的 A.是碳源的物质不可能同时是氮源 B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要 针对微生物的具体情况分析。对于A、B选项，它的表达是 不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可 同时是氮源，如NH4HCO3；有

14、的碳源同时是能源，如葡萄 糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于C选 项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样。如二氧化碳 ，可作为自养型微生物的碳源；NaHCO3，可作为自养型微 生物的碳源和无机盐；而NaCl则只能提供无机盐。对于D 选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NH3可为硝 化细菌提供能量和氮源。答案：D例2下面对发酵工程中灭菌的理解不正确不正确的是 A.防止杂菌污染 B.消灭杂菌 C.培养基和发酵设备都必须灭菌 D.灭菌必须在接种前答案：B解析：灭菌是微生物发酵过程的一个重要环节。A 说的是灭菌的目的，因为发酵所用的菌种大多是单一 的纯种，整个发酵过程不能混入其他微生物（杂菌） ，所以是正确的；B是错误的，因为灭菌的目的是防止 杂菌污染，但实际操作中不可能只消灭杂菌，而是消 灭全部微生物。C是正确的，因为与发酵有关的所有设 备和物质都要灭菌；发酵所用的微生物是灭菌后专门 接种的，灭菌必须在接种前，如果接种后再灭菌就会 把所接菌种也杀死。