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1、子宫内膜癌多药耐药子宫内膜癌多药耐药 基因基因 1 1 产物表达及其产物表达及其 临床意义临床意义北京医科大学学报 1999 年第 4 期第 31 卷 论著作者：桂黎明 魏丽惠 富 琪 周 蓉 屠 铮 虞有志 虞 幸单位：北京医科大学人民医院妇科，北京 100044关键词：药物耐受性；子宫内膜肿瘤；P-糖蛋白；基因表达摘 要 目的：探讨子宫内膜癌多药耐药(multidrug resistance 1, MDR1)基因 1 产物 P-糖蛋白(P-gp)表达与子宫内膜癌 MDR 的关系。 方法：用 SP 免疫组化法测定 40 例子宫内膜癌，10 例子宫内膜增殖症和 10 例 正常子宫内膜组织 P-
2、gp表达,并与 PR 受体、细胞分级和临床分期等预后因素进行相关分析。结果： HTSS （1）上述 所有组织均有 P-gp 表达，其中子宫内膜癌 P-gp 强阳性表达率较正常子宫内膜组织高，差异 有 显著性；与子宫内膜增殖症比较，二者差异无显著性。 （2）P-gp 强阳性表达与子宫内膜 癌临床分期、组织病理类型、PR受体以及 5 年生存率无关; 与细胞分级有关，低分化内膜癌 P -gp 强阳性较中、高分化内膜癌 P-gp 强阳性表达高，二者差异有统计学意义。结 论：子宫内膜 癌患者对抗肿瘤药具有先天性抗药性，P-gp 表达是子宫内膜癌化疗疗效不佳的原因之一。中国图书资料分类法分类号 R737.
3、33S tudy on the detection of multidrug resistance 1 gene productP-gp in endometrial carcinomas and its clinical significanceGUI Li-Ming， WEI Li-Hui， FU Qi， ZHOU Rong， TU Zheng， YU You-Zhi， et al(Department of Gynecology, Peoples Hospital, Beijing Medical University, Bei jing 100044)ABSTRACT Objectiv
4、e: To study the clinical significance of P-gp expression in endometrial carcinoma.Methods: The expres sion of P-gp on paraffin section in 40 cases of endometrial carcinoma, 10 of endometrial neo plasia and 1 0 of normal endometrium were detected by SP immunohistochemical methods. Results : The expre
5、ssion of P-gp was found in all tissues mentioned above. The strongly positive staining in the endometrial carcinoma was significantly higher than t hat of the normal endometrium and associated with carcinoma cell grades, not ass oc iated with clinical prognostic factors.Conclusion: That th ere are p
6、rimary multidrug resistance for endometrial carcinoma which may be on e of the reasons for chemotherapy failure.MeSH Durg tolerance Endometrial neoplasms P-glycoprotein Gene expression多药耐药（multidrug resistance, MDR）指肿瘤细胞对一种抗 肿瘤药产生耐药性后， 对结构与作用机制不同的抗肿瘤药产生交叉耐药的现象。这种现象可以是先天的，也可以是 化疗诱导产生的。目前认为其共同的生物学基础是
7、MDR1 基因产物P-gp 过量表达，或与肿瘤 细胞 内药物结合或直接从细胞膜上排除抗肿瘤药物，从而降低药物对肿瘤细胞的毒性所致 1，2 。通 过对人、鼠实体瘤、细胞系的一系列研究，已证明仅 P-gp 就足以将细胞内抗肿瘤药物泵出而 致耐药性；耐药程度及细胞内抗肿瘤药物浓度均与 P-gp 表达水平密切相关3，4 。进一步 研究还发现，MDR 基因表达水平与激素受体有关，激素可逆转肿瘤细胞的多药耐药性 5，6 。子宫内膜癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一，晚期预后差，同其他恶性肿瘤一样，化疗也 是子宫内膜癌临床治疗的重要手段之一。目前有关子宫内膜癌 MDR 的研究报道不多，我们用 S P 免疫组化法对
8、子宫内膜癌、子宫内膜增殖症和正常子宫内膜组织 MDR1 基因产物 P-gp 表达水 平的研究，以助于了解子宫内膜癌耐药性的起因、检测，进而指导临床治疗，提高子宫内膜 癌患者的治疗率和生存率。1 材料与方法1.1 病例和标本随机选取 19901997 年间本院住院手术的子宫内膜癌患者40 例，平均年龄 59.7 岁，其中腺癌 30 例、腺鳞癌 5 例、棘腺癌和透明细胞癌各 2 例，浆乳癌 1 例， 子宫内膜增殖症和正常子宫内膜组织各 10 例；平均年龄分别为 54.3 岁和 56.1 岁；术前均无放 疗、化疗史；术后病理诊断按 FIGO（1988）标准分期7 ；随访 672 个月。1.2 染色方
9、法取上述患者术中标本，用 100 g.L1 中性福尔马林固定，石蜡包埋。石蜡 切片厚 5 m ，HE 染色，确定诊断。抗 P-gp 单克隆抗体 JSB-I 及 SP 试剂盒均为丹麦 DAKO 公司产品。石 蜡 切片经脱蜡和微波加热处理后，依次进行免疫组化染色：110(体积比)正常马血清封闭，1 50(体积比)抗 P-gp 单克隆抗体(兔抗马)JSB-I 及 1400(体积比)生物素标记的马抗鼠IgG 和 1400(体积比)链 酶抗生物素蛋白-过氧化物酶 复合物，最后用 DAB 显色，苏木素复染，酒精脱水，二甲苯透明，封片。每一步骤间都用 T ris-HCl 缓冲液冲洗。每批均设阴性对照，实验条
10、件严格一致。1.3 结果判断参照 Consantine 等5的标准。用半定量的方法，高倍镜(200)下判定结果， 细 胞浆或细胞膜上有黄色或棕黄色颗粒的肿瘤细胞数超过 10为 P-gp 表达阳性，否则为阴性 ，其 中阳性细胞数达10%25,1;26%50,2；51%75,3；76%100，4； 染色强度 ：黄色，1；棕黄色，2；黄褐色，3。大于或等于 5为强阳性表达；小于或等于 4 ，为弱阳性表达。1.4 统计学处理2 检验，Log-Rank 检验和确切概率计算。2 结果2.1 P-gp 在子宫内膜癌、子宫内膜增殖症及正常内膜组织中的表达全部子宫内膜癌、子宫内膜增殖症和正常子宫内膜组织都有 P
11、-gp 表达,P-gp 强阳性 表 达率分别为 775%（3140）,600%（610）和 100%（110） 。3 组患者中 ，子宫内膜癌组织与子宫内膜增殖症之间 P- gp 强阳性表达差异无显著性(P0.05)；与正常子宫内膜组织(仅 1 例分泌期子宫内膜 P-g p 呈强阳性表达)比较，二者 P-gp 强阳性表达率差异有显著性(P0.001)。2.2 子宫内膜癌 P-gp 表达与预后因素的关系子宫内膜癌 P-gp 表达强弱与病理分期、组织病理分型及PR 受体表达无关，与子宫内膜 癌 病理分级有关，G1 期和 G2期与 G3 期 P-gp 强阳性表达分别为 32.1%和 75%，二者差异有
12、 统计学意义(P0.05)，见表 1。2.3 子宫内膜癌 P-gp 强阳性表达与预后的关系随访所有子宫内膜癌患者，共 10 例死亡，其中 P-gp 强阳性者死亡 7 例(7/26)；P-gp 弱阳 性者死亡 3 例(3/14)，5 年生存率分别为 50.91%和 58.34%,P0.05，二者差异无统 计学意义。3 讨论70 年代 Biedler 等3首先在体外发现 MDR 现象,之后许多学者研 究表明，MDR 现象与 MDR 1 基因调控的 P-gp 过量表达有关，是恶性肿瘤化疗取得成功的主要障碍之一。据相关资料统 计 发现,90%以上的恶性肿瘤患者死亡或多或少都与耐药有关。我们用 SP 免
13、疫组化方法探讨正 常子宫内膜、子宫内膜增殖症和子宫内膜癌患者 P-gp 表达情况，发现上述所有组织都表达 P -g p。与同为激素相关肿瘤的卵巢组织和乳腺组织相比,子宫内膜组织 P-gp 表达更具有普遍性, 证 实子宫内膜癌不需要化疗诱导即先天对化疗耐药8，9,这一结论与临床 观察子宫内膜癌通 常对化疗不敏感相吻合。此结果与 Schneider 等8和 Kuo 等 10用同 样方法检测的结果一致,较Constanine 等5报道的子宫内膜癌 P-gp 高 62%;与 Thiebaut 等报道的子宫无 P-gp 表达相反。此外,还发现子宫内膜癌 P-gp 强阳性表达较正常 子宫内膜高,二者差异有
14、显著性(P0.001),说明 P-gp 表达可能与子宫内膜癌的生物 学行为有关。从表 1 可看出，子宫内膜癌 P-gp 表达强度与病理分期、组织类型以及孕激素受体 有无关 系不确切，但与子宫内膜癌分化程度有关，分化越差,肿瘤细胞 P-gp 表达越高，低分化子宫 内膜癌细胞 P-gp 强表达(75%)较中高分化子宫内膜癌(32.1%)高，二组差异有统计学意义( P0 .05)，与 Kodama 等11多数作者研究的结果一致。至于子宫内膜 癌 P-gp 表达强度能否像 肾癌一样作为临床预后因素，还有待探讨。Chan 等12研究认为,P-gp 表达阳性 只能作为非先天性耐 药肿瘤(如儿童的软组织肉瘤
15、)的预后指标,而对先天性耐药肿瘤，P-gp 表达只 能说明这类 肿瘤普遍耐药,子宫内膜癌属于后一类肿瘤。关于孕激素受体浓度与 P-gp 表达关系研究不多 。有作者报道孕激素通过受体可调节 P-gp 的表达，逆转 P-gp 引起的耐药性13 。我们分别测 定了 16 例 PR(+)和 13 例 PR()患者的 P-gp 强阳表达率(分别为 68.7%和 38.6%)，2 检验无 统计学意义,这可能与病例数过少有关，明确的结论有待进一步的了解。表 1 子宫内膜癌 P-gp 表达与临床预后因素 的关系Table 1 The relationship between P-gp ex pression
16、inendometrial carcinoma and clinical prog nostic factorP-gp strongpositiveP valuePathological stage 5/15NS 9/25Grade G1G29/280.05 G39/12 Receptor condition PR()5/13NS PR(+)11/16Tissue types H/M D.A.C.17/23NS Others14/17 NS, no significance; H/M d.A.C., middle-high differential adenocarc inoma; others including low differential adenocarcinoma, adenosquamous carcinoma, clear cell carcinoma and serous papillary ade
