《维甲酸诱导腭裂小鼠出生前后Wnt通路相关信号分子表达》由会员分享，可在线阅读，更多相关《维甲酸诱导腭裂小鼠出生前后Wnt通路相关信号分子表达（31页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、维甲酸诱导腭裂小鼠出生前后W n t 通路相关 信号分子的表达硕士生姓名：指导教师：专业名称：吴慧 肖晶教授口腔基础医学摘要背景：维甲酸诱导腭裂小鼠是探讨基因与环境相互作用导致先天性腭裂发生的常用且可靠动物模型之一。维甲酸功能是通过与其膜上受体结合，经细胞浆内的维甲酸结合蛋白运输到核内与相应受体结合，最终通过基因转录调控来实现的，W n t 、S 1 1 1 1 和B M P 等信号分子通路中的重要基因都被证明参与到维甲酸致腭裂的发病过程中，维甲酸导致腭裂的机制是直接影响神经嵴细胞( 颌面部突起的起源)的游走和增殖，主要通过干扰D N A 合成而抑制腭突间充质细胞的增殖，与W n t 5 a
2、,S h h ，B M P 4 和F G F 1 0 等大多数基因敲除小鼠的腭裂表现型和发生机制相似。目的：验证本课题组前期完成的维甲酸诱导腭裂小鼠腭组织全基因组筛选中获得的W n t 信号分子通路相关基因G S K - 3 1 3 、F z d 3 和1 3 - T r C P ，观察其在正常腭突发育和腭裂形成出生前后表达变化。探讨维甲酸诱导腭裂小鼠出生后对W n t 通路的影响。方法：按照1 0 0m g k g 体重管饲I C R 小鼠维甲酸建立小鼠腭裂模型。在无菌环境下将E 1 8 ( e m b r y od a y l 8 , E 1 8 ) 的胎鼠和出生后P N O ( p o
3、s t n a t a ld a y0 ，P N 0 ) 的幼鼠，于体式显微镜底下取出腭组织。应用S Y B R * G r e e nI 实时定量P C R 技术及免疫组织化学方法检测G S K - 3 1 B ，F z d 3 及p - T r C P 的表达水平与部位。结果：l 、出生前后G S K 3 D ，F z d 3 及1 3 - T r C P 基因表达水平改变G S K 3 D 及F z d 3 在出生前后均有表达，P N 0 期表达均高于E 1 8 期，其中R A组具有统计学意义( P O 0 5 ) ；p - T I C P 在出生前后均有表达，其中W T 组有统计学意义
4、( P 0 0 5 ) 。在E l8 期R A 组和W T 组的G S K 。3 p 与F z d 3 表达水平无显著性差异( P 0 0 5 ) ，而1 3 - T r C P 在R A 组表达水平下调，有统计学意义口 O 0 5 ) A tt h eE l8s t a g e ，t h em R N Ae x p r e s s i o ni nt h eW Tg r o u pa n dt h eR Ag r o u po fG S K - 3 1 3 a n dF z d 3i sl i t t l ec h a n g ep O 0 5 ) T h ee x p r e s s i
5、o no f 3 T r C Pi nW Tg r o u pa n dR Ag r o u pa tEl8s t a g ei ss i g n i f i c a n t 口 o 0 5 ) 。( 2 ) G S K - 3 1 3m R N A 在实验组和正常对照组中的表达改变E 1 8 期，R A 组的表达稍低于W r 组，无显著性差异( P O 0 5 ) ；在P N 0 期，R A 组表达水平高于W T 组，具有统计学差异( P o 0 5 ) 。1 4( 2 ) F z d 3m R N A 在实验组和正常对照组中的表达改变E 1 8 期，R A 组的表达水平稍高于W T 组，无
6、显著性差异( P O 0 5 ) ；在P N 0期，R A 组表达水平显著高于W T 组，具有统计学差异( P o 0 5 ) ，W r 组显著性差异( P 0 0 5 ) ；实验组中F z d 3P N O的表达水平高于E 1 8 ( P 0 0 5 ) ，有报道F z d 3 也可作为W n t 5 a 的受体，W n t 5 a 既能活化经典的W n t p e a t e n i n 通路又能活化非经典的W n t C a 2 + 通路，而且W n t C a 2 + 通路与W n t Y p c a t e n i n 通路相互作用，W n t C a 2 + 通路活化后可能阻断W
7、n V l B c a t e n i n 通路。提示维甲酸在出生后上调F z d 3 在腭的表达水平即上调了W n t 非经典通路间接抑制W n t 经典通路的活性。本研究借助R e a l - t i m eR T - P C R 及免疫组织化学技术从分子生物学水平探讨维甲酸诱导腭裂小鼠出生前后W n t 通路信号分子的m R N A 在正常腭及维甲酸诱导腭裂的表达变化，及出生后正常腭及维甲酸诱导腭裂的蛋白表达部位。然而，在维甲酸诱导腭裂发生出生后的新生小鼠中，维甲酸是通过什么机制上调了G S K - 3 1 3 、J 3 - T r C P 及F z d 3 三者的m R N A 的表达
8、水平? F z d 3 在腭的时空变化时参与W m 通路中的哪些通路? 是否是特异性地作用于某个W r i t 蛋白，而这三个信号分子之间是否存在相互协同作用等问题都使W n t 通路显得更加复杂。对于W n t 通路中相关信号分子在成体组织及胚胎发育中的作用机制的研究更加明朗化将对未来的干细胞进行组织修复先天缺损疾病成为可能。1 8结论本研究结果表明在出生后维甲酸诱导腭裂小鼠腭上皮中G S K 3 B 、F z d 3 和I B - T r C P 等W n t 通路抑制因子表达水平上调，提示了维甲酸可能通过调控上述基因而对W n t 信号分子通路的活化具有抑制作用。1 9参考文献1 L i
9、F ，C h o n gZ Z ，M a i e s eK W i n d i n gt h r o u g ht h eW N Tp a t h w a yd u r i n gc e l l u l a rd e v e l o p m e n ta n dd e m i s e 川H i S t o lH i s t o p a t h 0 1 2 0 0 6 ；2 1 ( 1 ) ：1 0 3 - 2 4 2 G r i g o r y a nT ，W e n dP ，K l a u sA ，B i r c h m e i e rW D e c i p h e r i n gt h e
10、f u n c t i o no f c a n o n i c a lW n ts i g n a l si nd e v e l o p m e n ta n dd i s e a s e ：c o n d i t i o n a ll o s s - a n dg a i n - o f - f u n c t i o nm u t a t i o n so fb e t a - c a t e n i ni nm i c e 川G e n e sD e v 2 0 0 8 ；2 2 ( 1 7 ) ：2 3 0 8 - 4 1 3 李珊珊，肖晶W n t 家族基因敲除小鼠胚胎发育异常的
11、研究现状叨大连医科大学学报2 0 0 8 ；3 0 ( 6 ) ：5 7 0 - 2 4 W a r n e rD R , S m i t hH S ，W e b bC L ，G r e e n eR M ，P i s a n oM M E x p r e s s i o no f W n t si nt h ed e v e l o p i n gr o u t i n es e c o n d a r yp a l a t e J h a tJD e vB i 0 1 2 0 0 9 ；5 3 ( 7 ) ：11 0 5 - 1 2 5 J u r i l o f fD M ，H a r
12、r i sM J ，M c M a h o nA P , C a r r o l lT J ，L i d r a lA C W n t 9 bi st h em u t a t e dg e n ei n v o l v e di nm u l t i f a c t o r i a ln o n s y n d r o m i cc l e f tl i pw i t ho rw i t h o u tc l e f tp a l a t ei nA W y S nm i c e ，a sc o n f m n e db yag e n e t i cc o m p l e m e n t
13、a t i o nt e s t J B i r t hD e f e c t sR e sAC l i nM o lT e r a t 0 1 2 0 0 6 ；7 6 ( 8 ) ：5 7 4 - 9 6 N i e m a n nS ，Z h a oC ，P a s c uF ，S t a h lU ，A u l e p pU ，N i s w a n d e rL ，W e b e r 儿，M u l l e rU H o m o z y g o u sW N T 3m u t a t i o nc a u s e st e t r a - a m e l i ai nal a r g
14、 ec o n s a n g u i n e o u sf a m i l y J A mJH u mG e n e t 2 0 0 4 ；7 4 ( 3 ) ：5 5 8 - 6 3 7 D o b l eB W , W o o d g e t tJ R G S K 一3 ：t r i c k so ft h e 缸a d ef o ram u l t i - t a s k i n gk i n a s e J JC e l lS c i 2 0 0 3 ；11 6 ( p t 7 ) ：l1 7 5 8 6 8 H o c f l i c hK P ，L u oJ ，R u b i e
15、E A ，T s a oM S ，J i no ，W o o d g e a 瓜R e q u i r e m e n tf o rg l y c o g e ns y n t h a s ek i n a s e 3 b e t ai nc e l ls u r v i v a la n dN F - k a p p aBa c t i v a t i o n J N a t u r e 2 0 0 0 ；4 0 6 ( 6 7 9 1 ) ：8 6 - 9 0 9 L i uK J ，A r r o nJ R , S t a n k u n a sKC r a b t r e eG R ,
16、 L o n g a k e rM T C h e m i c a lr e s c u eo fc l e f tp a l a t ea n dm i d l i n ed e f e c t si nc o n d i t i o n a lG S K - 3 b e t am i c e j N a t u r e 2 0 0 7 ；4 4 6 ( 7 1 3 1 ) ：7 9 8 2 10 D o b l eB W , P a t e lS ，W o o dG A ，W o o d g e t tJ R F u n c t i o n a lr e d u n d a n c yo fG S K - 3 aa n dG S K - 3 pi nW n t b e t a - c a t e n i ns i g n a l i n gs
