流式细胞仪的三大应用范围

《流式细胞仪的三大应用范围》由会员分享，可在线阅读，更多相关《流式细胞仪的三大应用范围（63页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、 参考文献：参考文献： 临床流式细胞分析王建中主编临床流式细胞分析王建中主编 流式细胞术与生物医学左连富主编流式细胞术与生物医学左连富主编 现代免疫学实验技术周汝麟 沈关心 主编现代免疫学实验技术周汝麟 沈关心 主编 思考题：思考题： 流式细胞仪的三大应用范围流式细胞仪的三大应用范围 1，流式细胞仪的免疫荧光检测；，流式细胞仪的免疫荧光检测； 2，流式细胞仪的细胞周期检测；，流式细胞仪的细胞周期检测； 3，流式细胞仪的细胞分选；，流式细胞仪的细胞分选； 联系方式：联系方式： 治道楼治道楼1003室室54237572 孙淑惠孙淑惠流式细胞仪的应用流式细胞仪的应用 名称名称: 流式细胞术流式细胞术

2、:(flow cytometry)荧 光 激 光 分 类 仪荧 光 激 光 分 类 仪 ( f l u o r e s c e n t activated cell sorter, FACS)流式细胞仪流式细胞仪:(flow cytometer, FCM)机型机型 本教研室有两台流式细胞仪，都是本教研室有两台流式细胞仪，都是BD公司公司(BECTON-DICKINSON)生产的。生产的。 1.分析型流式细胞仪：分析型流式细胞仪：BD FACSCalibur 检测标记细胞的百分比含量。检测标记细胞的百分比含量。 同时检测四色不同染色的细胞。同时检测四色不同染色的细胞。 2.分选型流式细胞仪：分选

3、型流式细胞仪：BD FACSAria 无菌获取阳性细胞，以进一步培养。无菌获取阳性细胞，以进一步培养。 同时获取四色不同染色的细胞。同时获取四色不同染色的细胞。定义定义 流式细胞术是以高能量流式细胞术是以高能量激光激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞单细胞或颗粒，测量其产生的散射光和发射或颗粒，测量其产生的散射光和发射荧光荧光的强度，从而对细胞（或微粒）进行定性或定量检测的一种细胞分析技术。由于流式细胞术可同时鉴别单个细胞上的多种抗原，而且在极短时间内分析大量细胞，因此在医学基础研究和临床疾病的诊断、治疗及发病机制研究中得到了广泛应用。的强度，从而对细

4、胞（或微粒）进行定性或定量检测的一种细胞分析技术。由于流式细胞术可同时鉴别单个细胞上的多种抗原，而且在极短时间内分析大量细胞，因此在医学基础研究和临床疾病的诊断、治疗及发病机制研究中得到了广泛应用。工作原理工作原理将经特异性荧光染料染色后的待测细胞放入样品管中，细胞在气体的压力下进入充满鞘液的流动室将经特异性荧光染料染色后的待测细胞放入样品管中，细胞在气体的压力下进入充满鞘液的流动室, 在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱，通过激光器激发出散射光信号和荧光信号在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱，通过激光器激发出散射光信号和荧光信号, 由各自的激光检测器

5、收集信号由各自的激光检测器收集信号, 再经光电倍增管再经光电倍增管(PMT) 将信号放大将信号放大, 转变为电信号后由计算机系统进行分析转变为电信号后由计算机系统进行分析. 散射光是细胞本身折射散发的物理参数与细胞样本的染色无关. 荧光信号是细胞样本经标有特异荧光素染色后经激光激发发出的荧光.散射光是细胞本身折射散发的物理参数与细胞样本的染色无关. 荧光信号是细胞样本经标有特异荧光素染色后经激光激发发出的荧光.特点特点 1,各种组织细胞均可用于分析,如血液、骨髓、体液中的细胞、培养细胞等，实体组织经处理后制成单细胞悬液均能分析。1,各种组织细胞均可用于分析,如血液、骨髓、体液中的细胞、培养细胞

6、等，实体组织经处理后制成单细胞悬液均能分析。 2,测量速度快，每分钟能测量数千至数万个细胞。2,测量速度快，每分钟能测量数千至数万个细胞。 3,可进行多参数的分析, 可同时检测四种不同荧光染色的细胞。新一代的流式可同时检测十多色的细胞。,可进行多参数的分析, 可同时检测四种不同荧光染色的细胞。新一代的流式可同时检测十多色的细胞。 4,可将目的细胞无菌分选出来做进一步的培养。4,可将目的细胞无菌分选出来做进一步的培养。流式细胞仪的主要应用范围 1，流式细胞仪的免疫荧光检测；，流式细胞仪的免疫荧光检测； 2，流式细胞仪的细胞周期检测；，流式细胞仪的细胞周期检测； 3，流式细胞仪的细胞分选；，流式细

7、胞仪的细胞分选；（一）在免疫学中的应用（一）在免疫学中的应用-重要的免疫学实验技术 抗原抗原(antigen，Ag)是指能刺激机体免疫系统诱导免疫应答并能与应答产生如是指能刺激机体免疫系统诱导免疫应答并能与应答产生如抗体抗体或致敏淋巴细胞发生特异反应的物质。或致敏淋巴细胞发生特异反应的物质。 抗原多为相对分子质量在抗原多为相对分子质量在10,000以上的蛋白质和多糖大分子以上的蛋白质和多糖大分子.人体免疫功能分型人体免疫功能分型 人体免疫功能人体免疫功能 特异性免疫非特异性免疫特异性免疫非特异性免疫 细胞免疫体液免疫自然杀伤细胞细胞免疫体液免疫自然杀伤细胞 （T细胞）（细胞）（B细胞）（细胞）

8、（NK细胞）细胞） CD3，CD4，CD8 CD19 CD16+56淋巴细胞免疫表型分析淋巴细胞免疫表型分析 根据淋巴细胞的功能及膜表面标记，主要分为根据淋巴细胞的功能及膜表面标记，主要分为T淋巴细胞、淋巴细胞、B淋巴细胞和淋巴细胞和NK细胞三个亚群，但三者在普通光学显微镜下不能区分，血细胞分析仪也无法鉴别，只有用流式细胞仪结合单克隆抗体技术才能准确分类计数淋巴细胞亚群。细胞三个亚群，但三者在普通光学显微镜下不能区分，血细胞分析仪也无法鉴别，只有用流式细胞仪结合单克隆抗体技术才能准确分类计数淋巴细胞亚群。经常测定的淋巴细胞免疫标记包括：经常测定的淋巴细胞免疫标记包括： T淋巴细胞 ：淋巴细胞

9、：CD3、CD4、CD8, T 辅助细胞 ：辅助细胞 ：CD3+CD4+, T 抑制细胞：抑制细胞：CD3+CD8+, B 淋巴细胞：淋巴细胞：CD19、或、或CD20， NK 细胞 ：细胞 ：CD56、CD16， 活化细胞：， 活化细胞：CD25、HLA-DR、 CD40L、CD71。流式检测人外周血淋巴细胞亚群的正常参考范围流式检测人外周血淋巴细胞亚群的正常参考范围 CD3+ 70.012.0% CD3+CD4+CD8- 40.09.0% CD3+CD4-CD8+ 30.08.0% CD3-CD56+(NK) 12.08.0% CD19+ 8.03.0% CD4+/ CD8+比值：比值：

10、1.0 - 2.5File: 2005/2/28 319 Zho Acquisition Date: 28-FeQuad% Gate% Tota UL23.309.77 UR1.860.78 LL16.246.81 LR58.60 24.57File: 2005/2/28 319 Zho Acquisition Date: 28-FeQuad% Gate% Tota UL7.742.16 UR1.760.49 LL30.558.53 LR59.96 16.74R1File: 2005/2/28 348 Zhou Acquisition Date: 28-FebQuad % Gated% Tot

11、a UL25.175.29 UR1.240.26 LL7.611.60 LR65.9813.87R2File: 2005/2/28 348 Zhou Acquisition Date: 28-FebQuad % Gated% Tota UL53.7911.20 UR1.540.32 LL3.750.78 LR40.928.52File: 2003/12/5 PBMC-2 Chen.004 Acquisition Date: 05-Dec-03QuadEvents% Gated UL36711.07 UR2056.18 LL117035.28 LR157447.47File: 2003/12/5

12、 PBMC-2 Chen.00 Acquisition Date: 05-Dec-03QuadEvents% Gated UL51619.25 UR220.82 LL127247.46 LR87032.46File: 2006/7/20 Zou.003 Acquisition Date: 20-Jul-06QuadEvents% Gated % Total X Geo Mean UL500.670.506.57 UR2583.442.5833.19 LL503667.1150.364.24 LR216028.7821.6038.51File: 2006/7/20 Zou.004 Acquisi

13、tion Date: 20-Jul-06QuadEvents% Gated % Total X Geo Mean UL3745.213.744.56 UR410.570.4181.44 LL397555.3539.756.45 LR279238.8727.9262.56T细胞在胸腺内的发育过程细胞在胸腺内的发育过程 CD34+ CD2- CD4- CD8- TCR- CD2+ CD4- CD8- TCR- CD2+ CD3+ CD4- CD8- TCR+/- CD1+ CD2+ CD3+ CD4+ CD8+ TCR+/-CD2+ CD3+ CD4+ CD8- TCR+ CD2+ CD3+ CD

14、4 - CD8+ TCR+1，原发性免疫缺陷病：，原发性免疫缺陷病：T淋巴细胞缺乏，或淋巴细胞缺乏，或B淋巴细胞缺乏或减少。淋巴细胞缺乏或减少。 2，HIV感染与感染与AIDS：CD4+淋巴细胞的百分比和数量减低。淋巴细胞的百分比和数量减低。 3，SARS： T淋巴细胞（淋巴细胞（CD3+细胞）绝对数减少最为显著。细胞）绝对数减少最为显著。 4，自身免疫性疾病：，自身免疫性疾病：系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、自身免疫干炎等患者系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、自身免疫干炎等患者CD4+/CD8+细胞比值异常。细胞比值异常。 5，造血干细胞移植后免疫重建：，造血干细胞移植后免疫重建：NK细胞首先开始

15、升高，随后细胞首先开始升高，随后T淋巴细胞和淋巴细胞和B淋巴细胞开始恢复，淋巴细胞开始恢复，CD4+/CD8+细胞比值约在第二年才能逆转（细胞比值约在第二年才能逆转（1）。）。6，移植后免疫监测：，移植后免疫监测：动态监测血液动态监测血液CD2+、CD3+、CD25+表达的变化，当其持续增高时提示发生移植排斥反应；表达的变化，当其持续增高时提示发生移植排斥反应； CD4+/CD8+细胞比值持续减低表示移植后感染，若比值细胞比值持续减低表示移植后感染，若比值0.2时应停用免疫抑制剂，以免继发严重感染而导致移植失败。时应停用免疫抑制剂，以免继发严重感染而导致移植失败。 7，实体肿瘤疗效观察：，实体

16、肿瘤疗效观察：恶性肿瘤患者治疗前恶性肿瘤患者治疗前CD3+细胞数量、细胞数量、CD4+/CD8+细胞比值常减低，化疗或放疗有效时则可逐渐恢复或达到正常水平。淋巴细胞免疫表型正常或治疗后能恢复正常者预后常较好。细胞比值常减低，化疗或放疗有效时则可逐渐恢复或达到正常水平。淋巴细胞免疫表型正常或治疗后能恢复正常者预后常较好。（二）在血液学中的应用：（二）在血液学中的应用：概念：白细胞分化抗原概念：白细胞分化抗原(DC) CD (cluster of differentiation)指的是分化群或分化簇。在使用指的是分化群或分化簇。在使用CD命名细胞膜表面免疫标志的初期，他专职白细胞膜上的抗原或抗原识别的抗体，故又称白细胞分化抗原。命名细胞