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1、荷移反应分光光度法测定阿司咪唑杜黎明3张丽芳 杨宝刚 胡鹏娟(山西师范大学分析测试中心,临汾041004)摘 要 研究了电子受体7, 7, 8, 82 四氰基对本醌及四氰基乙烯与阿司咪唑的荷移络合物的光谱性质。发现阿司咪唑与这两种电子受体极易发生荷移反应并生成两种稳定的络合物,吸收波长由218 nm和226 nm分别红移到850和393 nm。 阿司咪唑的浓度在0. 116 mg/L和0. 320 mg/L范围内符合比尔定律,据此建立了测定阿司咪唑的高选择性的分光光度法。方法用于市售药物中阿司咪唑含量的测定,其回收率为99. 12%100. 6%。关键词 阿司咪唑, 7, 7, 8, 82 四
2、氰基对本醌,四氰基乙烯,荷移反应,分光光度法2004204204收稿; 2005201224接受 本文系山西省自然科学基金资助项目(No. 20041030)1 引 言阿司咪唑(astemizole, AST)是目前国内外临床应用较广泛的组胺H12 受体拮抗剂,具有口服吸收快、 血药浓度高、 药效持久等特点。有关阿司咪唑分析方法已见文献报道的有分光光度法14 、 荧光光谱法5 、 高效液相色谱法6、 薄层色谱法7 和毛细管电泳法8 。电荷迁移应用于药物的分子光谱学研究近年来得到迅速发展914 。而有关阿司咪唑的荷移分光光度法研究尚未见文献报道。本实验分别研究了阿司咪唑与荷移试剂7, 7, 8,
3、 82 四氰基对苯醌(TCNQ)及四氰基乙烯(TCNE)荷移络合物的吸收 光谱性质,发现阿司咪唑与这两种电子受体极易发生荷移反应并生成稳定的n2 络合物,与阿司咪唑相比,所得络合物的吸收波长均发生了较大幅度的红移,有效地消除药物制剂中赋形剂对阿司咪唑测定的 干扰。据此建立了一种测定药物制剂中阿司咪唑含量的分光光度法。该方法操作简便,选择性好,灵敏度高,经样品测定,结果令人满意。2 实验部分2. 1 仪器与试剂UV22201型紫外 2 可见分光光度计(日本岛津公司) ; I MPACT2410型傅里叶变换红外光谱仪(美国Nicolet公司) , KBr压片; SHA2B数显恒温水浴器(常州国华电
4、器有限公司)。7, 7, 8, 82 四氰基对苯醌(美国Sigma公司)配成3. 010- 3mol/L标准丙酮溶液,该溶液在4 下至少放置1星期是稳定的;四氰基乙烯(美国Sigma公司)配成3. 010- 3mol/L乙醇标准溶液(必须当天配制) ;阿司咪唑对照品(中国药品生物制品检定所,貭量分数为99. 5% )配制成浓度为100 mg/L的乙腈标准贮备液。所需标准工作液用乙腈稀释贮备液制得。标准贮备液在4 下放置几星期是稳定的。其余试剂均为分析纯。2. 2 实验方法2. 2. 1 TCNQ法 移取适量阿司咪唑溶液,置于10 mL的容量瓶中,加入1. 0 mL的TCNQ溶液,然后用丙酮定容
5、至刻度,混匀,溶液在25. 00. 5 下恒温30 min后,用1 cm比色皿,以试剂空白为参比,在850 nm处测其最大吸光度,在同一条件下,绘制已知浓度阿司咪唑与吸光度的标准工作曲线。2. 2. 2 TCNE法 移取适量阿司咪唑溶液,置于10 mL的容量瓶中,加入1. 0 mL的TCNE溶液,然后用乙醇定容至刻度,混匀,溶液在25. 00. 5 下恒温20 min后,用1 cm比色皿,以试剂空白为参比,在393 nm处测其最大吸光度。在同一条件下,绘制已知浓度阿司咪唑与吸光度的标准工作曲线。第33卷2005年8月分析化学(FENXIHUAXUE) 研究简报Chinese Journal o
6、fAnalytical Chemistry第8期113911422. 2. 3 用于红外光谱测定的络合物的制备 将5 mL 0. 1 mol/L阿司咪唑乙睛溶液和5 mL 0. 1 mol/L 的荷移试剂(处于相应溶剂中, TCNQ为丙酮, TCNE为乙醇)加入到50 mL圆底烧瓶中,搅拌30 min,溶 剂在减压条件下被蒸发,最终剩余的油状残余物用CaCl2干燥剂干燥。3 结果与讨论3. 1 吸收光谱 由图1可见,阿司咪唑在丙酮和乙醇溶液中的最大吸收峰分别位于218 nm和226 nm处。阿司咪 唑在丙酮溶液中与TCNQ发生荷移反应,所形成的络合物吸收光谱最大吸收波长从218 nm红移至84
7、4nm。而阿司咪唑与TCNE在乙醇溶液中所形成的络合物吸收光谱最大吸收波长却从226 nm红移到393 nm (图2)。吸收光谱特征的变化说明了药物与荷移试剂间络合物的形成。3. 2 温度和时间的影响 在1060 范围内研究了温度对荷移络合物的影响。所有形成的络合物在50 以下是稳定的,高 于50 由于较高温度使络合物分解而使吸光度降低,同时发现在1040 范围内,所测药物络合物的 荧光强度随温度变化不大,因此,药物的测定在25. 00. 5 下进行。 进一步发现完全形成TCNE和TCNQ络合物分别需要20和30 min,所形成的络合物在24 h是稳定的。3. 3 溶剂的选择 在所确定的温度、
8、 时间条件下,分别选用水、 甲醇、 乙醇、 异丙醇、 丙酮、 乙腈和氯仿作溶剂进行实验, 结果表明: TCNE法和TCNQ法分别选用乙醇和丙酮作溶剂来测定,吸光度达到最大且恒定。3. 4 荷移试剂浓度的影响 在110- 5110- 2mol/L范围内研究了荷移试剂TCNQ和TCNE的浓度对吸光度的影响,随着荷移试剂浓度的增加,吸光度依次增强,当浓度达到310- 4mol/L及再增加时响应值基本不变。实验 结果表明, 1. 0 mL的TCNQ溶液即可满足反应要求。因此,阿司咪唑所选用的荷移试剂浓度均为310- 4mol/L。3. 5 反应机理探讨 阿司咪唑分子中的仲氮原子有一对孤对电子,可作为电
9、子供体。TCNQ和TCNE是一个很强的平 面型电子受体,在适当的溶剂中与阿司咪唑可形成n2 型荷移络合物。用平衡移动法和曲线交叉法测定络合物的组成比均为11。所形成的络合物可表示如下:0411 分 析 化 学第33卷3. 6 荷移络合物结构的红外光谱表征 与阿司咪唑相比,所得络合物的吸收波长均发生了较大幅度的红移,表明了n2 型荷移络合物的形 成。两种络合物的形成也被红外光谱所证实。在对荷移络合物进行红外测定时,通常采用比较反应前 后电子给予体或电子受体的振动频率变化来判断荷移络合物是否形成,电子给予体或电子受体的振动 频率的降低被作为发生荷移反应的证据15 。TCNQ的红外光谱在2220、1
10、540和860 cm- 1处有强的吸收峰,分别相应于vCN、 芳香烃vCC和1, 42 二取代苯CCH。在AST2TCNQ络合物的光谱中,这些峰就 变成了2200、1430和840 cm- 1。TCNE的红外光谱在2260和1600 cm- 1处有强的吸收峰,分别相应于vCN和烯烃vCC。 在AST2TCNE络合物的光谱中,这些峰就变成了2170和1500 cm- 1。3. 7 标准曲线 在上述实验条件下,通过浓度与吸光度的关系来绘制阿司咪唑与TCNQ及TCNE形成的络合物的 标准曲线。两种分析方法的标准曲线相关系数(见表1)表明它们呈良好的线性关系;较小的方差值表 明,在回归线附近有较小的分
11、散度。表1 标准曲线相关系数 Table 1 Related parameters of standard curves体系 System测量波长 Determination wavelength ( nm )回归方程 Regression equation线性范围 Linear range (mg/L)相关系数 Correlation coefficient (r)方差 Variance (S20)摩尔吸光系数 Molar absorptivitye (Lmol- 1cm- 1)AST2TCNQ850A= 0.0165 +0.0446C0. 1160. 99950. 0062. 16104A
12、ST2TCNE393A=0.0153 +0.0539C0. 3200. 99980. 0092. 431043. 8 药物制剂的测定 将10片阿司咪唑药片研碎,准确称取药粉的1/10重(相当于含有3. 0 mg阿司咪唑)置于10 mL容量瓶中,溶解在2 mL的乙腈中,超声震荡3 min,再用乙腈定容至刻度,过滤溶液弃去10 mL前滤液,取10 mL后续液用乙腈稀释100倍,混匀,并用乙腈制备所需溶液,然后按以上方法进行。 该方法用于测定阿司咪唑片剂,平行测定5次,药物的测定结果令人满意(表2)。为了检测方法的 有效性,采用标准加入法测定了药物的回收率(见表2)。用本法与文献2 方法进行比较,在
13、t和F的 测定中,发现本法与文献法的计算值和理论值(置信度为95% )之间并没有明显的差异,这表明两者间 有相似的精密度和准确度。表2 阿司咪唑片剂分析结果及回收实验(n=5) Table 2 Analytical results and recovery tests of astemizole tablet(n=5)药物批号 Batch No.TCNQ法 7, 7, 8, 82Tetracyanoquinodimethane method 测得值 Found mg/片 ( tablet)相当于标示量 Equivalent nominal content (% )S . D回收率 Recove
14、ry (% )TCNE法 Tetracyanoethylene method 测得值 Found mg/片 ( tablet)相当于标示量 Equivalent nominal content (% )S . D回收率 Recovery (% )文献法2Literature method2测得值 Found mg/片 ( tablet)相当于标示量 Equivalent nominal content (% )S . D01090682732. 9397. 720. 56 F=2.31(6.39) t=1. 08 (2. 78)99. 22. 8797. 920. 56 F=3.12(6.39
15、) t=1. 20 (2. 78)99. 72. 9498. 101. 1203050418232. 9598. 411. 23 F=1.84(6.39) t=1.21(2.78)100. 62. 9397. 620. 56 F=2.18(6.39) t=1.56(2.78)99. 12. 9197. 120. 633 西安杨森制药有限公司产品(Xian2Janssen Phar maceuticalLtd)1411第8期杜黎明等:荷移反应分光光度法测定阿司咪唑 3. 9 干扰物质的影响 实验选择经常在片剂中使用的赋形剂淀粉、 乳糖、 蔗糖、 葡萄糖、 果糖和硬脂酸镁对在阿司咪唑分光 光度法测
16、定中可能存在的一些干扰进行了研究。对含有一定量 阿司咪唑(1. 0 mg/L)和含有不同浓度赋形剂的样品进行测定,结果表明:对于TCNQ法,赋形剂/阿司咪唑 1000倍时不干扰测定; TCNE 法,赋形剂/阿司咪唑500倍时不干扰测定。References1 Sastry C S P, Naidu P Y .Talanta,1998, 45 (5) : 7957992 Saadet G, FeyyazO.Phar m. B iom ed. Anal . ,2001, 21 (324 ) : 5115213 Alwarthan A A, Al2Obaid A M.J.Phar m. B iom ed. Anal. , 1996, 14 (5) : 5795824 Sanc R T, Aruna P K, Renu S . A, Shallesh S R.Indi
