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1、kg)。各给药组按20ml/kg灌胃给药,正常对照组给予等体积的 蒸馏水,连续10d。末次给药后60min,各鼠腹腔注射1%冰醋 酸10ml/kg, 2min后,开始记录20min内小鼠扭体次数。1. 4. 4 对血虚症小鼠血红蛋白及红细胞总数的影响 小鼠雌 雄各半,体重252g。每鼠均于失血前用比色法分别测定Hb 值,细胞计数法测RBC,同时眼眶静脉丛采血约0. 3ml,每天放 血1次,连续放血3d测定RBC、Hb值,以RBC、Hb值显著减少 为造模成功。取血虚症小鼠分为4组,分别为模型对照组、 葡萄 糖酸亚铁(20ml/kg)、 妇珍片两个剂量组(1. 2、0. 6g生药/kg) , 同时
2、选取正常小鼠10只,作为正常对照组。各给药组按20ml/kg灌胃给药,对照组给予等体积的蒸馏水,连续10d,第11d眼 眶静脉丛采血测RBC、Hb值。2 结果2. 1 对催产素所致大鼠子宫收缩的影响 与模型组比较,妇 珍片(21022g生药/ml)剂量组可显著降低催产素引起的大鼠 子宫的收缩频率和收缩幅度, 11022生药g/ml剂量组可显著降 低催产素引起的大鼠子宫的收缩幅度,结果见表1。表1 妇珍片对催产素所致大鼠子宫收缩的影响(?xs, n =10)组别药物浓度(g/ml)频率(次/10min)幅度(mm)正常对照6. 02. 33 35. 81. 53 3 模型对照12. 42. 17
3、9. 217. 6 妇珍片 21022生药6. 52. 43 330. 312. 43 妇珍片 11022生药10. 42. 842. 826. 23与模型组 3P 0. 05,3 3P 0. 012. 2 对大鼠子宫韧带毛细血管交叉网点开放数的影响 与正 常对照组比较,妇珍片1. 2g生药/kg剂量组可显著提高毛细血 管网点交叉数,结果见表2。表2 妇珍片对大鼠子宫韧带毛细血管交叉网点开放数的影响(?xs, n =10)组别剂量( /kg)毛细血管交叉网点开放数(个)给药前给药后 正常对照 4. 21. 24. 41. 4 复方丹参片3. 0g4. 31. 06. 00. 93 妇珍片 1.
4、 2g生药4. 00. 75. 90. 83 妇珍片 0. 6g生药4. 10. 96. 01. 4 与正常对照组比较 3P 0. 05,3 3P 0. 01 (下同)2. 3 对醋酸引起的小鼠扭体反应的影响 与正常对照组比 较,妇珍片1. 2g生药/kg剂量组可显著降低醋酸引起小鼠的扭 体次数,结果见表3。表3 妇珍片对醋酸引起的小鼠扭体反应的影响(?xs, n =10)组 别剂 量( /kg)扭体次数 正常对照 45. 27. 1 复方阿司匹林片0. 2g25. 110. 23 3 妇珍片 1. 2g生药28. 37. 33 3 妇珍片 0. 6g生药38. 48. 2 2. 4 对血虚症
5、小鼠Hb及RBC的影响 与模型对照组比较, 妇珍片1. 2g生药/kg剂量组可显著提高的Hb和RBC的总数, 结果见表4。表4 妇珍片对血虚症小鼠Hb及RBC的影响(?xs, n =10)组 别剂 量( /kg)Hb(OD值) 失血前给药后RBC(1012个/L) 失血前给药后 正常对照 0. 520. 060. 580. 073 31. 230. 151. 190. 143 3 模型对照 0. 560. 070. 410. 06 1. 190. 130. 920. 09 葡萄糖酸亚铁20ml0. 610. 070. 510. 073 31. 200. 191. 010. 073 妇珍片 1.
6、 2g生药0. 590. 070. 540. 093 31. 160. 211. 010. 063 妇珍片 0. 6g生药0. 580. 100. 570. 12 1. 170. 220. 980. 08 与模型组比较 3P 0. 05,3 3P 0. 013 讨论现代医学认为痛经其发病机制与环氧化酶(COX)有关,由 于子宫内膜及血液中前列腺素含量增高致子宫过分强烈收缩, 使宫腔内压增高,并使子宫肌壁缺血而产生剧痛1。妇珍片主要由益母草、 当归、 川芎的组成,我们的实验结果表明,妇珍片可 抑制催产素引起的子宫平滑肌的收缩,进而缓解子宫平滑肌的 痉挛,能增加子宫毛细血管网点交叉数,改善子宫微循
7、环,缓解 子宫肌壁的缺血状态,能显著增加血虚小鼠的血红蛋白及红细 胞总数,具有补血的作用,并且具有镇痛作用。说明妇珍片对痛 经的治疗,可能是多层次、 多靶点的,其作用的分子机制,还有待 进一步研究。参考文献1 Drosdzol A, Skrzypulec V. Dysmenorrhea in pediatric and adolescent gy2naecology, 2008; 79 (7)499503临床研究穿心莲内酯对牙龈卟啉单胞菌抑制作用的临床观察赵莉琳,刘 阳3(重庆医科大学第一附属医院口腔科,重庆 400038)摘 要 目的:观察穿心莲内酯对慢性牙周炎患者牙龈卟啉单胞菌的抑制作用。
8、方法: 30名牙周健康者和90例患者随机分 为4组:正常组、 对照组、 穿心莲内酯滴丸组和穿心莲内酯片组,分别给予安慰剂、 穿心莲内酯滴丸(0. 15g/次, 3次/d)和穿心莲内酯68中药药理与临床2009; 25 (6)3通讯作者片(0. 15g/次, 3次/d)。3d后,取龈下菌斑应用实时定量PCR法检测龈下菌斑细菌总数和牙龈卟啉单胞菌数目。结果:穿心莲内酯 滴丸和穿心莲内酯片能显著减少龈下菌斑中细菌总数和牙龈卟啉单胞菌数量,降低牙龈卟啉单胞菌在细菌总量中的构成比;穿心 莲内酯滴丸的作用强于穿心莲内酯片。结论:穿心莲内酯滴丸和穿心莲内酯片能明显降低慢性牙周炎患者牙龈卟啉单胞菌数量, 穿心
9、莲内酯滴丸的作用强于穿心莲内酯片。关键词 穿心莲内酯滴丸;穿心莲内酯片;牙龈卟啉单胞菌;牙周炎牙周炎的是一种慢性感染性疾病,病因十分复杂,普遍认 为其是一种细菌诱导的慢性感染性疾病牙周组织损害与多种 龈下微生物有关,其中牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingival2is)被认为是慢性牙周炎最重要的致病菌之一1,2。牙周炎患者龈下菌斑中检出,在牙周健康人群中也能检测到。牙周炎非特 异性菌斑学说表明:只有当致病微生物数量到达某个临界值时 才会引起牙周组织不可逆损害。穿心莲对慢性牙周炎的治疗 作用未见报道,我们发现穿心莲能有效治疗慢性牙周炎,本研 究拟观察穿心莲内酯对慢性牙周炎患者龈
10、下菌斑中细菌总量 和牙龈卟啉单胞菌数目以及构成比的影响,为穿心莲内酯的临 床应用提供实验室依据。1 临床资料1. 1 一般资料 选择2007年6月 2009年6月在我院门诊 慢性牙周炎者,经PCR检测龈下菌斑牙龈卟啉单胞菌均为阳性 者90例,年龄在25岁 50岁,男48例,女42例,平均年龄37.8岁。慢性牙周炎的诊断标准采用Armitage (1999年)的标准, 受试者的纳入要求为:年龄2075岁,无全身系统性疾病; 3个 月内无牙周病治疗史,无抗菌药物和非甾体类抗炎药物服用 史;妇女无妊娠;全口存留牙不少于16颗,其中至少有4颗磨 牙,磨牙中至少有两个位点PD超过4mm。1. 2 方法
11、1. 2. 1 分组 90例患者随机分为三组:对照组,穿心莲内酯 滴丸(天津天士力制药股份有限公司生产, 0. 15g/粒, 24粒/袋, 批准文号为国药准字Z20040078,生产批号为20060503)组、 穿 心莲内酯片(海南惠普森医药生物技术有限公司生产, 0. 05g/ 片,批准文号为国药准字ZF20000162,生产批号为20060501)治 疗组。穿心莲内酯滴丸组、 穿心莲内酯片治疗组分别给予穿心 莲内酯滴丸(0. 15g/次, 3次/d) ,、 穿心莲内酯片(0. 15g/次, 3 次/d)治疗3d,对照组给予安慰剂3次/d。另选取30牙周健康 者作为正常组。1. 2. 2 实
12、时定量PCR法检测牙周菌斑牙龈卟啉单胞菌数目 和细菌总数 慢性牙周炎患者口内磨牙牙周袋最深位点(病变 位点)取样。用无菌刮匙去除龈上菌斑,无菌棉球隔湿,干燥, 插入两根40号标准化灭菌纸尖直至牙周袋底,静置10s,纸尖 取出后置于含有1ml PBS的EP管中, - 20 冻存备用。按下列 步骤抽提细菌DNA: (1)菌体裂解:加入6l 50 mg/ml的溶菌 酶, 37 作用2h。再加2 mol/L NaCl 50l, 10% SDS 110l, 20mg/ml的蛋白酶K 3l, 50 作用3h或37 过夜。(2)抽提: 菌液均分到两个1. 5ml EP管,加等体积的酚 氯仿 异戊醇(2524
13、1) ,混匀,室温放置510min。12000rpm离心10min。抽提两次。(3)沉淀:加0. 6倍体积的异丙醇,混匀,室 温放置10min。12000rpm离心10min。(4)洗涤:沉淀用75%的 乙醇洗涤。(5)抽干后,溶于50l ddH2O中。标准品的制备: 普通PCR产物胶回收、 纯化后,连接PMD182T载体,转化入DH5感受态细菌,扩增后抽提质粒,紫外分光光度计检测吸光度,计算拷贝数。荧光定量聚合酶链反应参见试剂盒说明书:1lDNA样本作为PCR扩增模板,阴性对照扩增模板为去离子水;扩增条件为94 预变性3 min;随后9430 s,退火温度30s, 7220 s,共40个循环
14、;最后72 延伸10 min。采用“primerpremier 5. 0“软件设计引物(表1) ,引物由上海博尚公司合成。表1 引物序列长度(bp)正义链反义链T M()通用331GAGGTGTCGGCTTAAGTGGACGGGCGGTGTGTACAA61. 5P. gingivalis83ACCTTACCCGGGATTGAAATGCAACCATGCAGCACCTACATAGAA 61. 51. 2. 3 PCR特异性检测特异引物特异性检测 以P. gingival2isATCC 33277菌株作为阳性对照,以伴放线放线杆菌、 血链球菌、 伤寒杆菌、 绿脓杆菌、 大肠杆菌、 变形杆菌、 产气荚
15、膜杆菌、 金黄色葡萄球菌、 痢疾杆菌为阴性对照,等体积的超纯水作为空白对照。将实验标本按时间顺序编号,查随机数字表,抽取50%样本做重复性实验,扩增时设置阳性对照和空白对照,检测PCR结果的可靠性。2 结果2. 1 PCR扩增的特异性、 重复性 细菌通用引物扩增后所有的参考细菌及临床样本都得到预期长度的片段,表明所用临床样本中都有细菌DNA的提取,并且足够用于PCR扩增。P. gin2givalis特异引物扩增后只有P. gingivalis得到预期片段,其余细菌无可见条带。图1 细菌通用引物与P. gingivalis特异性引物扩增产物电泳图1为P. gingivalis特异性引物扩增产物电
16、泳条带;2、3、4、5、6、7、8为通用引物扩增产物电泳条带2. 2 穿心莲内酯滴丸对牙龈卟啉单胞菌的抑制作用 本实验采用实时定量PCR法检测牙周菌斑牙龈卟啉单胞菌数目和细菌总数,结果发现穿心莲内酯滴丸和穿心莲内酯片均能显著减少龈下菌斑中细菌总数和牙龈卟啉单胞菌数量,降低牙龈卟啉单胞菌在细菌总量中的构成比,穿心莲内酯滴丸的疗效比穿心莲内酯片更显著,见表2。78中药药理与临床2009; 25 (6)表2 穿心莲内酯滴丸、 穿心莲内酯片对牙龈卟啉单胞菌的抑制作用(?xs, n =30)组别细菌总量(107)P. gingivalis(105)P. gingivalis/细菌总量(% ) 正常组 0. 0780. 0140. 00420. 000310.
