《分光光度法测定杜仲雄花和叶中的总黄酮》由会员分享，可在线阅读，更多相关《分光光度法测定杜仲雄花和叶中的总黄酮（5页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、Vol. 37 No. 5 May 2017第 37 卷 第 5 期 2017 年 5 月 中 南 林 业 科 技 大 学 学 报Journal of Central South University of Forestry 2. The Eucommia Engineering Research Center of National Forestry Administration, Zhengzhou 450003, Henan, China)Abstract: To study the optimal method for the determination of total flavon
2、oids content of Eucommia ulmoides, and analyze the differences of total flavonoids content in Eucommia ulmoides male flowers and leaves.The content of total flavonoids in Eucommia ulmoides male flowers and leaves were determined by NaNO2-Al(NO3)3-NaOH method and AlCl3 colorimetric method, respectivl
3、y. The results showed that NaNO2-Al(NO3)3-NaOH method existed interference and the content of total flavonoids is higher, while AlCl3 colorimetric method is easy, highly reproducible, accurate, the absorbency and concentration of Rutin had a good linear in range of 530 ugmL-1 (R2=0.999 7), the avera
4、ge recovery rate was 99.27%, RSD 1.21%, and the method is suitable for mass determination of total flavonoids of Eucommia ulmoides. According to the determination results, the differences of total flavonoids content is larger among different materials and the content of total flavonoids in male flow
5、ers was obviously higher than that in leaves, which could provide a certain reference for the development and utilization of Eucommia ulmoides resources.Keywords: Eucommia ulmoides; male flowers; leaves; total flavonoids; spectrophotometry97第 37 卷中 南 林 业 科 技 大 学 学 报但成本较为高昂。分光光度法测定总黄酮的原理是金属离子与酮羰基、邻位羟
6、基配合形成稳定结构。其中，以 NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 显色法最常用19，AlCl 3比色法也被应用于植物中总黄酮的含 量测定20，但该法在杜仲中总黄酮含量的测定还未见报道。现分别采用 NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 显色法和 AlCl3比色法测定杜仲雄花和叶中的总黄酮含量，并对结果进行比较，以期建立杜仲中总黄酮含量测定的最适方法，同时比较分析杜仲雄花和叶片中总黄酮含量的差异，以期为杜仲资源的开发利用提供参考。1 材料与方法1.1 试验材料供试的杜仲雄花和杜仲叶均采自中国林业科学研究院经济林研究开发中心原阳试验基地杜仲基因库，基因库采用 6 株小区，定植行间距为3 m3
7、m。 雄花是于盛花期分别在树冠中部的东、西、南、北 4 个方向采摘雄花各约 10 簇，叶片是2015 年 7 月分别在树冠中部的东、西、南、北4 个方向对成熟叶片进行采集， 共约20片杜仲叶。样品采集后低温冷藏带回实验室，保存备用。雄花和叶片均采自同一编号的杜仲样株，且长势旺盛、无病虫害。1.2 仪器与试剂 仪器：Cary 300 紫外 - 可见分光光度计（美国安捷伦）；AL204 电子天平（美国 METTLER TOLEDO）；HT-300BQ 型数控超声波清洗器（济宁恒通超声电子设备有限公司）；DHG-91013SA 型电热恒温鼓风干燥箱 ( 上海三发科学仪器有限公司 )；HH-8 数显恒
8、温水浴锅（郑州元强仪器设备有限公司）。 试剂：芦丁标准品（上海源叶生物科技有限公司）；三氯化铝、醋酸钠、冰醋酸、乙醇均为分析纯；水为超纯水。1.3 方 法1.3.1 对照品溶液的制备称取20.0 mg芦丁对照品，105 干燥至恒质量，用 60% 乙醇溶解，定容至 200 mL，配成 100 gmL-1的芦丁标准溶液。 1.3.2 供试品溶液的制备将采集的杜仲雄花和杜仲叶样品在 105下杀青 3 min，然后 60烘干，粉碎过 60 目筛。精密称取杜仲雄花粉末 0.10 g，加入 60% 乙醇，料液比 1 30，超声 30 min，离心后取上清液，以60% 乙醇定容至 10 mL，得杜仲雄花样品
9、提取液，同法制得杜仲叶样品提取液。 1.3.3 检测波长的确定1.3.3.1 NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 显色法准确吸取对照品溶液 1.0 mL，移入 10 mL 刻度比色管中，加入 60% 乙醇 5 mL，分别加入 5%亚硝酸钠溶液 0.5 mL，振摇后放置 6 min，加入 10% 硝酸铝溶液 0.5mL 摇匀后放置 6 min，加入1 molL-1 氢氧化钠溶液 2 mL，用 60 % 乙醇定容至刻度，快速摇匀，室温放置 15 min。同法制得空白液，在 300 600 nm 扫描，发现芦丁对照品溶液在 510 nm 处有最大吸收峰。1.3.3.2 AlCl3比色法准确吸取对
10、照品溶液 1.0 mL，移入 10 mL 刻度比色管中，依次加入 pH 值 3.6 的醋酸 - 醋酸钠缓冲液 3 mL，0.1 AlCl3溶液 3 mL，用 60% 乙醇定容至 10 mL，快速摇匀，室温放置 30 min。同法制得空白液，在 300 500 nm 波长范围内扫描，发现芦丁对照品溶液在 400 nm 处有最大吸收峰。 1.3.4 标准曲线的绘制NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 显色法：准确吸取芦丁对照品溶液 0.5、1、1.5、2、2.5、3 mL，按 1.3.3.1项下的方法进行显色处理，在 510 nm 处测定吸光度，以芦丁浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
11、AlCl3比色法：准确吸取芦丁对照品溶液 0.5、1、1.5、2、2.5、3 mL，按 1.3.3.2 项下的方法进行显色处理，在 400 nm 处测定吸光度，以芦丁浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。2 结果与分析2.1 标准曲线的绘制根据 1.3.4 中的方法，可得 NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 显色法芦丁浓度对吸光度值的线性回归方程为 A=0.015 3C 0.002 7(R2=0.999 5)，表明对照品在 5.0 30 gmL-1范围内线性关系良好。AlCl3比色法芦丁浓度对吸光度值的线性回归方程为 A=0.020 6C 0.014(R2=0.999 7)，表明对照
12、品在 5.0 30 gmL-1范围内线性关系良好。2.2 NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 显色法评价2.2.1 精密度试验吸取芦丁对照品溶液 1.0 mL，按 1.3.3.1 项杜庆鑫，等：分光光度法测定杜仲雄花和叶中的总黄酮98第 5 期下的方法操作，测定吸光度，连续测定 6 次，RSD为 0.53%，表明该方法的精密度良好。 2.2.2 稳定性试验取杜仲雄花样品溶液 1.0 mL，显色后分别在5、10、15、20、25、30 min 测定吸光度，RSD 为0.82%，说明样品显色后 30 min 内稳定性良好。 2.2.3 重复性试验 取 杜 仲 雄 花 样 品 6 份， 按 1.
13、3.2 项 下 的 方法制备供试品溶液，然后测定吸光度，RSD 为0.96%，表明该方法重复性良好。 2.2.4 加样回收率试验精密称取已知含量杜仲雄花样品 6 份，每份0.1 g，分别加入芦丁对照品 1.0 mL，按 1.3.2 项下的方法制备供试品溶液， 测定吸光度， 计算回收率，结果见表 1。r= 213 mmm 100%。式中：r 为回收率，%；m1为样品中总黄酮含量，mg；m2为芦丁加入量，mg；m3为测得量，mg。表 1 加样回收率实验结果 Table 1 Results of recovery tests of total flavonoids样品量 /g样品中总黄 酮含量 /m
14、g芦丁加入 量 /mg测得量 /mg回收率 /%平均回 收率 /%RSD /%0.100 54.185 20.14.283 097.899.220.950.100 34.181 20.14.280 198.90.100 04.178 00.14.278 2100.20.100 14.178 60.14.277 999.30.100 54.186 40.14.285 298.80.100 44.182 90.14.283 2100.3由 表 1 可 知，NaNO2-Al(NO3)3-NaOH 显 色法测定总黄酮的平均回收率为 99.22%，RSD 为0.95%，说明该方法测定杜仲雄花中总黄酮具有
15、较高的回收率。2.3 AlCl3比色法评价2.3.1 精密度试验吸取芦丁对照品溶液 1.0 mL，按 1.3.3.2 项下的方法操作，测定吸光度，连续测定 6 次，RSD为 0.46%，表明该方法的精密度良好。 2.3.2 稳定性试验取杜仲雄花样品溶液 1.0 mL，显色后后分别在 10、20、30、40、50、60 min 测 定 吸 光 度，RSD 为 0.94%，说明样品显色后 60 min 内稳定性良好。 2.3.3 重复性试验 取 杜 仲 雄 花 样 品 6 份， 按 1.3.2 项 下 的 方法制备供试品溶液，然后测定吸光度，RSD 为0.58%，表明该方法重复性良好。 2.3.4
16、 加样回收率试验精密称取已知含量杜仲雄花样品 6 份，每份0.1 g，分别加入芦丁对照品 1.0 mL，按 1.3.2 项下的方法制备供试品溶液， 测定吸光度， 计算回收率，结果见表 2。r= 213 MMM 100%。式中：r 为回收率，%；M1为样品中总黄酮含量，mg；M2为芦丁加入量，mg；M3为测得量，mg。表 2 加样回收率实验结果 Table 2 Results of recovery tests of total flavonoids样品量 /g样品中总黄 酮含量 /mg芦丁加入 量 /mg测得量 /mg回收率 /%平均回 收率 /%RSD /%0.100 22.565 30.12.664 198.899.271.210.100 12.561 00.12.659
