植物石蜡切片一步双重整体染色

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1、福建10一r且一里农学院学报勺ri“赶一r 民l,s(4)565一50 0,19.9o fF住扛n伪11ete植物石蜡切片一步双雷整体染色何 承坤郑伸坤李家慎 ( 福建农学院园艺系 福建农学院植物教研组)摘要本文报道植物标本制片工 艺中的一种新的快速整体染色法.供试的材料经不 同梯度脱水剂(乙醇一正丁醉) 处理7、gh后,直接用正丁醇配制的番红,固绿混合染 色液干4 0、4 2下亘温浸 染2 4h左右,然后通 过乙醇一正乙醇脱水341 1.浸 蜡过程相应作些改进.结 果表明,所用的染料能一沐性地同时进行双重染色,各组 织着色均匀一致,红绿鲜明,分色效果好.该制片法,除染色时间外,自材料的洗涤到

2、浸蜡完成,只需25、3oh,提高了制片的效率,并 能节省大量 的药剂.关健词石蜡切片,番红;固绿,整休双重染色O引言陇物 常规 的石蜡 切片法已才合用10 0乡卜了,形成了一个固定 的操作 程序 ( 李正理,19 78;Mik sche,19了6,郑 国铝,19了8).这种常规制片法是在切片之后染色 的.由于多数植物材样 经过固定液处理后,其颜 色 与包埋 剂石蜡的颜色相近,因此给材料的包埋和修块带来一 定困难,近年 来,不 少植物工作者对 石蜡切片的染色方 法进 行过一些探索,如爱氏苏木精的整体染 色 ( 华 中农学院植物教 研室,1 98 4 );番红固绿的双重整体染色(容寿柏,1982)

3、;一爪常规 制宁 的脱水进 程 中同步 完成了番红固绿二重整体染色等(王承 林,1985).但仍有不足之处,如 把 齐红和 固绿 的染色分二步 进行,操作上 掌握较难;有的采用叔丁醇为脱水剂与配制染色 液的溶 剂,而叔 丁 醇的 凝固点仅为24.。、2 5.5,在 低 温时 操作不 便;有的还存 在仅 能 染单色以及染色不 均有分 段现 象等.找们 在研 究蔬 菜作 物内部结构的过程 中进 行丁包埋前的整体染色 的尝试.切取植物 的各器官,包 括根、茎、叶、花器和果实等材料,经过不 同梯度 的乙醇正丁 醇脱水后,直接用正丁醇为溶 剂 配制 的番红固绿混 合染色剂 浸染,一步 就可完成 双重染色

4、.再 通过乙醇 正丁醉脱水后,进行浸蜡、包埋、切片,实践证明,采 用本方 法,制片一效 果 好,周 期短,了省原材料.现 将制片 流程 与效果报告如下.1制片流程1.1主要试剂的配制工.1.1混合染色剂的配制在干燥 的烧杯内加2、0.8 9番红 和0.29固绿(F luka进口分丈 ),用玻 棒 调匀.注入1ml浓硫 酸,搅拌成糊状后,加人 1 0Oml正丁醇,不 断搅 拌 成紫红色染 色 浪 即可.这 种染色 液可以长期使用.2脱水剂的配制脱水剂是由乙醇与正 丁醇 按4个浓度梯度 配制而成的(表1).收稿日期:19 8 8一01一1656 6福;老农学院学报18卷表1脱水剂的Tab一T七ed

5、ohydrat又公9agont(酉 己DA制eomPo unded-一-一一,一归.,一一,一等Gr aden 住mber蒸馏水(肠)Distilledwater乙醉 (肠)Ethylale ohol正丁醇(肠)n一butan ol脱水剂I脱水荆亚脱水剂l脱水剂WDAIDA亚DAID AF150OO5 04525脱水荆I、l可用。5肠乙醇,脱水剂l用无水乙醇.05外aleoholwa。 似 ,edintheDA丁a t、dDAI,ab,o-lu士ealeoholintheDA1.1.2制片 过程1.2.1固定与洗涤材料的 固定与洗 涤和常规制片法相 同植物的各器官采 用FA A固定 浓固定.脱

6、 水前用7 0%乙醇洗涤3次,侮 次5mi n.1.2.2脱水与透明经 洗涤后的材料在脱水剂I 中停留lh,脱水剂五,皿一各Zh;脱水 剂万24h,其间换12次 ( 依 材 料大 小而定).123染色例 去脱 水 剂开,加入混合染 色 剂仁清液,以盖没材 木:一为度;在4 0、4 2的恒温箱内浸 染2 4h左右.1.2.4.浸洗与脱水倒 去染 色液,用 正丁醇、无水乙醇 (l:1) 浸洗2次。每次6 0m i m;然后再经正 丁醇脱 水2次,侮 次6omin .1.2.5浸蜡把材 料移八10ml烧 杯 中,加入23 ml正丁醉,倒人 次化,蜡,直接 在5 65 8恒温箱中 浸渍sh后,每隔Zh

7、换一 次净蜡,共3次1.2.6包 埋、修块、切片、粘片、脱蜡和封片与常规石州日、1 j片相同(Mi ks che,19了6;李正理,1978;郑国铝,19 78).2效果 与讨论从植物各个器官结构的显 微照片 看( 版图 I ),各组织 着 色均匀 一致,没有出现边缘过染和中部染 色不足的现象,2种 染料 着 色红绿对比鲜明,分 色效果良好.在切片的粘着、脱蜡、透 明和封片等过程都没有出现褪 色现象.从显微照片看,除表 皮细胞 (图版I一1,2,3)染 成浅绿 色外,几由纤维素 构成壁薄 的生 活细胞,如皮层 薄壁 细胞(图版I 一1,2)、韧皮部的筛管及伴胞(图版 I 一8)、栅状组织、海

8、绵 组织 (图版I 一3)、胚 乳细胞、珠 被、合子胚(图版I 一6)、射线薄 壁细胞(图版I一1,5)、形 成层(图版I一1,4)以及 髓部(图版 I 一4) 等均被 染 成绿 色.几 由次生木 质化加 厚壁的各种雕纹导管和管胞 (图版I一5)、异形细胞 ( 图版I 一1)和成熟的花 粉粒(图版I一7)被染 成红色.由此可见,这 种 染 色法对植 物 的各器官和组织的石蜡制片都是普遍适 用的(因排 版 问题,本 文 图版 均采 用黑白照片.所有制片存于本院 蔬菜 教研 室 ).一步双 贡整体染 色法 及其相应 改进的操作过 程 具有下 述优l慧:(l)脱 水过程 中将材料进行 整休浸染,切片

9、后直按 脱 蜡封 片,简 化了制片工 序,缩 短了制片周期.(2) 本方法的许多过程,如材 料的洗 涤、脱水、染 色以及透明均在指形管里 泊行,只有 脱 蜡 需在 染 色缸里进 行.囚此,减少了药品(示 肖耗,可以节省 大甩的乙醉和二 甲 准.3)省略了许 多 反复操作4期何承坤等:植物石蜡切片一步双 重 整体染色667图版I568福学建农:院学报18卷图版I说明Expla natio n。f Platel图1、青花菜根的横切面Fig.1Tr anseetio”of broee oli.sro ot;图2、青花菜主脉的横切面Fig.ZT 邝nse etson二of broee oli5m id

10、rib;图3、青花莱叶的摘切面F19.3Tr anseetio nofbro eeolilsleaf;图4、番茄茎的横切面Fig.4Tra n se etio noftomato,s:tem;图与、8、青花菜根的纵切面Fig.5,8Lo ngitudi皿alse etio nof blo eeoli,5ro ot;图6、石刁拍子房纵切面Fig.6Lo ng itudinalseetionofasParasulso va,y;图7、花椰菜花药纵 切面Fig.7Longitudinalseetio nofe a ulifower5anthe r;e:表皮细地ePide rmaleell;e:皮层薄

11、壁细跑pa rc nehy oat。 u sccz一。fcor*ex ;ph:韧皮部phloe田;51:筛管siev。tubc;ep:伴胞e o皿Panion。cl l;P:栅状组织Palisad。tissue;s:畜每绵组织sPo ng ytis sue;end:胚乳细胞endosPerm;i:朱被integument;z:合子胚zygotieembryo;r:射 线薄壁细胞ray pare nehyma s;ca;形成层eamb毛um;pi;惋部Pith;v:导管voss el;t:管胞tra eheid;h:异形细胞heteroerst;pg:花粉粒polle ngr ain过程,一可以

12、避免那些易 脱落的孤 恳性细胞,如 抱子、花 粉粒、胚体和卵器等的 丢矢.(吐)将常 规石蜡切片 染 色法的最初 脱蜡及最后远明2道工 序 所 需的二 甲苯并刀l道,主样iJ一 以丁谈大限度 地 减少有害气体对 人体的危 害.(5)切片的材科只经 粘片、展片后就一 可以直福 戈镜检,并 决定是否需 要 继续脱蜡 与封 藏等最 后工序,因阴大大 地提高了工作效率.参考文献王承林,1 98 5.植物切片的脱水、二色整体同步制片法.东北农学院学报,上。85(1):1比且连华中农学院植物教研室,198 4.爱氏苏木精整体染色及番红一固绿双重滴染法在石蜡犷片中的应 用.植物学通报,3(6):5 6李正理

13、,、。 78.植物制片技术.北京:科学出版社,1 2 。一1 3了郑国铝,1叮8.生物星微技术.北京.人民教育出版社,l 艺”1”容寿柏,1 982.植物切片两色一步整杂法.生物学通报,1082(5),52MikseheJ P,107.Bota n气e alMierote ehn又qu eandCytoehem istr了.Ames,IowostateUniv ersityPr e ss.10一120选期何承坤等:植物石蜡切片一步双重整体染色569THEWH O L ED OU BLE一ST A IN INGME T H O DINST E P FO R丁,H EPA R A FF INSE

14、CTIO NO F P L ANTHeC l iengku n,Zl iengShenku nandLiJiashe n厂DePt.of万orlicultu re,Teaehinga ndRe : e ar ehGrouPofBota,;夕,I尹刀C)Abtraet八l lewwholedouble一stainingmethodfo rthepa raffinseetio nofplantwasr ePortedinthispaPer.Thewholedo uble 一stainingsolutionwa sIn1xed0.89ofs afr anin ewith0.29of fastgre

15、e ninabe aker,1mlofe o n-e entratedH:5 0a nd100n zlofn一buta n olwereaddeda ndstir reduntilthesolutio nap pe ar edela ret.Ha vingbe e ntre ated7一9hour sbythevariouseon ee ntr atio nofdehydr atingage nts(m ixedaleoh。1withn一butanol),the打laterialsofpla ntswezedireetlystain edabo ut24ho ursbythedouble一、t

16、a-iningsolutio not理。一42a nddehydr ated3一4hou rsbyaleohola ndn一but-anol.Thepr oeedu reofenlbeddingwaseorresPo ndinglyiznproved.T heresultindie atedtha勺 thematerialsofplanteo uldbedo uble一stainedinstepatthes ametime,allpartsofplanttissucswe r euniformlystained,andappea r edbrillia ntredandgr een.Suehim Pr o v edmethodto ok25一30l io u rsfromma-te rialseleans edtoel nbed dingfinishedexeeptthestainingpr oees s,haote n-ingthopr eparationofspe ei