《骨髓间充质干细胞移植对缺血再灌注肠屏障保护作用的实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《骨髓间充质干细胞移植对缺血再灌注肠屏障保护作用的实验研究（104页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、南京大学博士研究生学位论文南京大学南尿大罕研究生学位论文原创性声明本人郑重声明：本学位论文是我在导师的指导下独立进行学位课题研究基础上所取得的研究成果。论文中除特别加注和致谢的地方外，不包含其他人和机构已经发表或撰写过的研究成果。对本研究和论文做过贡献的同道，我已在论文中做了明确说明并已表明谢意。该学位论文资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。南京大学南尿大字研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解南京大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和屯子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京大学可将本论文的全部或部分内容编入有关数据库，可以采用影印、缩印
2、或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文( 保密的学位论文在解密后适用本授权书) 。导师签名签字日期：矽f 。年f 月广日。么1，占er 、协rt寻少Zr纷晖签引者a作：文期论日位字学签沥孑傍7，州月7罗，氰年签巾者如惴幽文期沧日位字学签南京大学博士研究生学位论文目录l 愀判必缩略词表I中文摘要1英文摘要5前言1 0第一部分M S C s 向缺血再灌注损伤肠黏膜归巢及细胞动力学研究引言1 6材料和方法1 6结果2 2讨论2 9结论3 2参考文献3 4第二部分M S C s 减轻肠缺血再灌注损伤的实验研究引言3 8材料和方法3 8结果4 4讨论5 3结论5 7参考文献5 8第三部分M S C s 降
3、低肠缺血再灌注损伤的可能机制研究弓I 言6 2材料和方法6 2结果7 0讨论7 6南京大学博士研究生学位论文结论7 9参考文献8 0全文总结8 5文献综述8 6发表文章目录9 8致谢9 9南京大学博士研究生学位论文英文缩写英文全称M S CB M D CB r d US R YC KP C N A删H P L CE L l S AD A On 师吨E R K l 2缩略词表中文全称m a r r o wm e s e n c h y m a ls t e mc e l l间充质干细胞b o n em a r r o w - d e r i v e ds t e mc e l l骨髓源性干细胞5
4、 一b r o m o d e o x y u r i d i n es e xd e t e r m i n i n gr e g i o no nYc y t o k e r a t i n5 溴脱氧尿嘧啶核苷Y 染色体上的性别决定区细胞角蛋白p r o l i f e r a t i v ec e l ln u c l e a ra n t i g e n增殖细胞核抗原r a t i oo fl a c t u l o s ea n dm a n n i t o l乳果糖甘露醇比值d i a m i n eo x i d a s et u m o rn e c r o s i sf a
5、c t o ra l # a高效液相色谱仪酶联免疫吸附测定二胺氧化酶肿瘤坏死因子一O te x t r a e e l l u l a rs i g n a lr e g d a t e dk i n 豁e1 2细胞外信号调节激酶1 2p E R K l 2p h o s p h o r y l a t i o nE R K l 2N F - k Bn u c l e a rf a c t o rk a p p aB磷酸化细胞外信号激酶l 2核因子k a p p a BR T - P C Rr e a l - t i m ef l o u r e s c e n c ep o l y m e
6、r a s ec h a i l lr e a c t i o n实时荧光定量聚合酶链反应W e s t e r n - B l o tp r o t e i ni m m u n o b l o t t i n gP B SE D l = A蛋白免疫印迹p h o s p h a t eb u f f e r e ds a l i n e磷酸盐缓冲生理盐水乙二胺四乙酸L - D M E Ml o wg l u c o s eD u l b e c c o Sm o d i 矗e de a g l em e d i u m低糖D M E M 培养基F B SE A C SP A G Ef e
7、t a lb o v m es e r u m胎牛血清流式细胞分选仪聚丙烯酰胺凝胶电泳南京大学博士研究生学位论文S S CP V D FS D So DD A BT B Ss t a n d a r ds a l i n ec i t r a t es o l u t i o n标准枸橼酸盐水p o l y v i n y l i d e n ef l u o r i d es o d i u md o d e c y ls u l p h a t eo p t i c a ld e n s i t y3 , 3 - d i a m i n o b e n z i d i n et r i s
8、b u f f e r e ds a l i n e聚偏二氟乙烯十二烷基硫酸钠吸光度3 , 3 一二氨基联苯三羟甲基氨基甲烷缓冲盐水T r i t i n - X 1 0 0p o l y e t h y l e n eg l y c o lo c t y lp h e n y le t h e r聚乙二醇辛基苯基醚E G l l A础y l e n 嘲y c 。lb i 5 ( 2 I a n 血。e 也y l 劬e r ) 伦仃搬。t i c 乙二醇双( 2 - 氨基乙醚) 四乙酸 a c i da m m o n i u mp e r s u l f a t eb o v i n es
9、e r u ma l b u m i ne t h i d i 砌b r o m i d e过硫酸胺牛血清白蛋白二乙基焦磷酸胺溴化乙锭增强化学发光G A P D Hg l y e e r a l d e h y d ep h o s p h a t ed e h y d r o g e n a s e磷酸甘油醛脱氢酶H R PM o D SS 瓜SN SP M S F辣根过氧化物酶m u l t i p l eo r g a nd y s f u n c t i o ns y n d r o m e多器官功能障碍综合征s y s t e m i ci n f l a m m a t o r y
10、r e s p o n s es y n d r o m e全身炎症反应综合征n o r m a ls a l i n e生理盐水p h e n y l m e t h y ls u l f o n y l f l u o r i d e苯甲基磺酰氟N G Sn e o p e n t y l g l y c o ls u c c i n a t eI I四甲基乙二胺新戊基乙二醇琥珀酸酯SA聊LP&EBC胛鼬隗口阳南京大学博士研究生学位论文毕业论文题目：置蕉间查厦王绁照整植盟筮鱼噩灌注题屋瞳堡塑佳厦的塞坠班塞处科堂专业一2 0 0 7 窒I 博士生姓名：堑篷莲 指导教师( 姓名、职称) ：塞维
11、丝夔握；鍪金麦主国王程瞳院骨髓间充质干细胞移植对缺血再灌注肠屏障保护作用的实验研究摘要肠黏膜组织的缺血再灌注损伤( I s c h e m i a r e p e r f u s i o ni n j u r i e s ，I R ) 是一种常见的临床病理过程，见于多种疾病或损伤状态。肠黏膜上皮细胞是对缺血、缺氧极为敏感的组织，缺血再灌注损伤可引起肠黏膜上皮细胞结构的破坏，导致肠黏膜通透性升高，进而损害肠黏膜的屏障功能，使肠腔内细菌穿过肠黏膜屏障到达其它器官定植和过度生长，引发感染，甚至出现系统性炎症反应综合征( s 刀隅)和多器官功能障碍综合征( M O D S ) ，严重者可危及生命。因此
12、，探索减轻缺血再灌注引起的肠黏膜屏障损伤的有效治疗方法，具有重要的临床价值。骨髓间充质干细胞( M e s e n c h y m a ls t e mc e l l s ，M S C s ) 是一类存在于骨髓中的单个核样、具有多向分化潜能的非造血组织干细胞。在适宜的培养条件或局部微环境中，不仅能分化为中胚层来源的骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞，还可向内胚层或外胚层的组织细胞分化。进一步的研究表明，M S C s 不仅具有多向分化潜能，而且能分泌多种生物活性物质，可降低组织的炎症反应、抑制免疫反应；还能分泌多种生长因子促进受损组织细胞的增殖、分化、成熟，进而促进受损组织的修复。在本课题中，我们首先
13、将M S C s 通过直接注射的方式移植到I R 损伤的肠黏膜下，观察移植的细胞能否向肠黏膜内归巢及其归巢后的细胞动力学；在此基础上，探究1南京大学博士研究生学位论文M S C s 移植对F R 损伤后肠黏膜屏障功能的影响，并进一步探讨M S C s 对F R 后肠屏障作用的可能机制；为M S C s 治疗I R 肠屏障功能障碍的临床应用提供实验基础。全文共分三部分：第一部分M S C s 向缺血再灌注损伤肠黏膜归巢及细胞动力学研究目的：观察外源性M S C s 向缺血再灌注损伤肠黏膜归巢的规律及归巢细胞的分化和增殖。方法：用完全贴壁法分离、培养扩增雄性S D 大鼠的M S C s ，流式细胞
14、仪鉴定表面抗原，并用B r d U 标记。受体雌性S D 大鼠剖腹采用夹闭肠系膜上动脉的方法建立缺血再灌注肠损伤模型。供体M S C s 经小肠黏膜下直接注射移植，于移植后不同时间点取受体鼠小肠标本，通过S R Y 基因原位杂交和免疫组化方法检测外源性M S C s 在受损肠黏膜的定植情况，并进一步通过S R Y 原位杂交和C K 及P C N A 免疫组化共染色方法检测供体来源的细胞在受体肠黏膜的分化和增殖。结果：完全贴壁法培养和C D 9 0 、C D 4 5 细胞表面抗原的流式细胞仪分选，成功进行了大鼠M S C s 的分离、培养、扩增和鉴定；经肠黏膜下直接注射的移植方式可显著提高移植细胞向肠黏膜的归巢率，归巢的细胞在一周内到达高峰后开始
