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1、关于靶基因关于靶基因 的说明的说明“靶基因“ ：target gene“靶基因“ 在学术文献中的解释 1、在维甲酸诱导 APL 细胞分化的研究中,一般将受维甲酸及受体直接作用的基因称为靶基因,而将受靶基因蛋白质产物调控的基因称为受维甲酸调控基因 . 2、靶基因是指编码特定蛋白质的结构基因,它能使转基因生物体产生新的表型.转基因鱼研究中所使用的靶基因大多是生长激素基因、抗冻蛋白基因、珠蛋白基因、金属硫蛋白基因和生长激素释放因子基因等. 3、而欲进行杂交的实验样本(DNA 或是 RNA)称为靶基因,这指的是从试验样品中提取的丰度一定的未知序列的核苷酸链.基因靶技术（gene targeting）一
2、、基因靶技术的原理基因靶技术的原理是设计一个靶载体，其内含有与靶位点相同的核苷酸序列，用基因转移的方法将载体导入靶细胞，通过载体与靶位点相同的核苷酸顺序间的同源重组，使外源 DNA 序列定点整合入靶位点，从而达到对靶位点进行定点修复或定点突变的目的。载体分两种：一是序列插入型载体，通过与靶点序列的单交换导入外源序列；二是序列取代型载体，通过与靶点序列间的双交换，用外源序列取代靶序列。二、基因靶技术的作用（一）确定基因表达水平目前应用最多的基因转移途径逆转录病毒载体介导的基因转移存在二个问题，一是导入的外源基因难以生理方式进行表达；二是即使表达也不够完善。采用基因同源重组的基因靶技术，可使病变的
3、基因在原位得到改正，与正常基因的结构与调控环境一致，即以生理方式来进行表达。1989 年 Thomphon 采用小鼠胚干细胞 HPRT 基因的同源重组置换，使 HPRT 缺陷功能得到恢复。（二）增强基因表达的稳定性与安全性通过逆转录病毒载体，将目的基因导入靶细胞后，随时间的推移，目的基因表达的稳定性会有所下降，表达的活性会慢慢的降低，有的甚至完全停止表达。同样，外源基因与靶细胞染色体基因组的整合位点是随机的，常可导致基因的丢失和重排而失去表达活性。采用基因靶技术则可避免上述二种情况的发生，防止逆转录病毒载体的回复突变成致病性的野生型病毒、原癌基因的激活、正常功能基因的插入失活等，从而增加基因转
4、移的安全性和稳定性。（三）提高逆转录病毒载体的滴度逆转录病毒载体-包装细胞系基因转移系统是目前基因治疗中最有效的基因转移方法。但是包装细胞系培养上清液中重组逆转录病毒载体的滴度相对较低，是影响基因转移效率的一个重要因素。采用基因靶技术则可提高逆转录病毒载体的滴度，包括逆转录病毒载体本身的改建和包装细胞系的改建两个方面。Armentano 等将 gag 基因进行不完全缺失，保留 421 个碱基，这一改建，不仅保证逆转录病毒载体(N2)的安全性，同时也将其滴度提高了 1040 倍。Gelinas 将 -球蛋白启动子序列缺失，使逆转录病毒载体的滴度提高了 10 倍。在细胞包装系改建方面，Anders
5、on 等研究了包装细胞其组织、种属来源对滴度的影响。鉴于目前基因治疗中应用的逆转录病毒载体，大部分是由 molv 改建的，因此，其包装细胞系也常采用PA317 等小鼠成纤维细胞系，一般都被产出 105107cfv/ml 的病毒滴度，完全能够满足基因治疗的需要。三、基因靶技术在基因治疗中的应用靶技术在基因治疗中的应用主要包括三个方面：基因分解，即利用靶技术将外源基因定点导入靶细胞染色体基因组的某一位点，使基因打断，此方法又称为基因插入突变；基因增加，即将外源基因导入靶基因染色体上精确位点，使基因表达的蛋白，具有外源基因和内源基因共同决定的融合蛋白的性质；基因修正，即将外源基因导入靶细胞内，纠正突变的基因。基因靶技术不仅在肿瘤的基因治疗中应用，也可用于癌基因的研究，如利用基因靶技术，对癌基因或原癌基因进行定点突变，从而观察基因突变引起细胞恶性病变的机制。
