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1、T h eR o l eo fp S T A T 3i nR e g u l a t i n gE p i g e n e t i cA b e r r a t i o no fG a s t r i cr 。no 1u m o r lg e n e s l sAD i s s e r t a t i o nS u b m i t t e dt oN a n j i n gU n i v e r s i t yF o rt h eA c a d e m i cD e g r e eo fM a s t e ro fS c i e n c eB YZ h uY i n x i nS u p e
2、r v i s e db yP r o f Z o uX i a o p i n gN a n j i n gD r u mT o w e rH o s p i t a lT h eA f f i l i a t e dH o s p i t a lo fN a n j i n gU n i v e r s i t yM e d i c a lS c h o o lM a y2 0 1 1南京大学学位论文独创性声明本人郑重声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为
3、获得南京大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所作的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：券曳钆缸日期：b m 玉，日南京大学学位论文使用授权声明南京大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可公布论文的全部或部分内容。论文的公布( 包括刊登) 授权南京大学研究生院办理。研究生签名：募触盔导师签名：日期：。1 1 ， f 1南京大学硕士学位论文毕业论文题目：拯过丛! 垒
4、至曼在置疸的筮生筮屋主过壶麴选佳昱堂尥遇苴佳腰! 直庭医堂专业2 Q Q 旦级硕士生姓名：塞堡鑫指导教师r 姓名、职称J：鱼E 瞳垩塾拯中文摘要目的：了解在胃癌的发生发展过程中S T A T 3 信号通路与D N A 异常甲基化和组蛋白去乙酰化的相互作用。方法：共收集病变组织1 3 3 例，按病理分型分为中晚期胃癌标本共6 5 例，肠上皮化生标本2 l 例，异型增生标本2 4 例，早期胃癌标本2 3 例，另外选2 0例癌旁正常组织作为对照组。用免疫组化方法测各组黏膜中p S T A T 3 、D N M T l 和H D A C l 这三个蛋白的表达情况，使用S P S S 统计软件分析这三个
5、蛋白在不同病变组织中的表达差异，以及它们之间的相关性，并对其表达强度与临床病理因素之问的关系进行分析。结果：p S T A T 3 在正常组织、肠上皮化生、异型增生、早期胃癌和中晚期胃癌中的表达情况分别为O O ，1 9 0 ，2 0 8 ，3 0 4 矛1 J4 6 2 ；D N M T l 在这五个组中的表达情况分别为5 O ，2 8 6 、2 9 2 、3 4 8 和5 3 8 ；H D A C l 在这五个组中的表达情况分别为5 0 ，3 3 3 、3 7 5 、4 3 5 和6 1 5 ；并且这三个蛋白在病变组织中的表达强度与正常组织相比均有显著差异( P O 0 5 ) ，经偏相关
6、分析我们发现p S T A T 3 与D N M T l ( r = O 2 6 8 ，P 7 5 。阳性标记分数= 阳性染色强度分级X阳性细胞比例分级。根据阳性标记分数将结果分为4 个等级：0 分，( ) ；卜2 分，( + ) ；3 - 4 分，( + + ) ；5 - 9 分，( 十+ + ) ；( + + ) 为高表达。3 、统计方法本实验中所有数据均在S P S S l 6 0 软件中进行分析，P 6 0性别男女H P-+2 64 24 82 02 81 8C 队正常5 3升高3C A l 9 9正常5 3丁卜高2C A l 2 5正常5 1升高1病变部位胃底贲1 2门胃窦3 0胃体
7、2 52 13 13 81 41 81 64 034 023 9151 11 061 021 301 301 20O 5 1 10 4 1 70 0 6 40 3 2 80 4 2 30 5 8 00 4 7 32 02 73 41 32 01 23 723 623 5161 51 47861 611 701 601 02752 41 7682 11 8970 2 7 30 6 3 50 7 3 20 9 0 80 3 3 50 5 0 10 6 8 81 62 62 81 41 41 23 313 123 111 01 62 061 462 022 2O2 0O751 81 61 290 9
8、 7 60 3 6 70 2 6 6O 3 1 80 2 3 90 4 2 50 9 3 1表3 ：中晚期胃癌中三种蛋白表达情况与临床病理因素的关系3 3南京大学硕十学位论文第二章探讨p S T A T 3 在胃癌的发生发展中对表观遗传异常的调节作用4 3p S T A T 3 、D N M T l 和H D A C l 三者在不同病变组织中的表达相关性我们采用K e n d a l l SW 协同系数检验分析对同一组织中p S T A T 3 、D N M T l 和H D A C l 这三个蛋白之间的表达差异，发现在正常组织、肠上皮化生、异型增生、早期胃癌和中晚期胃癌中w 值分别为0 、O
9、 0 4 2 、0 0 3 6 、0 0 2 5 、0 0 2 6 ，相应的P 值均 0 0 5 ，表明这三个蛋白在同一病变组织中的表达强度无明显统计学差异。用偏相关分析对所有病变组织进行综合分析发现，p S T A T 3 与D N M T l 在表达上呈明显线性正相关( r = O 2 6 8 ，P ( O 0 1 ) ，D N M T l 和H D A C l 在表达上也呈明显线性正相关( r = O 2 4 1 ，P 0 0 5 ) 。我们再对不同病变组织分别进行偏相关分析，结果见表4 。表4 ：p S T A T 3 、D N M T l 和H D A C l 在不同病变组织中的偏相
10、关分析从表4 可以看出：在肠上皮化生、早期胃癌和中晚期胃癌中p S T A T 3 和D N M T l的偏相关系数分别为0 4 9 7 、0 5 0 2 和0 2 3 9 ，P ( O 0 5 ，表明在这三个病变组织中p S T A T 3 和D N M T l 之间呈显著线性正相关；另外在肠上皮化生和异型增生中H D A C l 和D N M T l 的偏相关系数分别为0 4 2 4 、0 6 2 3 ，P O 0 5 ) ，但是本实验中我们发现p S T A T 3 与H D A C l 的表达无明显线性相关性( P ) O 0 5 ) ，说明p S T A T 3 对H D A C l
11、 的表达可能无直接的相互作用。前面综述中已经指出，S T A T 3 信号通路与其他信号通路如N F KB 信号通路和W n t c a t e n i n 信号通路之间存在相互影响，因此该通路可能通过其他机制对H D A C l 的表达产生间接作用，当然这还需要进一步的实验证实。D N M T l 是胃癌的演变过程中的一个很重要的调节D N A 异常甲基化的酶，有实验证实它在胃癌内的高表达与很多基因例如E - C a d h e r i n ，h M L H I 等的异常高甲基化有显著相关| 生“，并且该实验还指出D N M T l 的高表达预示胃癌的分化较差，预后不良2 00H D A C
12、 l 在促进癌症的发生和发展中具有很重要的作用“，并且对其在胃癌的演变中的作用也已经有研究证实”。我们在实验中发现D N M T l 和H D A C l 的表达强度随病理分级而逐渐增加，并且与正常组相比，其他各组在表达上具有显著统计学差异( P ( O 0 5 ) ，而且中晚期胃癌组与肠上皮化生组、异型增生组相比也有明显的统计学差异( P ( O 0 5 ) 。另外等级相关分析提示，D N M T l 和H D A C l 的表达强度均与病理分级呈显著的线性正相关，提示D N M T l 和H D A C l 与胃癌的演变和进展有密切关系。此外，对临床因素与D N M T l 和H D A
13、C l 之间的关系进行分析，发现D N M T l 的表达与年龄、H P 感染、C E A 、C A l 2 5 、C A 7 2 4 等均无显著关系( P O 0 5 ) ，而在中晚期胃癌中与性别有密切关系( P 0 0 5 ) ；H D A C l 的表达与年龄、性别、H P 感染、C E A 等无显著关系，而与L a r u e n 分型有密切关系。当然，由于本实验中部分病人的临床资料不全，无生存率和预后的相关资料，因此这两个蛋白与临床因素之间的关系还有待进一步的研究证实。南京大学硕士学位论文很多研究指出，不同的表观遗传学机制之间存在相互调节和影响2 3D N A 甲基化与组蛋白乙酰化之
14、问有协同作用，导致靶基因的表达沉默2 4 。而我们在实验中通过对不同组织进行综合偏相关分析发现，D N M T l 和H D A C I 在表达上呈显著的线性正相关( r = O 2 4 1 ，P O 0 1 ) ，同时我们还通过对不同病变组织分别分析发现，在肠上皮化生和异型增生中D N M T l 和H D A C l 存在显著正相关( P O 0 5 ) ，表明在胃癌的发生发展过程中D N M T l 和H D A C l 相互作用，共同调节抑癌基因的表达沉默；但是在早期胃癌和进展期胃癌中D N M T l 和H D A C l 之问的表达强度无显著线性关系。目前尚没有关于H D A C
15、l 和D N M T l 在表达上相关性的报道，D N M T l 的表达与S T A T 3信号通路，N F KB 信号通路和W n t 信号通路活化有密切关系，而H D A C l 的表达与N F KB 信号通路、A K T m T O R 信号通路等有密切关系，并且H D A C l 的表达受到自身的负反馈调节2 7 ，提示在胃癌发展的早期阶段，D N M T l 和H D A C l 可能受共同的信号通路调节激活，因此他们在肠上皮化生和异型增生中的表达呈现明显的相关性，而随着胃癌的发展，上述两个蛋白表达的主要调节通路发生变化，使其二者的表达在早期胃癌和中晚期胃癌中失去相关性。另外，D
16、N M T l 和H D A C l 之间可能存在相互调节，而这种相互调节作用可能在胃癌发生的早期阶段发挥重要作用，随着胃癌的发展，D N M T I 和H D A C I 的表观遗传修饰作用丌始占主导地位，当然这还需要进一步的实验验证。此外，研究已经指出在恶性T 淋巴细胞中，S T A T 3 、D N M T l 和H D A C l 形成空间复合物共同作用于靶基因S h p l ，导致该基因的表达沉默“，说明p S T A T 3 可能通过其他机制与H D A C l 相互作用，从而调节组蛋白的去乙酰化修饰。p S T A T 3 、D N M T l 和H D A C l 这三者在空问结构和活性上的相互关系以及其对胃癌的发生发展之间的作用还需要进一步的实验验证。另外有学者提出，表观遗传异常可以经治疗逆转，目前已经成为胃癌治疗的新的靶点“。由于不同表观遗传机制之间存在
