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1、我们致力于规模化养殖场病毒性病原净化保健方案的推广肽核酸技术对猪场病毒持续侵染良好 控制方案的研究(猪病篇)广西.桂林报告 韩健葆 博士 1595055896 南京农业大学动物科技学院 楠森兽医诊断技术研究中心报告人简介：韩健葆 先生楠森集团运营总监，毕业于南京农业大学，从事畜禽场 健康管理研究和兽用肽核酸（基因）抗病毒药物及多肽 类功能性免疫调节剂研究推广多年 ，兼任国内多家动物 保健品企业新药研发顾问，常年为国内规模化养殖场提 供技术培训及疫病诊断服务。 应对愈渐复杂的病毒性疾 病发生现状，在行业内率先提出“规模化养殖场病毒感 染控制与净化保健方案”的兽医传染病综合控制专家。森楠生物技术研
2、究有限公司简介森楠生物隶属于楠森集团公司，专注于动物用核酸和多 肽类抗病毒免疫增强药物及功能性饲料添加剂研究开发 的高新技术企业，公司以“致力于推广规模化养殖场病毒 感染控制与净化方案”为核心经营价值，秉承“以创新思 路成就未来、以优异品质创造价值”的经营理念，以“专 业、敬业、善学、奋进”的企业文化，以服务全球畜牧业 为己任，用心为客户提供系统的现代养殖技术解决方案 。楠森资质与荣誉“我们致力于为规模化养殖场提供病毒感染控 制与净化保健方案”“We will dedicate to eradicate the viral dieases in large-scaled farms”楠森核心价
3、值猪场病毒感染控制与净化方案的创造 拥有国家发明专利，技术世界领先发明创造名称： 猪瘟病毒特异性抗病毒肽 核酸药物，专利号：ZL 201010159652.1 发明人或专利权人：韩健宝关于病毒病毒是一类超显微的、不具有细胞结构的、专性活细胞内寄生的实体。 它由一种核酸(DNA或RNA)和蛋白质组成,没有酶或酶系统极不完全,不能进 行独立的代谢作用,必须寄生在宿主细胞内,借助于宿主细胞的代谢系统复 制自身的核酸和蛋白质才能繁殖。病毒的感染机制病毒的生活史分为5个基本过程： 吸附(absorption)：病毒对细胞的感染 起始于病毒蛋白外壳同宿主细胞表面特 殊的受体结合，受体分子是宿主细胞膜 或细
4、胞壁的正常成分。因此，病毒的感 染具有特异性。 侵入(penetration)：病毒吸附到宿主 细胞表面之后，将它的核酸注入到宿主 细胞内。 复制(replication)：病毒核酸进入细 胞后有两种去向，一是病毒的遗传物质 整合到宿主的基因组中，形成溶原性病 毒；第二种情况是病毒DNA(或RNA)利用 宿主的酶系进行复制和表达。 成熟(maturation)：一旦病毒的基因进 行表达就可合成病毒装配所需的外壳蛋 白，并将病毒的遗传物质包裹起来，形 成成熟的病毒颗粒。 释放(release)：病毒颗粒装配之后， 它们就可从被感染的细胞中释放出来进 入细胞外，并感染新的细胞。有些病毒 释放时要将
5、被感染的细胞裂解，有些则 是通过分泌的方式进入到细胞外。病毒性传染病在养猪业中所扮演的角色在临床流行性的疾病所导致的损失中,约有70%疾病损失是由病毒性 疾病导致,所以病毒性疾病是影响养殖业健康发展和盈利的关键因素 。危害养殖业较大的病毒分类病毒种类类病毒（科）疾病 RNA副黏病毒鸡鸡新城疫正黏病毒禽流感 双股RNA病毒禽法氏囊 小RNA病毒鸭鸭肝炎 冠状病毒禽传传染性支气管炎小RNA病毒猪口蹄疫 黄病毒猪瘟 批衣病毒猪蓝蓝耳病 Taura综综合症病毒虾虾桃拉综综合症 DNA细细小病毒 小鹅鹅瘟圆环圆环 病毒猪圆环圆环 病毒病 疱疹病毒猪伪伪狂犬病杆状病毒 虾虾白斑综综合征病yebatonTM
6、的研发背景近年来,由于从国外引种及进口动物源性饲料原料，饲养管理模式的 改变等导致病毒性疾病发生和控制愈渐复杂,养殖场普遍面临着新增 的病毒性疾病与老病新发的病毒性疾病双重夹击的困扰，造成生产上 极大的损失，对养殖业的健康发展形成了巨大的障碍。但就目前的抗 病毒药物的品种结构而言,可供临床使用的药物比较有限,远不能满足 生产上预防和治疗病毒病的需要。寻找新的有效的抗病毒药,特别是 对病毒具有高度选择性、而对宿主细胞无毒害的药物仍是当前迫切的 需要。在这种特殊时期，yebatonTM应时而生，将会给中国乃至世界的 养殖场所遭受的病毒感染带来新的控制方案。 SENNAN BIO. 下属的中国新药研
7、发中心（NDDC）与美国Cornell University基因工程药物研究中心技术合作，将反义技术和反义寡核 苷酸药物（yebatonTM）这一全新的“沉默基因”治疗技术引用到兽医 临床，为当前愈见复杂的病毒性疾病的药物有效控制提供了新的途径 。有了yebatonTM ，我们 才能与病毒和谐共 处 SENNAN BIO. 针对猪、家禽和虾的主要传染病 设计合成的yebatonTM（反义脱氧寡核苷酸）， 具有较强的抗病毒活性。体外实验表明本品对猪 的（猪瘟病毒、蓝耳病病毒、口蹄疫病毒、伪狂 犬病毒、圆环病毒）；禽的（流感病毒、新城疫 病毒、传支病毒、鸭肝炎病毒、法氏囊病毒）； 对虾的（白斑综合
8、征（WSS）病毒和桃拉综合征 （TS） 病毒）显示出极强的抗病毒作用。 目前在兽医临床上尚无任何抗病毒化合物被许 可使用，yebatonTM对于DNA病毒和小RNA病毒的控 治以其良好的药代动力学特征、广谱的抗病毒作 用、广泛的临床适应症以及良好的耐受性和无毒 副作用的特点,将会为养殖业的健康发展和畜禽 病毒性疾病的控治做出重要的贡献。yebatonTM是指建立在反义技术（Antisense technology）的基础上，采用人工合成的反义脱 氧寡核苷酸经特殊工艺修饰制备的基因工程抗病 毒免疫增强新药，这种基因片段药物（DNA及RNA 片段）是与病毒DNA或RNA互补的核酸序列,能与 病毒基
9、因链的保守核苷酸序列（即mRNA ）杂交, 形成稳定的互补结构,选择性地干扰或封闭基因 表达、阻断病毒基因正常复制，以达到治疗病毒 病目的的新型治疗技术，被称之为“沉默基因” 或“生物导弹”给药技术。什么是 yebatonTMyebatonTM的特点 相对广谱性（针对危害猪群主要病毒（ HCVPRRSVPCV2PRVSIV）设计的反义脱氧 寡核苷肽） 高效性（病毒性疾病良好的控制效果） 最优化的药物设计（可以和任何化学药物及中药 混合复配） 长期投药无毒，安全。 针对病毒目的基因作用，不产生耐药性。yebatonTM的空间结构yebatonTM运用基因工程技术合成并以肽骨架修饰手段对反义寡 核
10、苷酸进行修饰形成聚合物，从而弥补天然结构核酸药物抗病毒时 效短暂、在机体内生物利用度低，易被核苷酸酶降解的缺陷，不但 使之在体内的半衰期明显延长，而且使核酸药物具有稳定的理化性 能和相对广谱抗病毒活性。神奇的拟病毒结构yebatonTM的低聚壳聚糖修饰微囊结构特点我们采用低聚壳聚糖靶向定点 控释技术将经肽骨架修饰的反 义寡核苷酸药物基因片段制备 成结肠溶控释微囊，猪口服 yebatonTM微囊后，经过胃、小肠 的逐步消化控释衣壳，直到结 肠部位才会将大量的有效成分 （反义寡核苷酸）释放，保证 绝大多数有效药物分子在结肠 部位吸收，具备更高水平的生 物利用率，这种控释制剂工艺 是保证生物活性药物
11、经口服后 不被消化道内酶破坏的理想技 术。以壳聚糖为载体的口服基因药物（摘要） 唐明青1,刁 勇1,2,许瑞安1,2 (1.华侨大学分子药物学研究所, 2.分子药物教育部工程研究中心,福建泉州362021)人药研究论文案列长期以来,基因药物的给药以注射途径为主,是因为口服 给药存在多种限制因素,如胃中的低pH可使DNA脱嘌呤化,消 化酶易降解治疗基因,常用基因载体难以被肠上皮细胞摄取 等,相关释药技术的发展明显滞后于基因药物本身的发展1 。作为一种天然的阳离子聚合物,低聚壳聚糖不仅易与带负 电荷的DNA等遗传物质结合而形成纳米微粒,还具有无毒、易 获得、生物可降解、稳定、生物相容、能抵抗胃肠道
12、环境 (pH、核酸酶)对药物的破坏、生物黏附性强、可促进药物渗 透吸收等优点,日益成为口服基因药物的优良载体。yebatonTM结肠控释工艺保证了基因药物 口服的高生物利用率yebatonTM的作用机制(抗病毒机理)yebatonTM （肽核酸）经口服进入体内后与特异宿主细胞结合，在酶的催化作 用下脱去肽骨架，导入细胞内，识别并激活2、5-寡腺苷酸合成酶，被活化 的寡腺甘酸可以使潜伏在体内的内源核酸酶（核酸内切酶-Dicer）活化，在RNA 诱导的基因沉默复合体（RISC，RNA-induced silencing complex） 作用下，对 （病毒）靶基因mRNA进行切割，引起病毒复制环节
13、能力丧失，从而达到抗病毒的 作用。yebatonTM的作用机制(免疫调节机理)yebatonTM所独特的拟病毒结构，进入机体后可被免疫 系统误认为是遭受到病毒攻击从而激活机体的特异性和 非特异性的免疫防卫机能。对其免疫调节抗肿瘤机制的研究表明，其主要作用是 激活自然杀伤细胞（NK细胞）、T、B淋巴细胞、巨噬细 胞活性、诱导机体产生多种干扰素、多种细胞介素，从 而达到预防和治疗病毒病，修复机体免疫缺陷的作用。yebatonTM实验室与临床研究森楠生物新药研发中心的研究人员在长达六 年的实验室研究和众多猪、禽场进行临床应用性 研究，结果表明：疫百特(yebatonTM)对猪、禽临 床常见多种病毒性
14、疾病具有很好的预防和理想、 经济的治疗效果。yebatonTM抑制蓝耳病病毒（PRRSV）感染细胞的试验 结果显示： yebatonTM对PRRSV复 制有明显的抑制作用。对照（Control）组的细胞中形成 的平均空斑数为128个。yebatonTM组的细胞中形成的平均 空斑数为27个。将 Marc-145细胞培养成单层， yebatonTM转染，以生理盐水作对照，24 h 后接种蓝耳病毒（PRRSV）。病毒感染72h后通过病毒空斑测定评价yebatonTM 对病毒复制的抑制效果。 空斑试验：收集待检测细胞和上清，经反复冻融3次后各吸取100L，用MEM做 10倍梯度稀释后，分别接种于已长成
15、单层的Marc-145细胞上,吸附1h，吸弃病 毒 液，加入2 mL琼脂糖覆盖液，37继续培养，待出现明显病变形成空斑后，用 1：1000倍稀释的中性红染色1 h，弃去中性红染色液，数空斑数目，利用t 检验对数据进行显著性分析 。yebatonTM与其他抗病毒药物在临床效果上的比较yebatonTM对人工感染HC、PRRS等病毒后的发病率影响结果表明:在适当的剂量范围内， yebatonTM的添加量 越大，控制病毒感染的效果越显著。 yebatonTM对抑制猪瘟病毒（CSFV）感染细胞的试验将牛睾丸细胞培养成单层， yebatonTM转染，以生理盐水作对照,14 h后 再接种SCFV。病毒感染48 h后通过间接免疫荧光评价yebatonTM对病毒复制 的抑制效果。期间,正常未感染SCFV的牛睾丸细胞作为细胞对照组。图1. 未用y
