《两种不同麻醉方法对腹腔镜结肠癌患者围术期细胞免疫及IL6的影响》由会员分享，可在线阅读，更多相关《两种不同麻醉方法对腹腔镜结肠癌患者围术期细胞免疫及IL6的影响（47页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、学位论文独创性声明学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得直昌太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名( 手写) ：榀6签字日期：历f ；年月f 了日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全
2、部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中国学术期刊( 光盘版) 电子杂志社将本学位论文收录到中国学位论文全文数据库和中国优秀博硕士学位论文全文数据库中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务。( 保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名( 手写) ：幸缶匆导师签名( 手写) ：Zt 记之签字日期：砂f 年占月l ；日签字日期：知心年 O 。0 5 ) ( 见表1 ) 。所有患者手术及麻醉过程进展顺利，达到手术预期治疗目的。术中无大出血、异体输血、病灶转移、中转开腹等特殊情况发生。术后病理切片均证
3、实为早期单发未转移病灶，结肠癌D u k e s 分期I I I 期。术后患者无吻合口漏、肠粘连、肠梗阻、切口感染、人工造口并发症等情况发生。如有上述情况者自动剔除出本研究，下一例符合标准患者自动补上。2 1 2 麻醉方法2 1 2 1 环境条件手术室温2 2 2 5 ；湿度4 0 6 0 。防止温度因素影响患者术中应激反应而干扰实验结果。2 1 2 2 器械及药品一次性使用硬膜外穿刺包：新乡市驼人医疗器械有限公司一次性使用深静脉穿刺包：深圳市益心达医学新技术有限公司第2 章材料与方法一次性气管导管包：新乡市驼人医疗器械有限公司多功能麻醉机：( F a b i u s2 0 0 0 ，上海德尔
4、格医疗器械有限公司)多参数监护仪：( P H I L I P SM P 2 0 ，荷兰皇家飞利浦电子公司)电子泵：( 爱普，爱普科学仪器( 江苏) 有限公司)左旋布比卡因：5 0 m g 1 0 m l ，针剂( 珠海润都民彤制药有限公司)咪达唑仑：1 0 m g 2 m l ，针剂( 江苏徐州恩华药业)瑞芬太尼：l m g 支，粉剂( 湖北宜昌人福药业)舒芬太尼：5 0 u g l m l ，针剂( 湖北宜昌人福药业)丙泊酚：2 0 0 m g 2 0 m l ，针剂( 西安力邦制药有限公司)维库溴安：4 m g 支，粉剂( 浙江仙琚制药有限公司)昂丹司琼：4 m g 2 m l ，针剂(
5、山东齐鲁制药)氟比洛芬酯：5 0 m g 5 m l针剂( 北京泰德制药有限公司)羟乙基淀粉( 2 0 0 0 。5 ) 氯化钠注射液：5 0 0m l 袋袋装( 华润双鹤药业股份有限公司)乳酸林格液：5 0 0 m l 袋袋装( 华润双鹤药业有限责任公司)七氟烷：2 5 0m l 瓶，丸石制药株式会社2 1 2 3 麻醉诱导及维持病人入室后常规监测无创血压、心电图、血氧饱和度。局麻下行颈内或锁骨下深静脉穿刺置管，接6 羟乙基淀粉扩容，并监测中心静脉压。B 组患者于全麻诱导前约2 0 m i n 先行T 10 11 椎间隙硬膜外穿刺操作，向上置管4 c m ，推入0 5 左旋布比卡因5 m l
6、 ，测定阻滞平面约T 6 T 1 2 以满足手术区域麻醉，手术开始后则间断追加药量5 1 0 m l h 。A 、B 两组术中全麻管理方法相同。全麻诱导：咪唑安定0 2 m g k g 、瑞芬太尼l u g k g 、维库溴铵0 1 m g k g 。诱导效果满意后行气管插管，并使用呼吸机控制呼吸；术中麻醉维持：两组均经静脉泵入瑞芬太尼0 1 u g ( k g - m i n ) ，维库溴铵0 1 u g ( k g - m i n ) ，1 - 3 七氟醚持续吸入麻醉维持。控制呼吸频率1 2 1 4 次m i n ，呼气末二氧化碳分压3 5 4 5 m m H g 。术中麻醉的调节根据患者
7、血压和心率波动情况来增减七氟醚吸入浓度和补液速度，维持血压心率稳定，波动在基础值2 0 以内。静脉泵入麻醉药量速度恒定，术中输液晶胶体输注比按1 ：2 输注。术中每1 0 m i n 记录一次七氟醚吸入浓度，术后统计出各患者术中七氟醚吸入平均浓度值。手术结束前3 0 m i n 停止肌松药泵入，手术结束前10 m i n 停止全部麻醉药物。第2 章材料与方法2 1 2 4 手术方式手术采用腹腔镜辅助结直肠手术，肠段的切除或吻合是通过腹壁小切口辅助下完成。其中腹腔镜右半结肠切除术7 例，腹腔镜横结肠切除术5 例，腹腔镜左半结肠或乙状结肠切除术9 例，腹腔镜直肠前切除术9 例( 不包含M i l
8、l s 术) 。手术均顺利完成。术后病房常规治疗相同。2 1 。2 5 麻醉苏醒与术后镇痛手术完毕后患者带管送至麻醉复苏室( P A C U ) 进行麻醉苏醒期监护，待其自然苏醒。待其神志、反射、呼吸、肌力完全恢复，脉搏氧饱和度吸空气下1 0 m i n 9 5 后，拔除气管导管，拔除硬膜外导管。再观察3 0 m i n 后送至病房。手术结束后即刻采用术后镇痛，两组患者均采用相同P C A 模式：舒芬太尼2 u g k g + 氟比洛芬酯2 m g k g + 昂丹司琼8 m g ，生理盐水稀释至1 0 0 m l ，背景输注3 m l h ，P C A 量2 m l ，锁定时间1 5 m i
9、 n 。2 2 观察指标与标本采集2 2 1 观察指标基本生命体征：术中多参数监护仪持续监测血氧饱和度、心率、呼气末二氧化碳分压，每5 分钟记录一次血压。麻醉维持手术中上述指标稳定。手术过程：观察并记录手术时间，术中失血量，术中补液量，术中麻醉药用量。术中每1 0 m i n 记录一次七氟醚吸入浓度，术后统计出各患者术中七氟醚吸入平均浓度值。( 见表2 )术后在P A C U 病人完全苏醒拔管后对病人进行V A S 评分。2 2 2 标本收集与处理分别于麻醉诱导前3 0 m i n ( T 1 ) ，切皮后2 h ( T 2 ) 、术毕( T 3 ) 、术后l d ( T 4 ) 、术后3 d
10、 ( T 5 ) 各时点从深静脉导管采集患者静脉血样5 m l 各分装两个标本管：E D T A 抗凝管中l m l 抗凝，4 。C 保存，2 4 h 内采用流式细胞仪检测T 细胞亚群C D 3 + 、C D 4 + 、C D 8 + 、C D 4 + C D 8 + 和N K 细胞( C D 3 _ C D l 6 + C D 5 6 + ) 活性百分数；硅胶促凝管4 m l ，待自然凝固后，B E C K M A NC O U L T E R 高速离心机4 。C 下2 0 0 0 r m i n 离心1 5 m i n ，取上清血清用E P 管标记后置于7 0 。C 冰箱( S a n y
11、 o 8 0 深低温冰箱) 保存。待统一时间取出E L I S A 法测白介素6 ( I L 6 ) 值。第2 章材料与方法2 3 检测方法2 3 1T 淋巴细胞亚群和N K 细胞检测2 3 1 1 仪器流式细胞仪，美国B E C K M A NC O U L T E R 公司产品；水平式离心机；震荡器：试管；移液器2 3 1 2 流式细胞术试剂盒及红细胞裂解液由美国B E C K M A NC O U L T E R 公司生产，备用试剂：红细胞裂解液1 瓶； P B S 缓冲液1 瓶；抗人T 淋巴细胞亚群( C D 3 C D 4 C D 8 ) 单克隆抗体和抗人N K 细胞( C D 3
12、C D l 6 C D 5 6 ) 单克隆抗体各1 支3 m l 。2 3 1 3T 淋巴细胞亚群的测定：取E D T A 抗凝管中新鲜抗凝血5 0 u l ，再加入5 u l 抗人T 淋巴细胞亚群( C D 3 C D 4 C D 8 ) 单克隆抗体标记血样本，混匀，室温避光孵育2 0 m i n 。加入2 0 0 u l 红细胞裂解液，混匀，室温避光1 5 m i n 。用水平式离心机1 2 0 0 r p m 离心5 m i n 。弃上清，加P B S 缓冲液4 0 0 u l ，1 2 0 0 r p m 离心5 m i n 。弃上清，加少许P B S 缓冲液，上机( 流式细胞仪)用C
13、 E L LQ u e s t 软件对结果进行分析。2 3 1 4N K 细胞的测定：取E D T A 抗凝管中新鲜抗凝血5 0 u l ，再加入5 u lN K 细胞( C D 3 C D16 C D 5 6 ) 单克隆三联抗体标记血样本，混匀，室温避光孵育2 0 m i n 。加入2 0 0 u l 红细胞裂解液，混匀，室温避光1 5 m i n 。用水平式离心机1 2 0 0 r p m 离心5 m i n 。弃上清，加P B S 缓冲液4 0 0 u l ，1 2 0 0 r p m 离心5 m i n 。弃上清，加少许P B S 缓冲液，上机( 流式细胞仪)用C E L LQ u e
14、 s t 软件对结果进行分析。2 3 2 白介素6 检测2 3 2 1 仪器3 7 。C 水温箱T h e r m o 公司4 5 0 型酶标仪第2 章材料与方法全自动洗板机样本稀释液可调节移液器和吸头蒸馏水和容量瓶干净试管振荡器和磁力搅拌器2 3 2 2 试剂盒组成7I L 6 试剂盒由南昌万特生物科技公司提供。主要试剂有：包被微孔板8 孔1 2 条酶联亲和物6 m l1 瓶标准品( 1 0 m l 瓶) 6( 0 、2 、”) 、2 5 、5 0 、1 0 0 、2 5 0 ) p g m l ，各1 瓶底物I6 m l1 瓶底物I I6 m l1 瓶浓缩清洗液 1 ：1 0 】稀释5 0
15、 m l1 瓶终止液6 m ll 瓶2 3 2 3I L 6 的测定本研究采用酶联免疫吸附双抗夹心法( E L I S A ) 。步骤：实验前将试剂和待测血清样本放置室温下平衡 2 0 2 8 。C 】。确定检测酶标板孔数目为9 6 T 。将标准品按每孔各1 0 0 u l 依次加入一排孔中，做好标记。将处理后待测血清样本按每孔各1 0 0 u l 依次加入，做好标记。在标准品孔及待测样本孔中分别加入5 0 u l 酶连亲和物，充分混匀。将包被微孔板覆膜并在3 7 。C 孵育反应6 0 分钟后充分弃尽孔内液体并扣干孔内剩余残液，用清洗液反复冲洗5 次，并扣干孔内剩余液体。每孔依照次序分别加入底
16、物I 和I I 各5 0 u l ，充分混匀，在室温下避光反应1 5 m i n 。反应过后每孔分别加入终止液5 0 u l ，充分混匀，终止反应。0 3 0 m i n 内使用酶标仪在4 5 0 n m 下读取O D 值。以标准品浓度由低到高为Y 轴，标准品不同浓度对应O D 值为X 轴，C u r v e E x p e r t l 4 软件绘制出标准曲线( 如下图)第2 章材料与方法 口1 _ C3 协 S = 1 3 3 6 4 6 4 6 7 I | = 0 9 9 9 9 2 6 2 60，毋、 XA x i s L i f t i t s |并得出曲线方程：y ：a + b x + c X 2 ( a _ 6 4 9 e ；b
