四种鸡球虫多价DNA疫苗免疫和程序及其稳定性研究

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1、I M M U N I Z A T I O NP R O C E D U R EA N DS T A B I L I T YO FM U I J I L E N C YI M M I 厂N E R E G U L A T I N GD N AV A C C I N E SA G A I N S TE m 伍R2 = c 4S P P B yJ i a n gR o n g z h iS u p e r v i s e db yP r o f L iX i a n g r u iA T h e s i sS u b m i t t e dt oN a n j i n gA g r i c u l

2、 t u r a lU n i v e r s i t yI nP a r t i a lF u l f d l m e n to ft h eR e q u i r e m e n tf o rt h eM a s t e rD e g r e eo fA g r o n o m yC o m p l e t e di nO c t o b e r , 2 0 1 1C o m m e n c e m e n ti nJ a n u a r y ,2 0 1 2原创性声明I 吣Y 帆2 哪3 哪6 帆吣1 吣4 吣1 矾7 帆本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究

3、工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者( 需亲笔) 签名:秀豫芰洳1 1 年J z 月B 日1 月、 ,。学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权南京农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密口,在年解密后适

4、用本授权书。本学位论文属于不保密Z( 请在以上方框内打“寸)学位论文作者( 需亲笔) 签名:导师( 需亲笔) 签名:笔拽 吾枷劫1 1 年Iz 月;日训年J 2 ,月眵日目录目录摘要。IA B S T R A C T I I I前言V I I第一章鸡球虫病的免疫研究进展l1 鸡球虫病的生活史l2 鸡抗球虫免疫感染特点12 1 球虫的免疫原性12 2 艾美耳球虫的先天性免疫和获得性免疫应答23 球虫保护性抗原的研究进展53 1 表面抗原53 2 虫体细胞器阶段的抗原64 展望7参考文献9第二章鸡球虫D N A 疫苗研究进展一1 31D N A 疫苗的构建1 32D N A 疫苗作用机制。1 53

5、D N A 免疫接种的途径和程序1 63 1 免疫途径1 63 2 免疫剂量1 73 3D N A 疫苗的免疫次数1 74 细胞因子基因佐剂在鸡球虫D N A 疫苗中的应用1 84 1IN F Y 184 2IL - 。2 1 94 3 肿瘤坏死因子( T N F ) 1 95 鸡球虫疫苗交叉免疫保护研究1 96 展望2 0参考文献。2 2第二篇实验研究2 5第三章四种鸡艾美耳球虫免疫调节型D N A 疫苗免疫剂量最佳配比的筛选2 51 材料与方法2 6四种鸡球虫多价D N A 疫苗免疫程序及其稳定性研究2 结果313 讨论3 7参考文献。3 9第四章四种鸡艾美耳球虫免疫调节型多价多表位D N

6、 A 疫苗免疫剂量的筛选4 11 材料与方法4 22 结果4 43 讨j 沦5 0参考文献一5 2第五章四种鸡艾美耳球虫免疫调节型多价多表位D N A 疫苗免疫途径的筛选5 51 材料与方法5 52 结果5 83 讨论6 4参考文献6 6第六章四种鸡艾美耳球虫免疫调节型多价多表位D N A 疫苗首免日龄和免疫次数的筛选6 91 材料与方法7 02 结果7 33 讨论8 0参考文献8 2第七章四种鸡艾美耳球虫免疫调节型多价多表位D N A 疫苗免疫稳定性实验8 51 材料与方法8 62 结果8 93 讨论9 6参考文献9 7全文总结9 9致谢1 0 1摘要四种鸡球虫多价D N A 疫苗免疫程序及

7、其稳定性研究摘要鸡球虫病是严重危害养禽业发展的重要疾病之一,危害比较严重主要有柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫4 个种,临床上往往为这4 个种的混合感染,因此研制抵抗这4 种鸡球虫混合感染的多价疫苗显得十分迫切,本实验室已经构建了抵抗4 种球虫的混合多价D N A 疫苗和多价多表位D N A 疫苗,初步显示了良好的免疫保护效果,为进一步提高多价D N A 疫苗的免疫保护效果,本研究对混合多价D N A 疫苗的配比进行了优化,对多价多表位D N A 疫苗的免疫程序和稳定性进行了研究,如下:本研究第一部分首先在对四种鸡艾美耳球虫免疫调节型D N A 疫苗p V A X

8、 l 0一T A 4 一I F N - ) , 、p V A X l 0 N A 4 I L 2 、p V A X l 0 - E m 8 一I L - 2 和p V A X l 0 3 1 E I F N 吖混合免 疫程序基础上,对其免疫剂量的最佳配比再进行筛选。将柔嫩艾美耳球虫僻t e n e l l a ) 免疫调节型D N A 疫苗p V A X l 0 T A 4 I F N 吖、毒害艾美耳球虫饵n e c a t r i x ) 免疫调节型 D N A 疫苗p V A X l 0 - N A 4 I L 一2 、巨型艾美耳球虫阻m a x i m a ) 免疫调节型D N A 疫苗

9、 p V A X l 0 E m 8 I L 2 和堆型艾美耳球虫隰a c e r v u l i n a ) 免疫调节型D N A 疫苗p V A X l 0 - 3 1 E I F N 吖按5 9 9 :5 9 9 :5 1 t g :5 l a g 、1 0 1 t g :2 5 9 9 :2 5 p g :1 0 9 9 、1 5 1 t g :3 5 9 9 :3 5 9 9 :1 5 9 9 、2 0 p g :5 0 9 9 :5 0 9 9 :2 0 9 9 的剂量混合后免疫雏鸡,试验对各配比剂量设计了感染 柔嫩艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫和四种混

10、合感染各5 个试验组及相应的5 个非免疫攻虫对照组与一个非免疫非攻虫对照组,共2 6组。结果发现免疫剂量混合组1 5 嵋:3 5 p g :3 5 “g :1 5 嵋组在减少Et e n e l l a 、En e c a t r i x 、 Ea c e r v u l i n a 和四个虫种种混合的免疫保护效果最好,A C l 分别为1 8 8 5 0 ,1 8 0 5 0 ,1 8 0 9 1 和1 7 4 5 9 。免疫剂量混合组1 0 p g :2 5 l a g :2 5 9 9 :1 0 1 t g 组对Em a x i m a 感染组的免 疫保护效果较好,A C I 为1 8 1 6 9 。本研究第二部分是将本实验室构建的免疫调节型多价多表位D N A 疫苗p V A X l T A 4 1 N A 4 1 L D

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