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1、独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得( 注；如没查墓他盂要挂别直明的：奎拦亘窒) 或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：咯“翻签字日期：乙口l婷6 月 日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解桂林医学院有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权桂林医学院可以将学位论文的全
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3、1 材料与方法 1 12 实验结果 1 7实验二椎管内麻醉复合电针对断尾大鼠急性应激反应调控效果的影响1 材料与方法 2 l2 实验结果 2 3讨论 2 51 急性应激模型的建立和检测指标的选择 2 52 急性应激反应有效的调控方法 2 63 吸入麻醉复合电针对急性应激的调控作用 2 84 椎管内麻醉复合电针对急性应激的调控作用 2 95 急性应激调控与c lo s 蛋白相关可能的机制 2 9结论 3 1参考文献 3 1附录( 综述) 3 8攻读学位期间发表的学术论文目录 4 6致谢 4 7不同方法对急性创伤性应激反应调控效果的研 究中文摘要目的：观察并对比吸入麻醉、椎管内麻醉、吸入麻醉复合体
4、针、吸入麻醉复合耳针、椎管内麻醉复合体针、椎管内麻醉复合耳针对急性应激模型大鼠体内应激激素水平和下丘脑脊髓中c- f o s 蛋白分泌的影响，探讨其可能的机制，并为临床调控急性应激找寻更有效的治疗方法提供理论依据。方法：实验1 成年雄性S D 大鼠( 重2 8 0 3 2 0 9 ) 5 0 只，随机分五组( n = 1 0 ) ，对照组( I 组，不做处理) 、模型组( I I 组，断尾) 、七氟烷吸入组( I I I 组，断尾+ 七氟烷吸入麻醉) 、七氟烷吸入加体针组( 组，断尾+ 七氟烷吸入+针刺双侧“足三里”穴位电刺激) 和七氟烷吸入加耳针组( V 组，断尾+ 七氟烷吸入+ 针刺双侧“
5、耳尖”穴位电刺激) 。I I I 、V 组大鼠断尾后给予七氟烷诱导，待大鼠翻正反射消失后，I I I 组给予2 七氟烷持续吸入，、V 组分别介入不同针刺疗法，各电针治疗3 0 m in 后，断头处死各组大鼠，取断颈血用酶联免疫法( E L I S A ) 测血清皮质酮( C O R T ) 和促肾上腺皮质激素( A C T H ) 浓度。取下丘脑组织，采用免疫组化A B C 法和W e s t e r nB lo t法测定下丘脑组织cf o s 蛋白的表达水平。实验2 将鞘内置管成功的5 0 只雄性S D 大鼠随机分为5 组( n = 1 0 ) ：对照组( I 组，仅鞘内置管注射生理盐水5
6、0 9 1 ) 、模型组( I I 组，断尾+ 鞘内注射生理盐水5 0 9 1 ) 、鞘内麻醉组( I I I组，断尾+ 鞘内注射芬太尼5 0 9 1 ) 、鞘内麻醉+ 体针组( I V 组，断尾+ 鞘内注射5 0 1 芬太尼+ 针刺双侧“足三里”穴位电刺激) 、鞘内麻醉+ 耳针组( V 组，断尾+ 鞘内注射芬太尼5 0 d + 针刺双侧“耳尖”穴位电刺激) ，断头后取血用E L I S A 法测血清促肾上腺皮质激素( A C T H ) 和皮质酮激素( C O R T ) 水平，取脊髓L 4 6 段，采用W e s t e r nB lo t 免疫印记法测脊髓cf o s 蛋白表达，用1I
7、P P 6 0 凝胶成像系统进行分析。结果：( 1 ) 与对照组大鼠相比，模型组大鼠血清A C T H 值和血清C O R T 值均明显升高( P 0 0 5 ) ；鞘内麻醉复合体针组与模型组相比，脊髓cf o s 蛋白表达上的差异无统计学意义( P O 0 5 ) ，与模型组相比，鞘内麻醉组和鞘内麻醉复合耳针组的c- f o s 表达均有不同程度的减少，且都有统计学意义( P 0 0 5 ) ；实验中取血时间控制在1 2 点左右，排除皮质酮昼夜节律性的干扰。2 2 外周血中血清A C T H 值和血清C O R T 值与对照组相比，模型组血清A C T H 、C O R T 水平明显升高(
8、P 0 0 5 ) 。I V 组与V 组相比，两组间A C T H 值无差异( P O 0 5 ) ，但C O R T 水平V 组比组低( P 0 0 5 ：与m组比较。P 0 0 5 ；与I 组比较P 0 0 5 ；与组比较P o 0 5 ) ，治疗效果无明显差别，见图2 。 、 _ _ t 氰烷复合体针组七氯烷复苜耳针组 图2 各组下丘脑室旁核c- f o s 表述阳性细胞数的变化( X4 0 0 箭头显示的c- f o s 阳性体征)G r a p h2T h ee x p r e s s io no f h y p o t h a la m icc- f o sp o s it iv
9、ece lls2 4 各组下丘脑组织c1 0 s 蛋白W e s t e r nB lo t 成像结果及灰度分析1 9叶叶一一f f 一z k q 20151222I 组c- f o s 表达很少，断尾应激后，I I 组cf o s 表达明显上调( P O 0 5 ) ，V 组与组相比有所降低，差异有统计学意义( P 0 0 5 ；与组比较。P 0 0 5 ) ；V 组与I 相比，c- f o s 表达如约妁0z k q 20151222降低，有统计学意义( P O 0 5 ；与组比较P 0 0 5 ) ，血清C O R T 值9 2 1 l6 1 1 与2 78 1 5 3 5 7 4 相比
10、，复合耳针组低于复合体针组( P ( 0 0 5 ) 。说明七氟烷吸入复合耳针时对C O R T 的下调作用强于七氟烷吸入复合体针的作用。相比于体穴，耳穴周围有丰富的神经分布，有来自脊神经颈丛的耳大神经和枕小神经，有来自脑神经的耳颞神经，面神经、舌咽神经、迷走神经的分支以及随颈外动脉而来的交感神经阳3 | 。可以说，耳穴的作用不是通过单纯的某一条神经的效应而是通过支配某区域的整个神经网起作用，同时耳部穴位还有能与各器官一一对应的靶位点，多途径多系统的参与是耳穴复合全麻作用优于体穴的原因。得到上述结果，可能是因为电针刺激耳穴时，一方面直接刺激耳部迷走神经，通过丘脑系统调节交感神经和副交感神经的平
11、衡，兴奋迷走胆碱能神经纤维抑制交感肾上腺素能作用，调节激素水平变化n4 I ，另一方面能通过激活镇痛机制，抑制痛觉信号传递，从而降低疼痛诱发的应激反应H5 | 。4 椎管内麻醉复合电针对急性应激的调控作用疼痛作为一种伤害性应激源，脊髓背角是其刺激传导的次级中枢，参与多种神经递质表达及调节H6 | 。外周伤害性感受器通过激活背角投射神经元，将伤害性冲动经轴突组成上行通路，传递至高级中枢。同时，脊髓背角接收来自高级中枢下行通路对外周进行调节。蒋奕红等人【4 7 1 的前期研究已证实，椎管内麻醉辅助针刺非神经阻滞区域对吗啡相关并发症具有较好的效果，但当在针刺选穴位于神经阻滞区域，则针刺治疗对吗啡引起
12、的并发症治疗作用减弱。本研究结果显示，椎管内麻醉复合体针刺激后的A C T H 和C O R T 水平为6 4 0 2 4 1 6 和l1 5 5 9 4 4 5相比于单纯椎管内麻醉组的6 3 9 8 4 7 0 和11 4 5 4 4 1 8 无统计学差别( P 0 0 5 ) ，而椎管内麻醉复合耳针后的激素水平比单纯椎管内麻醉组明显降低，有统计学差异( P O 0 5 ) 。说明，在椎管内阻滞有效的麻醉区域实施电针，没有产生对应激有效的调控作用，而在非麻醉区域耳部实施电针时，作用效果明显。很可能是因为：在被椎管内麻醉阻滞的麻醉区域，电针刺2 R激作用无法被感受器接受并上传至中枢，则无法形成
13、完整的应激反应的反射弧，而在非麻醉阻滞区域的耳尖穴，电针作用不仅能经皮下的神经末梢各类纤维传入，能使致痛物质S P ( P 物质) 表达减少，痛域提高n8 | ，还能减弱了伤害性刺激的传入，从而减少中枢得到的伤害信号n9 | 。也有报道哺0 3 ，电针还可以作用于皮下的结缔组织产生联轴效应，将针刺的机械信息转为生物电流传递到所联系的位置，而产生快速强大的针刺效应。或者通过局部生化学说1 ：通过调节炎性反应灶局部致炎细胞因子及抗炎细胞因子之间的平衡解除局部病灶免疫细胞的激活状态从外周途径缓解疼痛。对应激反应产生影响，但这种影响作用微乎其微，无法与电针治疗作用相比。5 急性应激调控与c- lo s 蛋白相关可能的机制大鼠下丘脑c- f o s 蛋白的免疫组化和w e s t e r n 结
