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1、论文题目：愿筮性壶垒匿瘗痘担羞丝线蕉生基因组全庄到分盘砑窥答辩委员会主席：王洒数援答辩委员会成员：自董丕塾援全蕉金塾援昌越7 , 1 1 数援口一丛丛奎红蟹塾拯兰坚鲨堂竺L 一PY l l l 1 1 2 l l J J l 3 f l l l l J 9 f l 1 l J 7 J H 4 l11fllIJ8rJ f J l一T ，V ，Z Ir _ X目录中文摘要1英文摘要3 j 年土 目q 吕61原发性高血压现状62线粒体83线粒体疾病104原发性高血压与线粒体的关系1 1 参考文献13 第一部分线粒体基因变异与原发性高血压关联性分析研究1 6材料和方法l61研究对象162样本资料的入库
2、管理2 03研究方法2 0结果3 04原发性高血压线粒体遗传资源数据库的建立3 05临床资料分析316基因组总D N A 提取、P C RJ _ , 7 , 及测序结果3 27线粒体基因变异分析3 38统计分析7 29保守性分析7 310二级结构分析8 01 1重点家系永生化淋巴细胞的建立8 2分析和讨论8 3 第二部分：线粒体单体型与原发性高血压表型表达的相关性分析研究9 0材料和方法9 01研究对象9 02研究方法9 03种系发育分析9 14统计学分析9 5结果9 65临床资料在单体型中的分布特点9 6温州医学院博士学位论文6统计学分析1 0 0分析和讨论1 12，j 、结1 1 4参考文
3、献1 1 7附录1 19致谢1 3 21 宗王蔓1 3 3 学位论文独创性声明1 4 9温州医学院博士学位论文原发性高血压疾病相关的线粒体全基因组序列分析研究中文摘要全球高血压患者约1 0 亿。目前我国约有2 亿高血压患者，而且每年新增高血压患者1 0 0 0 万人。心血管疾病是全球造成死亡的首要原因，高血压是首位危险因素。2 0 0 3 年世界卫生组织( W H O ) 国际高血压联盟( I S H ) 估计高血压在全球造成了7 1 0 万非正常死亡和4 5 的疾病经济负担。我国人群监测数据显示心脑血管死亡占总死亡人数的4 0 以上，每年3 0 0 万心血管死亡中至少一半与高血压有关，严重影
4、响人类的健康。不仅如此，我国高血压患者总体的知晓率、治疗率和控制率分别低于5 0 ，4 0 和1 0 。我国高血压呈现年轻化趋势，正常高值血压水平人群占总成年人群的比例不断增长，尤其是中青年，已经从1 9 9 1年的2 9 增加到2 0 0 2 年的3 4 ，而且高血压患病率随年龄增长而不断升高，并表现出地域差异性。高血压按照发病原因可以分为原发性高血压和继发性高血压。原发性高血压约占所有高血压的9 0 9 5 。原发性高血压是由遗传和环境等多因素相互作用引起的。遗传因素又包括核基因和线粒体基因。由于线粒体在人类进化和环境适应中发挥着重要的作用，而且一些研究报道发现了原发性高血压的母系遗传规律
5、。目前报道的与原发性高血压发病相关的线粒体突变包括：t R N A M e t t R N a G I nA 4 4 01G ，t R N A P h 。C 5 9 3 T 和t R a v AmT 4 3 5 3 C ，t R N A M 。tA 4 4 3 5 G ，t R N A 玎e A 4 2 6 3 G 、T 4 2 9 1 C 和A 4 2 9 5 G 以及1 2 Sr R N AA 1 5 5 5 G 突变等，提示线粒体t R N A 基因可能是高血压发病相关的突变热点区域。这些突变导致的线粒体t R N A代谢水平、蛋白质翻译水平、呼吸链功能、A T P 、R O S 及氧耗
6、率等的改变表明：线粒体t R N A 突变在原发性高血压发生发展中发挥一定的作用，线粒体基因可能是原发性高血压发病的重要分子机制之一。1 9 9 9 年，W a l l a c e 提出线粒体单体型与疾病相关的观点之后，线粒体单体型在疾病发生发展中的作用逐渐受到关注，一系列重要的研究成果表明线粒体单体型在疾病发生发展中发挥重要的作用。目前已经发现线粒体单体型儿和J 2 在L H O N 的表型表达中发挥作用。单体型H 可以降低携带G 1 1 7 7 8 A 突变的L H O N # - 显率。东亚人群中的研究表明，单体型M 7 b l 2 是携带G l1 7 7 8 A 突变的L H O N
7、的危险因素，而M 8 a 贝t 是携带该突变的L H O N 的保护因素。单体型N 9 a 则对2 型糖尿病具有保护作用。因此，本研究针对上述研究现状，通过开展原发性高血压相关的线粒体变异关联性分析和线粒体单体型在原发性高血压表型表达中的作用两方面研究，进一步揭示线粒体相关的原发性高血压分子致病机制，从而为原发性高血压疾病的预防、临床分子诊断、基因治疗以及遗传咨询的深入开展提供一定的理论依据和实验基础。温州医学院博士学位论文第一部分：线粒体基因变异与原发性高血压关联性分析研究高血压是心血管疾病的最主要的危险因素。原发性高血压占高血压的比例为9 0 9 5 。研究显示部分原发性高血压家系具有母系
8、遗传特征。线粒体基因突变可能是原发性高血压分子致病机制之一。目前已经报道的原发性高血压相关的线粒体D N A 突变包括：t R N A t g N AmA 4 4 0 1 G 突变，t R N A P h 。C 5 9 3 T 和t R N A G l “T 4 3 5 3 C 突变，线粒体t R N A M e A 4 4 3 5 G 突变，t R N A n 。A 4 2 6 3 G 、T 4 2 9 1 C 和A 4 2 9 5 G突变以及1 2 Sr R N AA 1 5 5 5 G 突变等。提示线粒体t R N A 可能是原发性高血压相关的突变热点区域。这些突变影响线粒体t R N
9、A 的结构和功能，进而影响线粒体蛋白质翻译，导致A T P 合成减少，活性氧分子产生增加，线粒体呼吸功能出现缺陷。线粒体t R N A 突变导致的线粒体功能缺陷可能参与了高血压的发生发展。因此，本研究通过对2 1 3 例原发性高血压患者和2 1 0 例正常对照样本进行线粒体全基因组关联分析，保守性分析和二级结构改变分析等，筛选出可能与原发性高血压相关的线粒体D N A 变异，结果如下：t R N A 帅T 5 5 5 3 C ( U A1 ) ，t R N A 川8T 5 6 2 8 C( U A1 ) ，t R N A A S pG 7 5 2 1 A ( A Ut ) ，t R N A G
10、 l uA 1 4 6 9 6 G ( G C ) 和t R N A T h A 1 5 9 5 1 G ( A U1 ) 等。通过进一步完善家系资料，具有明显母系遗传特点的家系建立永生化淋巴细胞株，为下一步开展线粒体功能验证奠定基础。第二部分：线粒体单体型与原发性高血压表型表达的相关性分析研究原发性高血压是由遗传和环境等多因素相互作用引起的。线粒体在人体与环境相互适应中发挥着重要的作用，而且在一些研究中发现原发性高血压具有母系遗传规律，提示线粒体基因可能是原发性高血压发病的分子基础之一。除了线粒体疾病相关的突变研究以外，线粒体单体型在线粒体相关的疾病中发挥的作用越来越受到重视，然而原发性高血
11、压相关的线粒体单体型方面的研究仍很缺乏。因此，本研究以2 1 3 例原发性高血压患者和2 1 0 例正常对照为研究对象，结合已经发表的18 4 9 例中国人群线粒体单体型分型的结果，把4 2 3 例样本的单体型分为：A ，B 4 ，B 5 ，C ，D 4 ，D 5 ，F ，G ，M 术，M 7 ，M 8 ，M 9 ，N 9 ，R 9 ，Y 和Z 来调查线粒体单体型在原发性高血压表型表达中的作用。结果显示：线粒体单体型M 8 a 和N 9 在原发性高血压组和正常对照组中具有明显差异，p 一9 0 m m H g 。其中收缩压 1 4 0 m m H g 同时舒张压 9 0 m m H g ) 进
12、行血压水平分类。以上高血压的分类在男、女性以及1 8 岁以上任何年龄的成人中均适用。血压水平S B P1 2 0 1 3 9 D B P8 0 8 9 m m H g 定为正常高值是根据我国高血压流行病学调查研究的结果确定的。该血压水平的人群1 0 年后心血管患病风险是血压水平为11 0 7 5 m m H g 的人群的1 倍以上，血压S B P1 2 0 1 2 9 D B P8 0 8 4 m m H g 以及血压1 3 0 1 3 9 8 5 8 9 m m H g 的中年人群，其1 0年后分别约4 5 和6 4 的人成为高血压患者。表1 高血压的分类当收缩压和舒张压分属于不同级别时，以
13、较高的分级为准。高血压按照发病原因分类分为：原发性高血压和继发性高血压。原发性高血压是以血压升高为主要临床表现，伴或者不伴有多种心血管危险因素的综合症，约占所有高血压的9 0 9 5 。继发性高血压是指由某些确定的疾病或病因引起的血压升高，约占所有高血压的5 1 0 。1 4 1 2 高血压诊断高血压患者的诊断性评估包括：确定血压水平及其它心血管危险因素。其中温州医学院博士学位论文血压测量仍然是目前血压水平评估、高血压诊断以及降压疗效观察的主要手段。目前诊室血压仍然是血压水平评估以及临床高血压诊断及分级的常用方法，诊室血压由医护人员在诊室内按统一规范进行测量。2线粒体线粒体( m i t o c h o n d r i o n ) ，是一种由两层膜包被的细胞器，直径0 5 到1 0
