《可溶性P选择素、血小板激活因子与心肺复苏的关系探讨》由会员分享，可在线阅读，更多相关《可溶性P选择素、血小板激活因子与心肺复苏的关系探讨（53页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、兰州医学院硕士学位论文可溶性P-选择素、血小板激活因子与心肺复苏的关系探讨姓名：姚巍申请学位级别：硕士专业：急诊医学指导教师：陈天铎;李培杰2002.5.1王里墨塾墨兰! 主竺垦苤塑望里生塑圭笪! 谭题论著可溶性P 一选择素、血小板激活因子与 心肺复苏的关系探讨摘要背景和目的：心跳骤停、心肺复苏机体经历j 缺血再灌注过程，不仅细胞因子发生了变化，而且粘附因子也生了改变。目前已证实细胞因子、P 一选择素与心肺复苏后全身炎性反应综合征( S I R S ) 及脓毒血症有关，且可溶性P 一选择素、血小板激活因子( P A F ) 近年来在心、脑缺血再灌注损伤方面日益受到重视，但不知能否成为恢复自主循
2、环( R O S E + ) 、R O S E + 后S I R S 及脓毒血症评定的标准。方法：将复苏组6 0 例分为恢复自主循环 O 0 5 ) ；R O S C - 患者c A 时、C P R 后P 一选择素、P A F 分别较R O S C +患者P 一选择素、P A F 浓度高( P O 0 5 ) ：S I R S 组、脓毒血症组P 一选择素、P A F 、T N F 。分别高于非S I R S 组、非脓毒血症及对照组( P O 0 5 ) ：s P s e l e c t i n 、P A F 、T N F 。l e v e l sw e r eh i g h e ri np a
3、 t i e n t s 、撕t hS I R S 、s e p s i sc o m p a r e dw i t hp a t i e n t sw i t h o u tS I R S 、s e p s i so rc o n t r o lg r o u p C o n c l u s i o n ：C i r c u l a t o r ys t a n d s t i l la f t e rc a r d i a ca r r e s tc a u s et i s s u ei s c h e m i a ，r e s t o r a t i o no fa d e q u a
4、 t eo r g a np e r f u s i o nc h a n g ec o n g u l a t i o nm e c h a n i s m ，i tm a k et h r o m b mt oc h a n g ea n dP - s e l e c t i n 、P A Fa d h e r e n c ei ne n d o t h e l i a lc e l lo fb l o o dv e s s e lc a u s ei s c h e m ai n j u r y ，i to f t e nm a k ec y t o k i n ee l e v a t
5、 i o nc a u s eS I R S A l t h o u g hs P - s e l e c t m 、雕岖、n 师。m i g h th e l pi d e n t i f yS I R S 、s e p s i si np a t i e n t sw i t hR O S C ，t h e yC a nn o te s t i m a t eR O S C K E YW o r d s ：s P - s e l e c t i nP A Fc y t o k i n eC P R止前言心跳骤停、心肺复苏是临床各科面临的一大难点，近年来国陡外临床医师致力于其病理生理研究，在
6、血管活性物质方面取得了很大进展，但在免疫因子方面却涉及的很少。2 0 0 0 年罗显荣n 首次在国内报道了细胞因子与心肺复苏的关系，并提出了心肺复苏成功后，启动促炎因子和抗炎因子，表现为促炎因子和抗炎因子都增高，有可能导致S I R S 的发生。国外G e p p e r t 2 报道了可溶性P 一选择素、E 一选择素与心肺复苏的关系，发现S I R S 是心肺复苏后的非特异性反应，发生率6 6 ，S I R S 与肾上腺素剂量、血乳酸水平、恢复自主循环的时间无关。可溶性P 一选择素在S I R S组明显高于非S I R S 组及对照组，P - 选择素浓度与一周后的脓毒血症呈正相关。与对照组相
7、比，可溶性E 一选择素在S I R S 组、非S I R S组均增高，两者无差异性，E 一选择素浓度与生存率呈正相关。c a n d - s 、也通过血清中的E 一选择素、P 一选择素、L 一选择素、细胞间粘附因子、血管间粘附因子与心肺复苏的关系，推论出心肺复苏的过程是一个炎性反应过程。1 9 9 9 年C a n d oS 又在T h r o m bR E S 幅杂志上发表文章探讨了凝血酶与心肺复苏的关系，提出凝血因子在心肺复苏过程中被激活，心肺复苏过程中存在凝血酶增多。近年来选择素家族在心、脑血管缺血再灌注损伤作用越来越受到人们的重视并被深入研究( 6 - 3 3 ) ) 众所周知P 一选
8、择素是在凝血酶激活后被激活，而凝血酶激活常使P 一选择素、P A F 迅速表达于内皮细胞上，P 一选择素与白细胞配体结合，介导其滚动作用并将其锚定于内皮细胞上，同时P A F 与细胞表面受体结合，使白细胞- 5 一活化，并促进自细胞整合素，从而诱导白细胞稳定内皮细胞粘附c z 。p - 选择素所介导的白细胞在心、脑缺血再灌注损伤的作用目前已被证实( 6 - 3 3 ) 而心肺复苏过程存在着心脑的缺血再灌注，为进一步探讨P 一选择素及血小板激活因子在心肺复苏中地位，为临床医生提供诊断的标准，填补国内空白，选取符合标准心肺复苏6 0 例，通过凝血酶、P 一选择素、P A F 、T N F 。测定，
9、来探讨免疫因子在心肺复苏的病理生理改变的作用，P 一选择素、P A F 能否成为心肺复苏成功的诊断标准，P 一选择素、P A F 、T N F 。是否能预测心肺复苏成功后S I R S 与脓毒血症的发生。材料与方法( 一) 病例选择及分组：心肺复苏组( C P R 组) 6 0 例按恢复自主循环标准分为恢复自丰循环( R O S C + ) 2 5 例、未恢复自主循环( R O S C 一) 3 5 例。排除因感染、肿瘤、肝肾功能不全、外伤等因素所致心跳、呼吸骤停者，所有患者均在急救中心发生心跳骤停( C A ) ，并经心电图或心电监护证实，对室颤患者应先除颤，若不成功，则按C P R 常规技
10、术抢救。其中心肌梗塞1 5 例、心律失常l O 例、脑梗塞1 5 例、脑出血l O 例、药物中毒1 0 例；男性3 8 例、女性2 2 例：年龄为1 4 7 5 岁。对照组1 0 例均为非危重患者( 隐匿性冠心病、缓解期高血压、颈椎病) ，年龄为4 0 一6 5 岁，近期无感染史。R O S C + 患者均实施机械通气，R O S C + 4 8 后按S I R S 诊断标准三项中达到两项或以上者( 1 体温 3 8 2 ：2 心率 9 0 次分：3 自细胞计数 1 2 1 0 9 L或 2 0 次分或P a C 0 2 1 3 0 分钟者，均判断为恢复自主循( R o S c + ) ，反之
11、则判定为未恢复自主循环( R O S C 一) 。( 三) 2 4 小时或出院存活标准：自主循环恢复正常( 用或不用血管活性药物) ，有或无自主呼吸，凡时间2 4 小时，则定为2 4 小时存活：自主心律、自主呼吸和意识均恢复c A 前水平，则成为出院存活。( 四) 标本采集及保存1 复苏组按自主循环恢复标准分为R O S C + 组、R O S C 一组。R O S C +组患者分别在心跳骤停( c A ) 时、R O S C + 后、R O S C + 4 8 小时后分别采抽静脉血5 m l ，R O S C - 组分别在c A 时、复苏失败后抽静脉血5 m l 。在C P R 一周内根据脓
12、毒血症发生，将复苏成功病例超过4 8 小时患者分脓毒血症组和非脓毒血症组，各抽静脉血5 m l ，以上静脉血分两试管( 为保证测试准确性，试管选用硅胶管) ，一管3 m l 用E D T A N a 2 抗凝，3 0 0 0 R m i n 离心下分离出血浆，用于测定可溶性P 一选择素( s P - 选择索) ，另一管2 m l 采用枸橼酸钠抗凝，3 0 0 0 R m i n离心下分离出血浆，在1 0 0 0 0 R m i n 下浓缩血浆成原来的1 4 体积，用于测P A F 的范性。对照组抽空腹静脉血，处理同复苏组。以上血浆在低温( - 7 0 变) 保存( 低温冰箱由兰州医学院第二附属
13、医院检验中心提供) ，以免失去生物活性。2 复苏过程中采静脉血3 n l ，用枸橼酸钠抗凝( 一份抗凝液+ 9份全血) ，试管选用硅胶管，3 0 0 0 R m i n 离心下分离出血浆，分别用于测定凝血酶原时间( P T ) 、活化部分凝血活酶时间( A P l v r ) 、可溶性纤维蛋白单体复合物( S F M C ) 3 在C A 时、复苏成功后即刻、2 小时、4 小时、6 小时、9 小时、1 2 小时及复苏成功4 8 小时病例中S I R S 组、非S I R S 组、脓- 8 -毒血症组、非脓毒血症组分别采静脉血2 m l ，采用枸橼酸钠抗凝，3 0 0 0 R m i n 离心下
14、分离出血浆，用于测定血浆中T N F 。同样对照组挞空腹静脉血，处理R O S C + 组。以上血浆同样也需低温保存。( 五) 检测方法及试剂来源：1 p - 选择素方法：1 ) 检测原理：采用酶联免疫吸附双抗体夹心法原理定量测定血浆中P 一选择素水平。包被抗人P 一选择素抗体与代测血浆中P 一选择素结合，加入酶标抗体后形成复合物，后者与底物作用呈现显色反应。4 9 2 n m 处测得的A 值与代测血浆中P 一选择素含量成正相关。2 ) 试剂盒组成：试剂盒由奥地利B e n d e rM e d s y t e r o sD i a g n o s t i c sG M B H 公司提供。可拆
15、式包被反应条：1 6 孔x 6酶标抗体：3 支。标准品：3 支1 0X 稀释液：1 瓶。底物：3 瓶。2 0X 洗液：1 瓶。0 2 ：1 瓶终止液：l 瓶。3 ) 方法：试剂重建：浓稀释液用前置于3 7 度水浴1 5 m i n ( 因为母液盐浓度高，冰箱保存易结晶析出) ，然后用蒸馏水作1 0 倍稀释( I m l 浓稀释液+ 9 m l 蒸馏水) 。浓洗液用前置于3 7 度水浴1 5 m i n ( 因为母液盐浓度高，冰箱保存易结晶析出) ，然后用蒸馏水作2 0 倍稀释( 1 m l浓洗液+ 1 9 m l 蒸馏水) 。将每支酶标抗体用4 O m l 稀释液溶解。将每支标准品用3 0 0
16、 u l 稀释液准确复溶( 8 0 n g m 1 ) ，取1 5 0 u l ，用稀释液作5 次倍比稀释，得浓度为8 0 、4 0 、2 0 、l O 、5 、2 5 n g m 1标准点。加样：每孔加不同浓度标准品或待测血浆l O O u l ，3 7 度孵育9 0 分钟。清洗：弃去反应孔内液体，用洗液注满各孔，静置3 分钟，甩于，反复三次后拍干。加酶标抗体：每孔加入酶标抗体l O O u l ，3 7 度孵育6 0 分钟。清洗：弃去反应孔内液体，用洗液注满各孔，静置3 分钟，甩干，反复三次后拍干。显色：临用前每瓶底物用5 m l 蒸馏水溶解，然后加入3 5 u 1 心0 ，混匀。每孔加入底物液1 0 0u l ，3 7 度孵育1 5 - 2 0 分钟。终止：每孔加终止液5 0u l 。比色；在酶标仪上4 9 2 n m 处，以空白孔调零，测定各孔值。4 ) 数据处理：以A 4 9 2 对P 一选择素标准样品浓度( n g m 1 )
