《β防御素2在机械通气相关性肺炎发生、发展和防护中作用的实验研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《β防御素2在机械通气相关性肺炎发生、发展和防护中作用的实验研究（118页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、华中科技大学博士学位论文-防御素-2在机械通气相关性肺炎发生、发展和防护中作用的 实验研究姓名：武庆平申请学位级别：博士专业：麻醉学指导教师：姚尚龙2003.4.1华中科技大学同济医学院2 0 0 0 级博士学位论文英文缩略词表及中文对照英文缩写英文全称b e t a d e f e n s i n 一29 1 y c e r a l d e h y d e sp h o s p h a t ed e h y d r o g e n a s ep s e u d o m o n a sa e r u g i n o s eb r o n c h o a l v e o l a rl a v a
2、 g ef l u i dr e v e r s et r a n s c r i p t i o np o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o nm e s s a g er i b o n u c l e i ca c i dC o n v e n t i o n a lm e c h a n i c a lv e n t i f a t i o np e r m i s s i v eh y p e r c a p n i ap o s i t i r ee n de x p i r a t o r yp r e s s u r el i p o
3、p o l y s a c c h a r i d ei n t e r l e u k i n lb e t at u m o rn e c r o s i sf a c t o r a l p h ap a t h o g e np a t t e r nR e c o g n i t i o nR e c e p t o r sC D 4 + C D 4 5r e c e p t o r6中文全称重症监护病房机械通气相关性肺炎B 一防御素一2大鼠O 一防御素一2磷酸甘油脱氢酶铜绿假单胞菌支气管肺泡灌沈液逆转录聚合酶链式反应信使核糖核酸常规机械通气允许性高碳酸血症呼气末正压脂多糖白细胞介素
4、一1 口肿瘤坏死因子一a病原体识别受体C D 4 + C D 4 5 受体6，屯旷即“0o0印01卜照；呈印船卧M盯陀脓叫州雎“儿州印华中科技大学同济医学院2 0 0 0 级博士学位论文1 3 一防御素一2 在机械通气相关性肺炎发生、发展和防护中作用的实验研究博士研究生：武庆平博士生导师：姚尚龙教授华中科技大学同济医学院附属协和医院中文摘要f 机械通气是重症监护病房( I C U ) 中用于术后支持和抢救各种原因所 致呼吸停止和呼吸衰竭重要的治疗手段。在呼吸机使用过程中所发生的肺炎称为机械通气相关性肺炎( 又称呼吸机相关性肺炎，v e n t i l a t o r a s s o c i a
5、 t e dp n e u m o n i a ，V A P ) 已日益引起人们的重视。在接受机械通气治疗的病人中V A P 的发生率多在8 2 8 之间；死亡率为2 4 5 6 。虽然近年来在V A P 的诊断、治疗和预防方面取得了许多进展，但因其发病机制仍未完全清楚阐明，V A P 仍然是院内感染和死亡的主要原因之一。新近发现的B 一防御素一2 ( b e t a d e f e n s i n 一2 ，B D 一2 ) 广泛存在于呼吸道粘膜上皮组织中，其功能的失活与病原微生物集落、定植于呼吸道粘膜上皮而导致严重的感染关系密切。- 本研究着重探讨1 3 一防御素一2 在机械通， 气相关性肺
6、炎发病机制和防护中作用。本研究分五部分。f ( 1 ) 机械通气 t 相关性肺炎动物模型的建立，( 2 ) B 一防御素一2 在机械通气相关性肺炎发病机制中作用，( 3 ) 在机械通气相关性肺炎中不同年龄对B 一防御素一2 表达的影响，( 4 ) 在机械通气相关性肺炎中不同通气时间对B 一防御素一2 表达的影响，( 5 ) 在机械通气相关性肺炎中保护性通气模式对B 一防御素一2表达影响一 j 、2华中科披大学同济医学院2 0 0 0 级博士学位论文第一部分大鼠机械通气相关性肺炎动物模型的建立目的建立大鼠机械通气相关性肺炎( V A P ) 的动物模型，并确定合， 适酌锈绿缓荦藏蓠( P 鼬接静
7、浓度。f 方法3 2 只键康清滔级雄性成年s D 大 | 鼠随机分为四组：对照组、0 5 M 组、1 M 组和2 M 组。每只大鼠采用经口气管插管枫械通气2 4 小时后，对照组经气管内接种生理赫水0 2 m l ，另三组经气镑内分别以0 5 M 、1 M 及2 M 浓度注入P A 复制V A P 动物模型。观察大鼠肺组织病理切片及支气管肺泡灌洗液( B A L F ) 和心腔血细菌学检查。缝果在接静默三组中，除0 5 M 缓有2 只大藏寒出瑗黪炎鏊臻秘癌瑾袭观外，其余均见不同程庹肺炎症状和病理改变。0 5 M 组中2 例大鼠正常，轻、中旋小时褴耱炎瘸疆学改变各3 翻：l 麓缝中、重度耱缝绫耱炎
8、瘸壤变化占7 5 ；2 M 组中重度肺炎瘸理变化为6 2 5 。对照组无一只出现上述病理学变纯。2 粥组有3 只大鼠毵亡。三个不同浓度P A 缀之间巍细菌培养阳性率肖显著性差异，2 M 组血细菌培养闲性率为7 5 ，明显高于其他两缎；l M 和2 M 两组的B A L F 细菌培养持续阳性率为1 0 0 ，明显离于0 5 M 组( 5 0 )和对照缀( o ) 。一俺论1 M ( 3 X l O “ C F U r a l ) 缨菌接秘浓度复制V A P 模型较，、为理想。我们应用改良气管插管和静脉穿刺等技术配合选用占V A P 发病酋位斡锶缀缓单黪蘧气管内接耱，成功懿建立了大鼠V A P 模
9、型。本法复裁豹动物模型，感染部位准确，病变赎型，稳定性和蘑复性好，且不需要特殊纹器设铬，篷褥维广瘟麓。华中科技火学阊济医学院2 0 0 0 级博士学位论文第二部分p 一防御素一2 在机械通气相关性肺炎发病机制中作用的实验研究目的观察铜绿假单胞菌( P A ) 肺部感染前后肺组织B 一防御索一2 基医秘蛋毫蒺憨表达变纯，搽讨糖组织熬3 一跨鳎素一2 在援域邋气相关性转炎( V A P ) 发病机制中的作用。防法7 2 只健康清洁级雄性成年s D 大鼠隧掇分成对照组、税藏逶气缱和裔麓拿瘩割缀。透气缝中2 4 只大鬣袋莠l 经口气管插管机械通气2 4 小时后，经气管内注入铜绿假单胞菌( P A )
10、复制肺部感染模罄。对照缝和都翻组大鼠无需褫械通气，经目气管插警接稀P A 。分别于接弛细菌后O h 、1 。5 h 、3 h 、6 h 、1 2 h 、l d 、3 d 和5 d 各耿3 只大鼠处死剖胸取左中、下肺组织，部分用于瘸理学枪测。聚用逆转录聚合酶链式反应( R T P C R ) 和蛋瞧质免疫学测寇( W e s t e r nb l o t ) 技术测定实验大鼠p 防御素一2m R N A 和蛋白质表达的变化。结果三组在气管内注入镧绿簸零貔莛3 h 痰弦缀织中圣一耱磐素一2 基因表达楚予较低隶平豆无显著性差异( P O 0 5 ) ，通气组中p 一防御素一2 基因和蛋白质的表达上调
11、水平在3 h 后辩段显著羝于对照缝( P 6 0 ) ，其中又以铜绿假单胞菌占首位( 2 4 4 ) “1 。机械通气相关性肺炎( V A P ) 的发病机制虽与多耪因素有关，但发生V A P 必须具答下烈条 牛之一：患者静防御功能发生降碍；有足够数量的致病菌达到患者的下评嗷道并破坏患者的自身防御机制，或者出现致病性很强的细菌。目前机械通气引起防御功能发生障碍纲腿和分子虮制鸯待避一步阐明。枧搬通气射瘸原蘩镘入秘定檀浮嗷遒的方式为：口旗部定植蔼酌“误嗷”、霄腔内缁菌的逆行、嗷入带菌气溶胶和细菌生物被膜形成等”。虽然V A P 的诊断技术和抗生素应用巍所进展，但V A P 的死亡率并炙明显下黪“1
12、 。爨越，髫兹研究重点主要针对V A P 荔惑危险因素及发病梳翻所采取的防治搔旋。新近研究发现的B 防御素一2 ( b e t a d e f e n s i n - 2 ，B D 一2 ) ，她磐】广泛存在予孵吸道牯膜土皮缀织中，其功缝懿失活与病原徽生物定檬、集落于秸貘上皮诱导致严重的感染关系密切潲。B 一防御素一2 是种具有亲水和4些生型丝盔堂旦塑堕堂堕! ! ! ! 丝堕主堂照堡奎亲脂双爨性的小分子抗菌肽，与细胞膜的磷脂结合，破坏细胞膜，引起微生耱死亡睁”3 。8 D 一2 黯鼙兰氏鬻往、溺瞧蓠帮粪菠都鸯强烈翡蓉惨 睾爝，相对而宙对革兰氐阴性菌( 如铜绿假单胞菌、大肠杆菌等) 杀伤力更强
13、”8 1 2 - 1 4 oB D 一2 其有特殊瀚抗菌税制( 鄹炎症诱导性) ，在静态机体的上皮组织表颤的化学屏障系统中含有微量的B D 一2 。当这种屏障受到损害( 如细菌感染或损伤等) 时，细菌及产物( L P S ) 接近皮肤和上皮细胞与其病原体识别受体( P P R R s ) 结合，并在多静炎瘥因子( T N F a 、I L l 等) 参与下，B D 一2 基因启动子区域转录因子活化，从而成倍地增加肋一2 基因和礞泰矮翡袭达“。“8 。最返麴一些磺究发臻在黪魏气管上皮缓织中转转一2 基嚣被革兰式阴性菌强烈诱导转录和翻译，并高效地杀灭这些病原菌( P A ) 。绝们证实如B D 一
14、2 产生戢作蠲祓静藩杭髂将发生膝部感染。表鹤8 D 一2 在搿吸道对抗病原菌侵入和定植中发挥重要抗菌作用，是机体呼吸道中重要的天然防御成分“”。V a l o r e 等“7 姘究发现在高盐浓度环境中B D 一2 的抗菌作用明显受到抑制。最近研究发现B D 一2 的抗菌作用由N a C l 浓度秘自身产生爨决定，B D - 2 在N a C l 浓度高出生理盐浓度的环境中丧失活性，从而无法发挥撼壤效果“。韭强，B D 一2 砖未成熟辩突状缨照积记忆型l 缨腿有趋化作用，树突状细胞不仪通过活化T 细胞产生细胞毒作用，而且还活化B镪您产璺三特异瞧撬钵，满蕊缨藏免疫秘体滚受痰8 ”。黯一2 灸疫诱导
15、瞧袭达和高散杀灭耐药病原微生物的特性，将为抗病原菌定檬和抗感染治疗提供一个耪豹途径。本磷究着重探讨一防御素一2 在枫械通气鞠关往肺炎发病机制和防护作用。本研究分五部分：( 1 ) 通气相关性肺炎动物模型的建立，( 2 ) 仔一防御素一2 程机械通气相关性肺炎发病机制中作用，( 3 ) 在V A P中不同年龄对一防御素一2 表达的影日晦，( 4 ) 在V A P 中不阕通气时间对一防御素一2 表达的影响，( 5 ) 在V A P 中保护性通气对6 一防御素一2 寝达影响。华中科技大学同济医学院2 0 0 0 级博士学位论文参考文献1 C e n t e r sf o rd 1s e a s eC
16、 o n t r o la n dP r e v e n t i o n M o n i t o r i n g h o s p i t a la c q u i r e di n f e c t i o n st op r o m o t ep a t i e n ts a f e t y ：u n i t e dS t a t e s 1 9 9 0 1 9 9 9 M M W R2 0 0 0 ，4 9 ：1 4 9 1 5 3 2 N a t i o n a lN o s o c o m i a I n f e c t i o n sS u r v e i l l a n c e ( N N I S ) S y s t e m N a t i o n a lN o s o c o m i a lI n f e c t i o n sS u r v e i I l a n c e ( N N I S ) S y s t e mr e
