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1、1RPHPLC法测定镇咳灵合剂中橙皮苷的含量作者：龙荣，祝文兵，彭芳玲，胡勤【摘要 】 目的：建立 RPHPLC 法测定镇咳灵合剂中橙皮苷的含量。方法：采用 Hypersil ODS2（4.6 mm200 mm，5 m）色谱柱，流动相乙腈 水（1981 ） ，流速 1.0 mL/min，检测波长283 nm。结果：橙皮苷在进样量为 0.63285.0624 g/mL 范围内线性关系良好，回归方程为 Y=190.570X2.789（r=0.999 9，n=6） ，平均加样回收率为 101.10%，RSD 为 1.54%。结论: 本方法测定简便，结果准确，重现性好，可作为制剂的质量控制。 【关键词
2、】 镇咳灵合剂；橙皮苷；反相高效液相色谱法；含量测定 Abstract Objective: To establish a RPHPLC method for determination of the content of hesperidin in Zhenkeling mixture. Methods: The separation was performed on a Hypersil ODS2 (4.6 mm200 mm, 5 m) column. The mobile phase was acetonitrilewater (1981), the flow rate was 1.0
3、mL/min, the detecting wavelength was at 283 nm. Results: The hesperidin had a good linear relation between 20.63285.0624 g/mL (r=0.9999, n=6), the average recovery was 101.10%, RSD was 1.54%. Conclusions: This method was simple, accurate and repeatable. It can be used for quality control in producti
4、on of Zhenkeling mixture. Key words Zhenkeling mixture; Hesperidin; RPHPLC; Assay镇咳灵合剂为我院自制制剂，由板兰根、陈皮、川贝、荆芥、金银花、桔梗、杏仁、地龙、浙贝母等中药组成，具有清热宣肺、止咳祛痰的功效，主治咽喉红肿、痰白稠黄、大便干结之热咳。原质量标准仅有常规检查及鉴别检查，无含量测定。橙皮苷为陈皮中所含有效成分，已有文献报道制剂中橙皮苷的含量测定方法13 ，但对镇咳灵合剂中橙皮苷的含量测定未见报道。本文采用反相高效液相色谱法对镇咳灵合剂中橙皮苷进行含量测定，以控制其内在质量，方法学考察结果令人满意。1 仪
5、器与试药Agilent 1100 高效液相色谱仪， Agilent 1100 VWD 检测器，Chemstations 工作站（Agilent 公司，美国） ；梅特勒 托利多AB135S 电子分析天平（瑞士） ；TG16W 微量高速离心机（长沙3湘仪离心机仪器有限公司） ；WH2 微量旋涡混合仪（上海沪西分析仪器厂）橙皮苷对照品，中国药品生物制品检定所提供，批号110721200613；镇咳灵合剂，自制，规格 100 mL，每毫升含陈皮药材 70 mg，批号：070320、070410、070428、070605、070710；甲醇、乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水。2 方法与结果2.1 色谱条件色
6、谱柱：Hypersil ODS2（4.6 mm200 mm，5 m） ；流动相：乙腈 水（1981） ，流速：1.0 mL/min；检测波长：283 nm；柱温：30 ；进样量：10 L。理论塔板数按橙皮苷峰计算不低于 2 000。此条件下主峰与杂质峰达到基线分离（R1.5） 。2.2 对照品储备液的配制精密称取橙皮苷对照品 7.91 mg，置 25 mL 量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，得到浓度为 0.3164 mg/mL 的橙皮苷对照品溶液，4取上述溶液用甲醇稀释成质量浓度为 63.28 g/mL 的对照品储备液，备用。2.3 样品溶液的制备精密量取 1 mL 镇咳灵合剂，置于 25 mL
7、 量瓶中，加甲醇适量，超声处理 20 min 放置至室温，加甲醇稀释至刻度、摇匀、离心（15 000 r/min）10 min，取上清液用 0.45 m 微孔滤膜过滤，取续滤液备用。2.4 空白样品及空白样品溶液的制备除陈皮外，按照处方比例精密称取所需各药材，按镇咳灵合剂的制备工艺制成相应的空白样品。取空白样品 1 mL，按样品溶液的制备方法制成空白样品溶液。2.5 空白干扰试验按照上述色谱条件，吸取空白样品溶液、对照品溶液、样品溶液，分别注入色谱仪，结果见图 1。空白样品溶液中的组分不干扰样品溶液中橙皮苷的测定。橙皮苷的保留时间为 12.1 min。A空白样品 B对照品 C样品5图 1 橙皮
8、苷 HPLC 色谱图（1 橙皮苷）2.6 线性试验分别精密吸取 63.28 g/mL 的对照品储备液0.1、0.2、0.3、0.4、0.6 、0.8 mL 于 10 mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，分别精密吸取上述溶液 10 L，进样，测定峰面积，以色谱峰面积（Y）为纵坐标，对照品溶液浓度（X）为横坐标，外标法得橙皮苷标准溶液的线性回归方程为：Y=190.570X2.789（r=0.9999，n=6 ） 。结果表明：橙皮苷浓度在 0.63285.0624 g/mL 范围内与峰面积线性关系良好。2.7 精密度试验精密吸取 63.28 g/mL 的对照品储备液 0.3 mL 于 10 mL 量瓶中
9、，用甲醇稀释至刻度，得浓度为 1.8984 g/mL 橙皮苷对照品溶液，取上述溶液 10 L，重复进样 5 次，以峰面积计算精密度，结果橙皮苷峰面积 RSD 为 1.0%。2.8 加样回收率试验6精密量取已知含量的样品 1 mL，加入 63.28 g/mL 橙皮苷对照品储备液 1 mL，橙皮苷加入量为 63.28 g，按“2.3”项下方法操作，进样测定并计算回收率，结果见表 1。表 1 橙皮苷加样回收率试验2.9 稳定性试验取同一样品，按“2.3” 项下方法操作，分别在制备后0、2 、4 、 8、12 、24 h 进样测定橙皮苷含量，结果样品溶液在 24 h 内稳定性良好，橙皮苷含量 RSD
10、为 1.2%。2.10 样品测定取 5 批不同批号的镇咳灵合剂，按上述样品溶液的制备方法制备成样品溶液，分别精密吸取 10 L，按上述色谱条件测定并用外标法计算橙皮苷含量，结果 5 批样品的含量分别为： 60.55 g/mL（批号：070320） 、61.03 g/mL（批号：070410 ） 、59.92 g/mL（批号：070428 ） 、61.17 g/mL（批号：070605） 、59.78 g/mL（批号：070710 ） 。3 讨论7本文在橙皮苷的含量测定方法文献48 的基础上对色谱条件进行适当的调整测定镇咳灵合剂中的橙皮苷含量。在本实验条件下，待测物的分离效果好，保留时间约 12
11、.1 min，空白样品中的杂质峰不影响待测物的出峰。用本方法测定镇咳灵合剂中橙皮苷的含量，方法简便，结果准确，重现性好，可作为制剂的质量控制。【参考文献】 1 贺国芳, 林 芳, 闵 敏, 等. 止咳糖浆的质量标准研究J. 医药导报, 2007, 26(7): 802804.2 韩 海. 反相高效液相色谱法测定胃肠康颗粒剂中橙皮苷的含量J. 时珍国医国药, 2006, 17(3): 367368.3 袁金斌 , 周志炎. HPLC 测定陈皮提取物及制剂中橙皮苷的含量J. 中成药, 2006, 28(3): 455456.4 周 俊, 李家琳, 付宜和, 等. 香露白露片中药成份质量控制J. 中国医院药学杂志, 2006, 26(10): 13141316.5 马冬云 . HPLC 法测定复方陈相胃片中橙皮苷的含量J . 中国药师, 2006, 9(8): 729730.86 侯小涛, 李耀华, 卢小芳. 复方百部止咳冲剂中黄芩和陈皮的鉴别及黄芩苷的含量测定J. 华西药学杂志 , 2005, 20(2): 165167.7 周作光. 薄层扫描法测定陈香露白露片中橙皮苷的含量J. 广西中医药, 2003, 26(2): 5758.8 马平勃 . 三波长分光光度法测定化痰糖浆中橙皮苷的含量J. 时珍国医国药, 2002, 13(8): 458.
