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1、大鼠大鼠IgE ELISA试剂盒试剂盒Rat IgE ELISA kit Cat#：ERC117尊敬的客户， 感谢您选用本公司 QuantiCytoELISA 系列产品。 本产品选用世界著名生产厂家的原料， 采用专业体外诊断试剂生产技术制造。适用于体外定量检测大鼠血清、血浆或细胞培养上清液中天然和重组大鼠 IgE 浓度。仅供科研使用仅供科研使用，其他特殊体液标本请咨询。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分。如有疑问，请联系欣博盛生物科技有限公司。QuantiCytoERC117Rat IgE2试剂盒组成：试剂盒组成：名名称称ERC117.48规格规格ERC117.96规格规格保存保存条件条件抗
2、体预包被酶标板868124 冻干标准品2 支250 ng/支3 支250 ng/支4 标准品&标本通用稀释液（橙盖瓶）1 瓶12 ml1 瓶20 ml4 浓缩酶标抗体1 支 （规格见标签） 1支 （规格见标签） 4 酶标抗体稀释液（绿盖瓶）1 瓶10 ml1 瓶16 ml4 浓缩洗涤液 20（透明盖瓶）1 瓶25 ml1 瓶50 ml4 显色底物（TMB）（棕盖瓶）1 瓶6 ml1 瓶12 ml4 (避光)反应终止液（透明盖瓶）1 瓶6 ml1 瓶12 ml4 封板胶纸3 张6 张产品说明书1 份1 份备注：所有试剂的批号见标签。QuantiCytoERC117Rat IgE3检测原理检测原理
3、:欣博盛 QuantiCytoELISA试剂盒采用双抗体夹心法：抗大鼠IgE单抗包被于酶标板上，标本和标准品中的IgE会与单抗结合，游离的成分被洗去。加入酶标抗体，抗大鼠IgE抗体与结合在单抗上的大鼠IgE结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物，若反应孔中有IgE，辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色，加终止液变黄。在450nm处测OD值，IgE浓度与OD450值之间呈正比，可通过绘制标准曲线求出标本中IgE浓度。试验所需自备试验器材试验所需自备试验器材 (不提供，但可协助购买不提供，但可协助购买) :1.酶标仪(450 nm波长滤光片)2.进口品牌高精度加液器及一次性吸头： 0
4、.5-10 ul, 2-20 ul, 20-200ul, 200-1000 ul。3.37 恒温箱, 双蒸水或去离子水，坐标纸等。可协助代购相关产品，请咨询。QuantiCytoERC117Rat IgE4标本收集标本收集:1. 收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。2. 血浆抗凝剂推荐使用EDTA。避免使用溶血，高血脂标本。3. 标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。4. 标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20 ，-70 电冰箱内，避免反复冻融，3-6月内检测。5. 如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数
5、)。注意事项注意事项:1. 试剂盒使用前请保存在2-8 。 复溶后的标准品若未用完， 请废弃。2. 浓缩酶标抗体体积小，运输中颠簸和可能的倒置，会使液体沾到管壁或瓶盖。因此使用前请用手甩几下或1000转/分离心1分钟，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。取用前，请用移液器小心吹打4-5次使溶液混匀。3. 从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象，微加热至40使结晶完全溶解后再配制洗涤液。（加热温度不要超过50 ）使用时洗涤液应为室温。4. 不同批号的试剂盒组份不能混用（洗涤液和反应终止液除外）。请提前咨询欣博盛生物科技有限公司。5. 充分轻微混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(
6、使用最低频率)，如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻敲击酶标板框混匀。6. 在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测。7. 试验中所用的试管和吸头均为一次性使用，严禁在不同的液体之严禁在不同的液体之间混用！否则将影响试验结果。间混用！否则将影响试验结果。8. 试验中请穿着试验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液标本时， 请按国家生物试验室安全防护条列执行。9. 如果分次使用，请根据需要量配制各组分如果分次使用，请根据需要量配制各组分，以免配制过多造成浪费而影响后续试验。 剩余板孔请用封板胶纸封住剩余板孔请用封板胶纸封住， 放回铝箔袋中放回铝箔袋中, ,2个月内用完。个月内用完。
7、QuantiCytoERC117Rat IgE5检测前准备工作检测前准备工作:1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，以平衡至室温。2. 用双蒸水将20浓缩洗涤液浓缩洗涤液稀释成1工作液工作液。未用完的放回4 。3. 标准品: 加入标准品&标本通用稀释液0.5 ml至冻干标准品中，静置15分钟，待其充分溶解后，轻轻混匀(浓度为500 ng/ml)。然后根据需要进行稀释。(建议标准曲线使用以下浓度：500、250、125、62.5、31.25、15.6、7.8、0 ng/ml)。复溶标准品原液(500ng/ml）若未用完的请废弃。4. 酶标抗体工作液：按当次试验所需要得用量，使用前20分钟，以酶
8、标抗体稀释液将30浓缩浓缩酶标酶标抗体抗体稀释成1工作液工作液。 当日使用。若实验次数过多导致酶标抗体量不足，可向欣博盛公司单独购买酶标抗体。（须提供批号）标准品稀释方法图例：标准品稀释方法图例：以500 ul/管为例，用标准品&标本通用稀释液将复溶后的标准品母液进行倍比稀释，具体稀释方法如下图，也可根据实际用量来稀释，如200 ul/管。500 ul Standard7.8 ng/ml15 .6ng/ml631.25 ng/ml62.5 ng/ml125 ng/ml250 ng/ml500 ng/ml500 ul500 ul500 ul500 ul500 ulQuantiCytoERC117
9、Rat IgE6洗涤方法洗涤方法:1. 自动洗板机：要求注入的洗涤液为350 ul，注入与吸出间隔3060秒。洗板5次。2. 手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净的吸水纸上拍干，每孔加洗涤液350 ul， 静置30秒后甩尽液体， 在厚迭吸水纸上拍干。 洗板5次。操作步骤操作步骤:1从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条，未用的板条和干燥剂请放回铝箔袋内压实自封条，密封口袋，放回4 。2空白孔加标准品标准品&标本标本通用通用稀释液稀释液，其余相应孔中加标本或不同浓度标准品(100 ul/孔)，用封板胶纸封住反应孔，37 孵箱孵育90分钟。3提前20分钟准备酶标抗体工作液。4洗板5次。5空白孔加酶标抗
10、体稀释液，其余孔加入入酶标抗体工作液(100 ul/孔)。用新封板胶纸封住反应孔，37 孵箱，避光孵育60分钟。6洗板5次。7打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。8 加入显色底物(TMB)100 ul/孔， 避光37 孵箱， 避光孵育15分钟。9加入终止液100 ul/孔, 混匀后即刻测量OD450值(3分钟内)。在仪器保存读数结果并打印一份纸质结果。10. 实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回电冰箱保存至有效期结束。建议保存酶标板框，以备下次或者今后试验使用。QuantiCytoERC117Rat IgE7结果判断结果判断:1. 每个标准品和标本的OD值应减去空白孔的OD值。2
11、. 以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，手工绘制或用软件绘制标准曲线。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。3. 若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。注意注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本中大鼠IgE的含量。灵敏度、特异性和重复性灵敏度、特异性和重复性: : 灵敏度：最小可测大鼠IgE达4 ng/ml。 特异性：不与重组大鼠 IL-1,2,3,5,6,8,10,IFN,TNF及人IgE和小鼠IgE等反应。 重复性：板内，板间变异系数均8.5%。RatIgEng/mlQuantiCytoERC117Rat IgE8大鼠大鼠 Ig
12、E 简介：简介：IgE(Immunoglobulin E)由一对日本夫妇Teruko和Kimishige lshizaka于1966年发现。IgE是抗体的一种，目前发现其只存在于哺乳动物体内。IgE以单体形式存在，由两条重链（ 链）和两条轻链构成， 链包含四个恒定区（C1-C4）。IgE是体内含量最低的抗体种类，只占免疫球蛋白总量的0.05%。IgE可引起强烈的炎症反应，其主要功能有抵抗曼氏血吸虫、旋毛虫和肝片吸虫等寄生虫对机体的损伤；参与恶性疟原虫等原虫的免疫防御；IgE在型超敏反应（如过敏性哮喘、过敏性鼻炎、食物过敏和一些慢性荨麻疹、过敏性皮炎）中发挥着重要作用；IgE在过敏性疾病中起着关
13、键作用，如药物过敏、蜂蜇伤，可制备相应抗原做脱敏治疗。Rev 140123Y(E)QuantiCytoERC117Rat IgE9QuantiCytoELISA 常见问题分析：常见问题分析：问题一：高背景或阴性对照值偏高可能原因建议阴性对照孔被阳性对照或样品污染洗涤时，勿将洗液溢出孔外。洗涤不充分确保在洗涤时每个孔都充满了液体，确保将残余液体从孔中移除。酶结合物过浓请检查酶结合物是否按说明书规定稀释孵育温度过高检查孵育箱的温度是否正确、稳定底物在使用前曝光应保存在暗处，避光。读板前停留时间过长加终止液后 3 分钟内读数问题二：阳性对照值偏低或低吸光度可能原因建议试剂未平衡至室温开始实验前，将试
14、剂盒平衡至室温包袋中有湿气首次开袋标上日期，封好未使用的孔条，放入干燥剂。样本中有抑制剂叠氮化钠抑制 HRP 的活性试剂在使用前未混匀使用前混匀试剂洗涤步骤过于剧烈降低洗涤系统的压力实验开始后，微孔变干燥实验过程勿中断，应连续完成所有的实验步骤。检测体积偏小确保移液器已校正问题三：边缘效应可能原因建议蒸发各步之间，须使用封版胶密封反应板。温度不均匀校准孵育箱，勿叠放反应板。QuantiCytoERC117Rat IgE10问题四：标准曲线不佳可能原因建议倍比稀释标准品时未混匀稀释标准品的每一步均需混匀过早稀释标准品在快要使用时稀释加入的体积不正确使用校准过的移液器，快速、等量的将标准品分配到各个微孔中。问题五：标准曲线良好，但样本无检测信号可能原因建议样本中无检测物或检测物含量极低设置内参，重新实验样本中其他物质影响/掩盖检测作适当稀释，降低其他物质的干扰，或作系列稀释，检测回收率。样本中检测物浓度过高，Hook 效应导致假低值适当倍数稀释样本， 检测物浓度尽量在试剂盒检测范围内。问题六：重复性较差可能原因建议微孔中有气泡用针尖挑破气泡试剂未混匀确保充分混匀试剂样本中有杂质或沉淀物使用前离心微孔包被面被吸头划破加液时小心操作使用用过的封板胶纸每次须使用新的封板胶封住反应孔QuantiCytoERC117Rat IgE11QuantiCytoERC117Rat IgE12
