《QS2632a-L-阿拉伯呋喃糖苷酶试剂盒说明书》由会员分享，可在线阅读，更多相关《QS2632a-L-阿拉伯呋喃糖苷酶试剂盒说明书（2页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、第 1 页，共 2 页货号：QS2632 规格：50 管/24 样 -L-L-阿拉伯呋喃糖苷酶（阿拉伯呋喃糖苷酶（-L-Arabinofuranosidase,-L-Arabinofuranosidase, -L-L- AfAf）试剂盒说明书）试剂盒说明书 可见分光光度法可见分光光度法 正式测定前务必取正式测定前务必取 2-32-3 个预期差异较大的样本做预测定个预期差异较大的样本做预测定测定意义： -L-Af 是一种能够水解非还原呋喃阿拉伯糖残基的糖苷酶类，使细胞壁阿拉伯半乳聚 糖、阿拉伯甘露聚糖等中性糖不断解离，促进果胶的增溶和降解。由于果实成熟过程中常常 伴随着阿拉伯糖的丧失，该酶活性在
2、果实成熟软化中的研究具有重大意义。测定原理： -L-Af 分解对硝基酚阿拉伯呋喃糖苷生成对-硝基苯酚，后者在 400nm 有最大吸收峰， 通过测定吸光值升高速率来计算 -L-Af 活性。自备用品： 可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和 蒸 馏水。试剂组成和配制： 提取液：液体 50mL1 瓶，4保存。 试剂一：粉剂1 瓶，-20保存；临用前每瓶加入 5mL 蒸馏水，充分溶解备用；用不 完的试剂仍-20保存。 试剂二：液体 15mL1 瓶，4保存。 试剂三：液体 50mL1 瓶，4保存。粗酶液提取： 1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心
3、后弃上清；按照细菌或细胞数量 （104个）：提取液体积（mL）为 5001000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液） ，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20或 200W，超声 3s，间隔 10s， 重复 30 次） ；15000g 4离心 10min，取上清，置冰上待测。 2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：510 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液） ，进行冰浴匀浆。15000g 4离心 10min，取上清，置冰上待测。测定步骤： 1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 400nm，蒸馏水调零。 2、样本测定（在
4、 EP 管中依次加入下列试剂）： 试剂名称（L） 测定管 对照管 试剂一 200 蒸馏水 200 试剂二 250 250 样本 50 50第 2 页，共 2 页迅速混匀，放入 37准确水浴 30min 试剂三 1000 1000 充分混匀，400nm 处测定吸光值 A，计算 A=A 测定-A 对照。每个测定管需设一个对照管。-L-Af 活性计算： 标准条件下测定的回归方程为 y=0.32x-0.0027；x 为标准品浓度（nmol/mL） ，y 为吸光值。（1）按样本蛋白浓度计算： 单位的定义：每 mg 组织蛋白每小时产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。 -L-Af 活力(nm
5、ol/h/mg prot)=(A+0.0027)0.32V 反总(V 样Cpr)T =62.5(A+0.0027)Cpr 需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。 （2）按样本鲜重计算： 单位的定义：每 g 组织每小时产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。 -L-Af 活力(nmol/h/g 鲜重)(A+0.0027)0.32V 反总(WV 样V 样总)T =62.5(A+0.0027) W （3）按细菌或细胞密度计算： 单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每小时产生 1nmol 对-硝基苯酚定义为一个酶活力单位。-L-Af 活力(nmol/h /104cell)=(A+0.0027)0.32V 反总(500V 样V 样总 T =0.125(A +0.0027) Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；V 反总：反应体系总体积，0.5mL；V 样：加入反应体系中 样本体积，0.05mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g； 500：细胞或细 菌总数，500 万；T：反应时间，0.5h。
