《碱提酸沉法分离花生蛋白条件的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《碱提酸沉法分离花生蛋白条件的研究（5页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、1碱提酸沉法制取花生分离蛋白的优化条件碱提酸沉法制取花生分离蛋白的优化条件李明姝（ 四川大学轻纺与食品学院，610065 成都市 ）摘要：摘要：采用碱提酸沉法研究了制取花生分离蛋白的优化条件。结果显示，当花生粕的匀浆料液比为1:8（m/v） 、碱浸提液 pH 为 8.2、浸提温度为 60，重复浸提两次，每次浸提 2h，酸沉 pH 为 4.5 时，制取的花生分离蛋白纯度可达 90.21%，蛋白质回收利用率可达 75.74%。研究结果可为花生蛋白的合理有效利用奠定基础。 关键词：关键词：花生；分离蛋白；碱提酸沉法；优化条件花生的蛋白质含量为 2436，其中 10为清蛋白，90为碱溶蛋白，由花生球蛋
2、白和伴花生球蛋白两部分组成1,2。花生蛋白营养全面，含有人体必需的 8 种氨基酸，具有色泽浅，风味淡雅，抗营养因子含量低等特点，可作为种极具开发潜力的蛋白基料和牛乳等动物奶类的替代品。花生蛋白优良的功能特性使其在食品、化工和医药等领域中的应用潜力巨大35。目前，高纯度花生蛋白的制备技术并不成熟，极大地限制了花生蛋白的应用范围。作为一种经典的分离蛋白质的方法，碱提酸沉法可以用于高纯度花生蛋白的制取6。本文对碱提酸沉法分离花生蛋白的优化条件进行了研究，其结果不仅可为花生蛋白的合理有效利用奠定基础，而且可为植物蛋白的提取分离技术提供有价值的参考数据。1 材料与方法材料与方法 1.1 脱脂花生粕 由四
3、川梓潼长业食品有限公司提供，蛋白质含量为 51.96。 1.2 主要试剂 酪蛋白（国外分装）纯度为 99，其它为国产分析纯试剂。 1.3 主要仪器TU-1800PC 型紫外可见分光光度计、PHS-2C 酸度计、LD4-2A 离心机等。 1.4 标准曲线的建立配制不同浓度的酪蛋白标准溶液，分别于 580nm 波长处测定其吸光值6, 7，以酪蛋白浓度为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线，如图 1 所示。采用最小二乘法拟合得标准曲线方程：y = 0.0005x + 0.0079， R2 = 0.9989。 1.5 花生分离蛋白的制备将脱脂花生粕用温水浸泡，匀浆处理后用稀碱液浸提，经过滤或离心分离除去
4、其中的不溶物，用盐酸调节浸提液 pH 值，离心分离后得到花生分离蛋白。蛋白质浓度(g /ml)溶液中蛋白质量(g)/溶液体积(ml) 1.6 检测方法水分含量按 GB 10358-89/ISO 771-1977 方法测定。总灰分含量按 GB 9824-88/UDC 665.117:543.06 方法测定。蛋白质含量采用 Folin-酚法测定 68。2y = 0.0005x + 0.0079 R2 = 0.998900.10.20.30.40.50.60.70.80.90500100015002000酪蛋白浓度(g/ml)A580图图 1 酪蛋白标准曲线酪蛋白标准曲线2 结果与讨论结果与讨论 2
5、.1 匀浆料液比的确定在脱脂花生粕中加入一定量的水，其料液比(m/v)分别为 1:8,1:6,1:4，待其充分溶胀后进行匀浆化处理，分别测定各匀浆液的固形物及蛋白质含量，结果如图 2 所示。可以看出，当料液比为 1:8 时，匀浆液的蛋白质含量最高。 2. 2 碱提条件的确定正交试验结果（表 1）显示，若以蛋白质含量为评价指标，影响因素依次为：BAC，最佳条件为 A1B3C2，即 pH7.8、60、2.5h ；若以浸提物得率为评价指标，影响因素依次为：ACB，最佳条件为 A2B3C2，即 pH8.2、60、2.0h；若以两者乘积的综合评定为评价指标，影响因素依次为：CA B，最佳条件为 A2B3
6、C2，即 pH8.2、60、2.0h。5253545556575859601:81:61:4匀浆料液比(m/v)蛋白质含量(%)图图 2 不同料液比匀浆液的蛋白质含量不同料液比匀浆液的蛋白质含量3表表 1 正交试验结果分析表正交试验结果分析表浸提 pH 值 浸提温度 浸提时间 组 别A() B(h) C含量* (%) HL得率* (%) DL综合评定 ZH17.8501.566.7978.210.522427.8552.066.7978.170.522137.8602.569.4978.380.544748.2502.068.3582.800.566058.2552.566.2380.270.
7、531668.2601.567.5678.810.532478.6502.565.4177.080.504288.6551.565.8278.170.514598.6602.067.7581.150.54982.03072.00552.00172.02141.98842.02891.98982.04802.0113HLR0.04100.05960.02722.34762.38092.35192.41882.36612.42122.36402.38342.3573DLR0.07120.01730.06931.58921.59261.56931.63001.56821.63791.56851.62
8、691.5805ZHR0.06150.05870.0686注：* 蛋白质含量(%)碱浸提液蛋白质量(g)/碱浸提液可溶固形物质量(g) 100*碱浸提物得率(%)碱浸提液固形物质量(g)/匀浆液可溶固形物质量(g) 100在最佳碱提条件下，即料液比为 1:8、pH8.2、60浸提 2h，重复浸提两次，结果见表2。可以看出，第二次浸提物的得率远小于第一次，两次碱浸提后花生蛋白已基本浸提完全。表表 2 浸提次数对碱浸提效果的影响浸提次数对碱浸提效果的影响浸提次数固形物含量(g/ml)蛋白质浓度(g/ml)蛋白质含量(%)浸提物得率(%)第一次0.061420.269.1673.48第二次0.006
9、38.267.4925.3242. 3 酸沉 pH 条件的确定 称取 40.0g 花生粕，以碱浸提最佳条件，即匀浆料液比 1:8、pH8.2、60浸提 2h，得 到花生蛋白的碱浸提液。分别取一定量的碱浸提液，于不同 pH 条件下进行酸沉，测定沉 淀分离物的蛋白质含量，结果见表 3。可以看出，在 pH4.5 时，酸沉效果最好，分离得到 的蛋白质纯度最高。 表表 3 pH 对酸沉效果的影响对酸沉效果的影响pH 值蛋白质浓度(g/ml)蛋白质纯度*(%)分离物得率*(%)4.4340.275.9095.104.5398.288.1686.984.6436.284.5387.83注：* 蛋白质纯度(%
10、)蛋白质量(g)/分离物质量(g) 100*分离物得率(%)分离物质量(g)/碱浸提液可溶固形物质量(g) 1002.4 碱提酸沉优化条件的验证采用碱提最佳条件，即匀浆液料液比 1:8、pH8.2、60浸提 2h，离心分离（3000r/min）后，按相同条件再次浸提花生渣中的蛋白质。合并两次碱浸提液，调节 pH至 4.5，静置后离心分离(2000r/min)，得到花生分离蛋白，结果见表 4。可以看出，经过两次碱提后，酸沉得到的花生分离蛋白纯度可达 90.21，相对于花生粕的分离物得率为43.58，蛋白质利用率为 75.74%。表表 4 碱提酸沉优化条件的验证结果碱提酸沉优化条件的验证结果项 目
11、匀浆液第 一 次碱浸提液匀浆液第 二 次碱浸提液合 并碱浸提液分离物固形物含量(g/ml,g )0.0740.0610.0200.0060.0380.462蛋白质浓度(g/ml)422.2326.2332.2342.2254.2416.3蛋白质含量(%)56.4666.6433.9353.5566.2590.21得率* (%)91.9271.4183.9527.9569.8843.58注：* 匀浆液得率(%)匀浆液可溶固形物质量(g)/花生粕质量(g) 100碱浸提液得率(%)碱浸提液可溶固形物质量(g)/匀浆液可溶固形物质量(g) 100分离物得率(%)分离物质量(g)/花生粕质量(g) 1
12、003 结结 论论1） 碱提酸沉法制取花生分离蛋白的最佳碱浸提条件为匀浆料液比为 1:8（m/v） 、碱浸提液 pH 为 8.2、浸提温度为 60，浸提时间为 2h，重复浸提两次，其浸提物中蛋白质的含量分别为 69.16和 67.49，浸提物得率分别为 73.48和 25.32。酸沉 pH 为 4.5 时，分离物中花生蛋白的纯度可达 88.16，分离物得率为 86.98。2）在碱提酸沉法制取花生分离蛋白的优化条件下，即匀浆料液比为 1:8（m/v） 、碱浸5提液 pH 为 8.2、浸提温度为 60，浸提时间为 2h，重复浸提两次，酸沉 pH 为 4.5 时，所得分离物中花生蛋白的纯度可达 90
13、.21，蛋白利用率为 75.74。参参 考考 文文 献献1 周瑞宝. 花生加工技术M. 北京:化学工业出版社, 2002. 134.2 刘大川. 花生蛋白及其产品的功能性J. 粮食与油脂, 1992, (1): 7 11.3 潘秋琴, 沈蓓英, 程霜. 花生蛋白质的磷酸化改性J. 中国油脂, 1997, 22(1): 25 27.4 陆 恒. 国外花生蛋白的利用J. 食品与开发, 1986, (5): 32 - 33.5 K Suknark, J Lee, R R Eitenmiller, et al. Stability of tocopherols and rentinyl palmita
14、te in snack extrudatesJ. Journal of Food Science, 2001, 66(6): 897 - 902.6 A Jangchud, M S Chinnan. Properties of peanut protein film:sorption isotherm and plasticizer effectJ. Lebensm. Wiss. u. Technol., 1999, 32: 89 94.7 刘红玉, 郑惠枚, 郝国东. 大豆分离蛋白的生产工艺J. 农机化研究, 2002, (2): 122, 126.8 宁正祥. 食品成分分析手册M. 中国轻
15、工业出版社, 1998. 77 - 78.Isolation Conditions of Peanut Protein by Alkaline Extraction and Acid PrecipitationLi Ming-shu( School of Light Industry, Textile and Food, Sichuan University , 610065 Chengdu, China )Abstract: Alkaline extraction and acid precipitation were employed to isolate peanut protein.
16、The results of single-factor and orthogonal experiments showed the most promising conditions of isolation. After defatted peanut flour was mixed with distilled water in the ratio of 1:8(m/v) and the pH was adjusted to 8.2, the suspension was extracted at 60 for 2h. Repeating the process above, peanut protein was precipitated
