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1、MDCKMDCK 细胞介绍（细胞介绍（MDCKMDCK CellsCells introductionintroduction）MDCK 细胞系(MDCK Cell Lines)由 Madin 和 Darby 于 1958 年从美国 Cocker Spaniel 母曲架犬的肾脏组织分离培育建立，通常是以贴壁方式生长的上皮样细胞。犬肾上皮连续细胞系 MDCK (Madin-Daby canine kidney cells) 细胞株购 买信息：ATCC MDCK cell lines。目前，MDCK 细胞系(MDCK Cell Lines)广泛用于多种病毒的扩增和纯化，如：呼肠孤病毒)、腺病毒、
2、犬细小病毒、猫粒细胞缺乏症病毒)及禽流感病毒等。由于其 病毒感染效率高、增殖快，且不易变异，MDCK 细胞系(MDCK Cell Lines)被公认为最适于甲、乙型流感病毒疫苗生产的 3 种细胞系之一。传统的 MDCK 细胞培养大 多采用有血清贴壁培养方式。血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种复杂混合物，其含有细胞生长所需的生长因子、激素、载体蛋白、贴壁因子、微量元素 以及其他营养物质，可以有效地促进细胞生长和产物表达。然而，血清的应用也存在许多问题：易受病毒、支原体或其他病原体的污染；批间差异造成产品批 次间的质量难以严格控制；大量血清蛋白的存在增加了下游分离纯化的难度，部分蛋白难以通过分离
3、纯化手段彻底去除，影响了产品的最终质量；此外，血清 来源困难、价格昂贵，大规模动物细胞培养过程中使用血清将会大大增加生产成本。犬肾细胞犬肾细胞 MDCKMDCK 无血清培养基无血清培养基 UltraMDCKUltraMDCK Serum-freeSerum-free MediumMedium 产品介绍产品介绍MDCK 无血清培养基是一种在经过优化的基础培养基中只添加了重组人胰岛素蛋白和牛转铁蛋白的低蛋白含量的成分配制而成的 SFM 培养基。与在含有血清生长 环境中相比，在MDCK 无血清培养基中生长的 MDCK 细胞较小并紧密成团。在不更换培养基的条件下，MDCK细胞可以持续旺盛生长至少 2
4、周时间。经过 MDCK 细胞的 持续生长，从单层细胞形成球形结构，通常我们称这种球形结构为“漂浮物”。通过离心我们可以收获这些球状结构的“漂浮物”，也可以加入新鲜 MDCK 无血 清培养基让 MDCK 细胞贴壁继续生长成新的单层细胞。在添加了血清成分的环境中培养出来的 MDCK 单层细胞很难被胰酶消化，但是在 MDCK无血清培养基中生长的 MDCK 单层细胞就很容易被胰酶消化。UltraMDCK Medium is an optimized basal medium supplemented with only two proteins recombinant human insulin an
5、d bovine transferrin, yielding a very low protein formulation. MDCK cells grown in UltraMDCK Medium are smaller and more densely packed than cells grown in the presence of serum. Cultures can stay confluent for at least two weeks without medium change. Cells will continue to grow from the monolayer
6、forming spherical structures called “floaters”. “Floaters” can be harvested, pelleted by centrifugation and plated into fresh medium. They will reattach and grow into a new monolayer.A monolayer of MDCK cells is difficult to trypsinize especially when grown in a serum-supplemented medium. However, when grown in UltraMDCK Medium, trypsinization becomes less difficult.
