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1、实实习习四四 果蔬中还原性维生素果蔬中还原性维生素 C 的含量测定的含量测定（一）目的（一）目的 学习和掌握用 2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中抗坏血酸含量的原理与方法。 （二）原理（二）原理 维生素 C 是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常 的氧化还原电势和有关酶系统的活性。维生素 C 能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏维 生素 C 时则会出现坏血病，因而维生素 C 又称为抗坏血酸。水果和蔬菜是人体抗坏血酸的 主要来源。不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的 抗坏血酸含量。测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重
2、要指标。 2,6-二氯酚靛酚是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。抗坏血酸 具有强还原性，能使 2,6-二氯酚靛酚还原褪色，其反应如下：当用 2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的 2,6-二氯酚靛酚被还原 成无色；当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的 2,6-二氯酚靛酚立即 使溶液呈现红色。因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色即为滴定终点，根据染料 消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。 （三）实验材料、主要仪器和试剂（三）实验材料、主要仪器和试剂 1实验材料 取新鲜水果（蔬菜）样品 100g，加 100g 2草酸溶液，用组织捣碎机打成
3、匀浆。称取 10g 匀浆，移入 100mL 容量瓶，用 1草酸定容至刻度，摇匀后静置备用。 2仪器CCCCCHCH2OHOOHOHHOHONO-OClClNOHOClCl+ OH-H+ 2,6- CCCCCHCH2OHOOOHOHO NOHOHClClH 2,6- + （1）天平 （2）组织捣碎机 （3）容量瓶（50mL） （4）刻度吸管（5mL，10mL） （5）锥形瓶（100mL） （6）微量滴定管（10mL） 3试剂 （1）2草酸 （2）1草酸 （3）标准抗坏血酸溶液（0.1mg/mL）：精确称取 50.0mg 抗坏血酸，用 1草酸溶液 溶解并定容至 500mL。临用现配。 （4）2,6
4、-二氯酚靛酚溶液：500mg 2,6-二氯酚靛酚溶于 2000mL 含 520mg 碳酸氢钠 （A.R）的热水中，冷却后再用蒸馏水稀释至 2500mL，滤去不溶物，贮棕色瓶内，4保 存一周有效。滴定样品前用标准抗坏血酸标定。 （5）1%的淀粉溶液：称取可溶性淀粉 10 克，加税 1 滴，搅拌成糊状后倒入 100ml 沸 水中，混匀，冷藏待用。 （6）0.1000%mol/L 碘酸钾标准储备液 精确称取干燥的碘酸钾（AR）2.1400 克，用 蒸馏水溶解于 100ml 容量瓶中。 （7）0.001%mol/L 碘酸钾标准应用液 取 0.1000%mol/L 碘酸钾标准储备液 10ml 稀 释至
5、1000ml，此液 1.0ml 相当于抗坏血酸 0.088*6mg。 （8）6%的 KI 溶液 称取碘化钾 6 克溶解于 100ml 水中。临用现配。 （四）操作步骤（四）操作步骤 1.2,6-二氯酚靛酚溶液的标定： (1)抗坏血酸标准溶液的标定：确吸取 2.0mL 抗坏血酸标准液于 100mL 锥形瓶中，加 5mL 1草酸溶液，6%的 KI 溶液 0.5ml，1%的淀粉溶液 2 滴，再以 0.001%mol/L 碘酸钾标 准应用液滴至淡蓝色。 计算方法： 抗坏血酸浓度（mg/ml）=（耗 0.001%mol/L 碘酸钾 ml 数*0.088*6）/2 (2)二氯酚靛酚溶液的标定：吸取已标定过
6、的抗坏血酸溶液 5ml 及 1%的草酸 5ml 于锥 形瓶中，以待标定的 2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至溶液呈淡红色，在 15内不褪色为止。1ml 染料相当于抗坏血酸的毫克数（记作 T） 。=（坏血酸浓度（mg/ml）*5）/滴定消耗 染料毫升数 2样品测定：准确吸取样品提取液（上清液或滤液）两份，每份 5.0mL，分别放入两 个 100mL 锥形瓶中，按上面的操作进行滴定并记录所用染料溶液体（mL） 。 （五）结果计算（五）结果计算 取两份样品滴定所用染料体积平均值，代入下式计算 100g 样品中还原型抗坏血酸的含 量： VTGA抗坏血酸含量（mg/100 g 样品）WG1A1100式中：V 滴定样品提取液消耗染料平均值（mL）T 每 mL 染料所能氧化抗坏血酸 mg 数G 匀浆总重量（g）G1 制备提取液取用匀浆重量（g）A 样品提取液定容体积（mL）A1 滴定时吸取样品提取液体积（mL）W 样品重量（g）
