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1、开放开放 ODS 柱色谱在分离纯化中的应用柱色谱在分离纯化中的应用什么是 ODS？ODS 是英文 octadecyl silane 的缩写，意思是十八烷基硅烷，是以硅胶为基质键合的 C18 填料，属于反相色谱。ODS 柱色谱，简单地说，就是指用 ODS 装成的色谱柱啦。 “开放” 一词，是指未对色谱柱施加任何压力，让其在重力作用下洗脱；相对于开放 ODS 柱色谱， 有中低压柱色谱，高低柱色谱等等。我们平时所说的反相 HPLC，一定程度上来说，其实也可以说是 ODS 柱色谱，只不过 它的分离效果更好，还配备了紫外或者示差等高级地检测手段，其实质还是属于反相柱色 谱。适用范围有哪些？首先需要说明：
2、ODS 在分离纯化的过程中，起着极为巨大的作用！就化合物极性而言，ODS 适合分离极性中等偏大的化合物类型。对于极性较小的化合 物，应该考虑用硅胶、凝胶等手段进行分离纯化，绝对不要尝试 ODS，唯一的后果只能是： 样品全部死吸附，根本不可能洗脱！某些行业，前处理一般是萃取，比如环己烷/石油醚、乙酸乙酯/氯仿、正丁醇、水。 水层的、正丁醇层的样品，一般都可以用 ODS 进行分离纯化；乙酸乙酯层的样品，极性偏 大的部分可以考虑用 ODS；至于环己烷层的样品，千万不要使用 ODS，那将是：上样量多 少，死吸附就有多少！就化合物分类而言，ODS 对于黄酮苷类、环烯醚萜苷类、糖苷类等成分都能有一定的 分
3、离效果，也有很多成功的分离纯化实例。但是，对于苷元类化合物，则需要慎重考虑， 其实还是极性大小的问题：苷元类化合物，一般极性较小。如何装柱、上样、洗脱？装柱：新买来的 ODS，用甲醇浸泡过夜后即可装柱。具体的装柱方法，跟硅胶的装柱 子法是一样的，记得用甲醇装柱就行。装完以后，置换成起始流动相系统，即可投入使用 了。上样：分为两种，一种是湿法上样，另一种是拌样。湿法上样，不必多说，就是将样 品溶解至一定体积（强烈建议用起始流动相溶解，但体积不可过大，太大相当于原点变大， 分离度变差） ，然后上样；至于拌样，很多的观点表示 ODS 不应该拌样，我在这里指出， 依我个人经验来看，拌样是可以的，尤其对
4、于一些溶解性较差的样品，拌样后分离的效果， 比湿法上样好很多，大家可以尝试。 （所谓拌样，就是指将你的样品溶解，然后从柱子里面 掏出小部分 ODS，然后进行拌匀，注意不要过载）洗脱过程：如果你有 ODS 薄层板，你可以先点板看看样品大概的极性大小。如果你没 有 ODS 板，你拿到的是“盲样” ，一般可以采取常规的梯度洗脱，如水30%甲醇/水50%甲醇/水70%甲醇/水100%甲醇，然后依据各流分样品量的大小进一步进行细 分；经过常规的梯度洗脱以后，假设，你的样品集中在 50%的甲醇/水部分，进行细分的时 候，你就可以选择 40%甲醇/水45%甲醇/水50%甲醇/水100%甲醇这样的梯度。流动相
5、的选择：其实就是反相流动相，无非就是甲醇/水，乙腈/水，流动相中也可以 加入一些其他物质。我曾经很多次加入乙酸，用来改善拖尾的现象（点 ODS 薄层板分析过） 。至于缓冲盐，我没有试过，具体情况不太了解。洗脱样品的如何处理？洗脱下来的样品，可用硅胶薄层板进行点板分析，然后将相同流分进行合并，也可以 采用 HPLC 检测合并。我认为，对于一些量小的流分，相差不是很大的，尽量合并，避免样品的分散；对于一些量大的流分，可合可不合，反正量大，合与不合的效果是一样的（无非就是 多占点空间） ；从 ODS 上洗脱的流分，很可能是纯品；易结晶的样品，会在溶剂挥发的过程中结晶析 出来，要注意观察；柱子被污染如
6、何处理？污染是正常的，见过那么多，也用过那么多 ODS 柱子，没有哪一根能在使用一段时间 后保持“洁白无瑕”的。被污染，一般情况下就是用甲醇冲洗，一直到冲洗液蒸干没有杂质为止，就可以进行 下一批样品的分离了。也许有人问：你这么处理彻底吗？回答是否定的，但是，对于 ODS 柱色谱，这样的处 理已经足够了。道理很简单，用 ODS 进行分离的样品，一般极性不会很小，70%甲醇/水基本能全部冲 洗下来。现在已经用甲醇冲洗得差不多，在你对下一批样品进行分离的时候，上一批残留 的杂质也就只有 100%的甲醇能洗脱下来，根本不会影响。如果一定要处理，可以采用甲醇：异丙醇1：1 冲洗，这种做法，算是终极做法了。
