大豆miRNA的鉴定与在抗疫霉根腐病中的功能分析

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1、I D E N T I F I C A T I o NA N DF U N C T I o N A LA N A L Y S I So FM I C R O R N AF R o M ( 辽M 口州E 死阴XI N V O L V I N GI T SI N T E R A C T I o NW I T HP 日1 7 阳P 日聊R 爿S ( ) 尉EB yN a G u oAD i s s e r t a t i o nS u b m i t t e dt oN a n ji n gA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t yI nP a r t i

2、a lF u l f i l l m e n to f t h eR e q u i r e m e n t sF o rt h eD o c t o r a lD e g r e eo fP h i l o s o p h yS u p e r v i s e dB yP r o f e s s o rH a nX i n gC o l l e g eo fA g r i c u l t u r eN a n j i n gA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t yN a n j i n g2 1 0 0 9 5 ,C h i n aD e c e

3、m b e r , 2 0 11原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文储c 需亲笔,签名:银咿压月厶日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权南京农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采

4、用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密口,在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口。 ( 请在以上方框内打“4 ”)学位论文作者c 需亲笔,签名:熏多秤撕肛月日导师( 需亲笔) 签名:如年1 月z 日目录目录摘要】【A B S T R A C T I I I缩略词表及其英汉对照V I I上篇文献综述第一章1 1 1 删A 调控功能的非编码R N A 。11m i R N A 的发现12m i R N A 的生物合成12 1m i R N A 基因的转录与转录初产物的剪接22 2m i R N A 的加工与运输22 3m i R N A 的成熟及功能的行使42 4 植物m

5、i R N A 的成熟过程42 5 植物m i R N A 功能关键蛋白53m i R N A 的特征描述63 1m i R N A 与s i R N A 的异同73 2 植物和动物m i R N A 的比较93 3m i R N A 的命名及m i R N A 数据库1 04m i R N A 的起源与进化1 15m i R N A 的作用机制1 25 1m i R N A 指导靶m R N A 的切割1 25 2m i R N A 抑制靶标m R N A 的翻译1 25 3甲基化抑制靶基因的转录1 36m i R N A 在植物中的调节作用1 36 1m i R N A 的自我调控1 36

6、 2m i R N A 与植物器官发育1 46 3m i R N A 与植物激素信号1 46 4m i R N A 与环境胁迫1 56 5m i R N A 与植物免疫l86 6m i R N A 与t a - s i R N A 18大豆m i R N A 的鉴定与在抗疫霉根腐病中的功能分析7m i R N A 相关的研究技术1 97 1m i R N A 的分离方法1 97 2m i R N A 的试验验证方法2 17 3 靶基因预测及验证。2 48m i I 淑A 的功能验证2 58 1m i R N A 过表达2 58 2T a r g e tm i m i c r y 2 58 3A

7、 r t i f i c i a lm i R N A 2 5第二章大豆抗疫霉根腐病研究进展2 71 大豆疫霉的危害2 72 大豆疫霉根腐病抗源筛选2 73 大豆疫霉根腐病抗性的遗传分析及基因定位2 83 1 大豆对大豆疫霉根腐病抗性的遗传分析2 83 2 大豆对大豆疫霉根腐病抗性基I 因Q T L 的定位2 84 大豆疫霉根腐病抗性机制的研究2 94 1 组织结构抗性。2 94 2 生理生化抗性3 05 大豆疫霉根腐病抗性相关基因的研究3 25 1表达序列标签在大豆疫霉根腐病抗性相关基因研究中的应用3 25 2 基因芯片在大豆疫霉根腐病抗性相关基因研究中的应用3 25 3 双向电泳技术在大豆

8、疫霉根腐病相关蛋白研究中的应用3 2第三章小分子R N A 与植物免疫3 31m i R N A 在P A M P 触发的细菌抗性中的作用3 32内源性的s i R N A 在效应分子触发的小种专化抗病性中的作用3 63植物与其它病原互作时,内源性小分子R N A 的作用3 73 1植物和昆虫互作中小分子R N A 的研究3 73 2 植物和线虫互作中小分子R N A 的研究3 83 3 植物和病毒互作中小分子R N A 的研究3 83 4 植物和细菌互作中小分子R N A 的研究3 83 5 植物和真菌互作中小分子R N A 的研究3 94 植物防御系统中小分子R N A 与D N A 甲基

9、化的关系3 9目录5 病原菌的R N A 沉默抑制子4 06 大豆与苜蓿中m i R N A 的相关研究4 0第四章本研究的目的和意义4 5上篇研究报告第一章植物基因沉默系统与对卵菌抗性的关系研究4 71 材料与方法4 81 1 植物材料和培养条件4 81 2 质粒和菌株4 91 3 游动孢子的获得4 91 4 接种方法一4 91 5 基因表达检测4 91 6 农杆菌介导的瞬时表达5 01 7 感受态细胞的制备5 02 结果与分析512 1P V X :p 1 9 和P V X :G F P 瞬时表达载体构建5 12 2p 19 注射烟草后的表达分析5 22 3 基因沉默突变体与疫霉菌的抗性5 22 4p 1 9 能够抑制植物对疫霉菌的抗性5 33 讨论与结论5 4第二章栽培大豆中m i R N A 的预测。5 71 材料与方法5 81 1 相关数据库的获得一5 81 2 应用软件一5 91 3 试剂配制5 91 4p o l y ( A ) 一t a i l e dR T - P C R 6 01 4 1总R N A 的提取6 01 4 2 总R N A 的p o l y ( A ) 力l l 尾6 01 4 3 反转录获得c D N A 6 01 4 4P C R 扩增、非变性聚丙烯酰胺电泳及银染6 12 结果与分析

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