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1、 - ( 本试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆或细胞培养上清液中天然和重组 sICAM-1 浓度，供科研使用。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分, 若有任何疑问请与嘉美生物技术有限公司联系，您将得到我们的技术支持。 $ 简介简介： 细胞粘附分子-1(Intercellular adhesion molecule-1，ICAM1)属免疫球蛋白超家族成员，分布于活化的内皮细胞，淋巴细胞表面， 其配体是淋巴细胞功能相关抗原-1(Lymphocyte function associated antigen-1, LFA-1)， 主要存在淋巴细胞表面。ICAM1/L
2、FA-1 相互作用能 介导淋巴细胞与血管内皮细胞粘附，促进淋巴细胞向组织中浸润。在免疫监督、炎症反应、吞噬 过程、动脉粥样硬化等过程中起着重要的作用。 检测原理检测原理: 本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人sICAM-1单抗包被于酶标板上，标本和标准品中的sICAM-1会 与单抗结合，游离的成分被洗去。加入生物素化的抗人sICAM-1抗体和辣根过氧化物酶标记的亲合 素。生物素与亲合素特异性结合；抗人 sICAM-1抗体与结合在单抗上的人sICAM-1结 合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。 加入显色剂，若反应孔中有sICAM-1，辣根 过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色，加终 止液变黄。在
3、450nm处测OD值，sICAM-1浓度与OD450值之间呈正比，可通过绘制标准曲线求出标本中sICAM-1浓度。 标本收集标本收集: 1. 收集血液的试管应为无热原和内毒素试管。 2. 血浆抗凝剂推荐EDTA。 3. 避免溶血，高血脂标本。 4. 标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。 5. 标本收集后若不及时检测，请按一次用量分装，冻存于20，避免反复冻融。 6. 可根据实际情况，将标本做适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数) 。 注：血清或血浆样本建议做注：血清或血浆样本建议做1:1501:200 稀释。稀释。 human sICAM- 1 ELISA KIT 目录号目录号 规格规格
4、F H K 0 0 2 7 96 Tests F H K 0 0 2 7 48 Tests 试剂盒组成试剂盒组成: 1a 标准品 2/1支(冻干)* 4 1b 标准品和标本稀释液 4/2 瓶 4 2a 浓缩生物素化抗体 2/1支* 4 2b 生物素化抗体稀释液 1瓶 4 3a 浓缩酶结合物 2/1支* 4(避光) 3b 酶结合物稀释液 1瓶 4 4 浓缩洗涤液 20 1瓶 4 显色剂 1瓶 4(避光) 终止液 1瓶 4 抗体包被板条 812 或 86* 4 封板胶纸 3/2张* 说明书 1份 *:96/48 Tests 实验器材实验器材(不提供，但可协助购买) : 1. 酶标仪(450nm)
5、2. 高精度加液器及吸头：0.5-10,2-20,20-200,200-1000ul 3. 37温箱, 双蒸水或去离子水，坐标纸。 注意事项注意事项: 1. 试剂盒保存在2-8，除复溶后的标准品，其他成分不可冻结。 2. 浓缩生物素化抗体(2a)、浓缩酶结合物(3a)装量极少，运输中颠簸和可能的倒置，会使液体 沾到管壁或瓶盖。因此使用前请用手甩几下或离心处理，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到 管底。 3. 从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,这属于正常现象，加热使结晶完全溶解后再配制。 4. 若重复使用标准品应按照一次用量分装后，将其放在-20-70贮存。一次性使用，避免反 复冻融。 5. 不同
6、批号的试剂盒组份不能混用。 6. 检测样品如为组织培养液，应用培养液作为样品稀释液。 7. 充分混匀对反应结果尤为重要，最好使用微量振荡器(使用最低频率)，如无微量振荡器，可 在反应过程中每10分钟手工混匀一次。 8. 在试验中标准品和样本检测时建议作双复孔或三复孔。 检测前准备工作检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒，以平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:20)。未用完的放回4。 3. 标准品: 加入标准品/标本稀释液(1b)1.0 ml至冻干标准品(1a)中，待彻底溶解后，静置15分钟混匀(浓度为4000pg/ml)。然后根据需要进行稀释。(建议标准曲线使
7、用以下浓度：4000、 2000、1000、500、250、 125、6 2 . 5 、0 pg/ml,)。复溶标准品若未用完请放入-20保存, 稀释的标准品不得重复使用。 3 4.生物素化抗体工作液：以生物素化抗体稀释液(2b)稀释浓缩生物素化抗体(2a)(1:100)。最好当 日使用。 5.酶结合物工作液：以酶结合物稀释液(3b) 稀释浓缩酶结合物(3a)(1:100)。最好当日使用。 标准品稀释方法： 洗涤方法洗涤方法: 1. 自动洗板机：要求注入的洗涤液为350ul，注入与吸出间隔1530秒。洗板4次。 2. 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加洗涤液350ul，静置30秒后甩尽液体，在厚迭
8、吸水纸上拍 干。洗板5次。 操作步骤操作步骤: 1. 从已平衡至室温的密封袋中取出所需板条，其它板条请密封放回4。 2. 除空白孔外，分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中，用封板胶纸封住反应 孔，37孵箱孵育90分钟。 3. 洗板4次。 4. 除空白孔外，加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，37孵箱孵育 60分钟。 5. 洗板4次。 6. 除空白孔外，加入酶结合物工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，37孵箱孵育30分钟。 7. 洗板4次。 8. 加入显色剂100ul/孔，避光37孵箱孵育10-15分钟。 9. 加入终止液100ul/孔
9、,混匀后即刻测量OD450值(5分钟内)。 结果判断结果判断: 1. 每个标准品和标本的OD值应减去零孔的OD值。 2. 手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。 3. 若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数 h sICAM-100.511.522.5010002000300040005000 pg/mlOD注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。注意：本图仅供参考，应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。 灵敏度，特异性和重复性灵敏度，特异性和重复性: 1. 灵敏度：最小可测人sICAM-1达60pg/ml. 2. 特异性：不与IL1,2,3,4,5,6,8,10,12,IFN,EGF,FGF,PDGF及TNF等反应。 3. 重复性：板内，板间变异系数均10%. 参考文献参考文献: Breast Cancer Res Treat. 1999 Nov;58(1):19-23 Thromb Haemost. 1999 Dec;82(6):1610-3. Immunol Lett. 1999 Oct 1;70(1):69-72. Neurology. 1999 Oct 22;53(7):1402-8. Zizdza-hcw
