《牛myostatin突变体基因pro区和生物活性区的克隆、表达与功能研究论文》由会员分享，可在线阅读，更多相关《牛myostatin突变体基因pro区和生物活性区的克隆、表达与功能研究论文（79页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、S t u d i e so fe x p r e s s i o na n dc l o n i n go fP r oa n da c t i v ed o m a i no fb o v i n em y o s t a t i nm u t a n ta n dI t sb i o c h e m i c a lf u n c t i o nD o c t o r a t ec a n d i d a t e ：Y a n gX i n g y u a nS u p e r v i s o r ：P r o f e s s o rC h e nY o n g f u( T h eS t
2、 a t eK e yL a b o r a t o r i e s f o r A g r o b i o t e c h n o i o g i e s ，c o l l e g eo f b i o l o g y , C h m aA g r i c u l t u r a lU n i v e r s i t y , 1 0 0 0 9 4 , B e i j i n gC h m a )A b s t r a c tM y o s t a t i n , am e m b e ro ft h et r a n s f o r m i n gg r o w t hf a c t o
3、r - B ( T G F B1s u p e f f a m i l y , h a sb e e ns h o w nt ob ean e g a t i v er e g u l a t o ro fm y o g e n e s i s B i o l o g i c a l ，t h er o l eo fm y o s t a t i ns e e m st ob ee x t r e m e l yw e l lc o n s e r v e dd u r i n ge v o l u t i o ns i n c ei n a c t i v a t i n gm u t a
4、t i o n si nm y o s t a t i ng e n ec a u s es i m i l a rp h e n o t y p eo f t h eb o v i n em y o s t a t i ng e n e M y o s t a t i n m u t a t i o na n i m a l ss h o wad r a m a t i ca n dw i d e s p r e a di n c r e a s ei ns k e l e t a lm u s c l em a s sd u et oa ni n c r e a s ei nn u m b
5、 e ro fm u s c l ef i b e r s l a s i a ) a n dt h i c k n e s so ff i b e r s( h y p e r t r o p h y ) T h e r e f o r e ，m y o s t a t i ni sad o m i n a t i n gg e n ef o ri m p r o v i n gt h ep r o d u c to fd o m e s t i ca n i m a l sa n dp o u l t r i e s m u s c l e T oi d e n t i f yb i o
6、c h e m i c a lf u n c t i o no fP r oa n dA c t i o nD o m a i nm u t a n to fb o v i n em y o s t a t i n ，w eu s e do l i g o n u c l e o t i d e sc o r r e s p o n d i n gt oc o n s e r v e dr e g i o n sa sp r i m e r sf o rp o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n ( P C R ) o nb o v i n eg e
7、 n o m i cD N Aa n do b t a i n e de x o n I ，e x o n 2 ，e x o n 3p a r t i a ls e q u e n c er e s p e c t i v e l y L i g a t i n ge x o n | a n de x o n 2p a r t i a lS e q u e n c ea n df o r m eP r od o m a i ns i g n a lp e p t i d ed e l e t e do fb o v i n em y o s t a t i nm u t a n ta n da
8、 c t i o no ft h eb o v i n em y o s t a t i nm u t a t i o nc D N A A sar e s u l tt h eP r oa n da c t i o nd o m a i nw e r ei n s e r t e di n t ot h ec l o n i n gv e c t o rp M D l 8 Ts u c c e s s f u l l y D N As e q u e n c es h o w so p e nr e a d i n gf m r n ei sc o r r e c t T h e nt h
9、e yw e r ei n s e r t e di n t ot h ee x p r e s s i o nv e c t o rP E T - 3 0 a( + ) t of o r mt h ee x p r e s s i o np l a s m i dp E T 3 0 a ( + ) M y o s t a t i n - P ma n dp E T 3 0a ( + ) M y o s t a t i n - a c t i o n T h er e c o m b i n a n tp l a s m i dw a su a n s f o m e di n t oB L
10、2 1 T w oi n - f r a m ef u s i o np r o t e i n sw e r ee x p e c t e ds u c ht h a taH i s s t r e t c hw mp o s i t i o n e da tt h eNt e r m i n u so f r M y o s t a t i n P r oa n dr M y r s t a t i n a c t i o nH i g he x p r e s s i o nw e r eo b t a i n e d ，w i t ht h er M y o s t a t i n P
11、 r ou pt o3 0 a n dr M y r s t a t i n a c t i o nu pt o3 8 i nt h et o t a lb a c t e r i a lp r o t e i na n de x i s ti ni n c l u s i o nb o d y r M y r s t a t i n P r oP r o t e i na n dr M y r s t a t i n a c t i o nP r o t e i nw e r ep u r i f i e db yD E A ES e p h a r o s eF a s tF l o wc
12、 h r o m a t o g r a p h ya n dt h ey i e l do fp u r i f i e dr M y r s t a t i n P r o a n dr M y r s t a t i n a c t i o nw e r ea p p r o x i m a t e l y8 0 u g m La n d6 0 u g m Lo fc u l t u r er e s p e c t i v e l y T h ee x t r a c t e di n c l u s i o nb o d yw a sp u r i f i e db yD E A E
13、S e p h a r o s eF a s tF l o wc h r o m a t o g r a p h y , o v e r9 5 o r9 8 o f t h et o t a ls e c r e t e dp r o t e i n S h e e pm u s c l ec e l l si s p i r a t e df r o ms k e l e t a lm u s c l ew e r ec u l t u r e di nD M E M F 1 2m e d i u ms u p p l e m e n t e dw i t hf e t a lc a l f
14、s e r u m ，a t3 Y C ，i na5 C 0 2g a s ，C e l l sc u l t u r e di na2 4 w e l lp l a t ea n dd i v i d e di n t ot w og r o u p s ：o n ei sw i t h o u tp u r i f i e dp r o t e i n ，t h eo t h e ri sc e l l sw i t hp u r i f i e dp r o t e i n I nc o n t r a s t , T h e r ei sa ni n c r e a s ei nm u
15、 s c l ec e l ls i z ea n dn u m b e ri nw e l l sw i t hp r o t e i n T h e s er e s u l t si n d i c a t et h a tM y o s t a t i n P r oa n dM y o s t a t i n a c t i o nc a ns t i m u l a t et h ep r o l i f e r a t i o no fs h e e pm u s c l ec e l l sa n ds h o w sh i g hb i o c h e m i c a la
16、c t i v i t yK e yw o r d slb o v i n em y o s t a t i ng e n e ；m u t a n t ；c l o n e ；s e q u e n c i n g ；p r o k a r y o t i ch i g h l ye x p r e s s i o n ；b i o c h e m i c a la c t i v i t yI l l独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谒 的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采
