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1、醛酮化合物检测方法高效能液相层析法中华民国 898 月 29 日（89）环署检字第 48966 号公告自中华民国 8911 月 29 日起实施NIEA R502.10C中华民国 913 月 5 日 环署检字第 0910014627 号公告修正为 NIEA R502.11C一、方法概要本方法用以检测非气体基质中具游醛酮基 (free carbonyl) 化合物。固态样品萃取液或水样经过后，在 40 下与 2,4-二硝基苯胼 (2,4-dinitrophenylhydrazine, DNPH) 反应，生成相对应之 DNPH 衍生物，经 C18 管柱萃取或二氯甲烷液相液相萃取及浓缩后，取适当体积注入
2、高效液相层析仪 (HPLC) 。使用逆相层析管柱及梯冲提分出各种醛与酮之 DNPH 衍生物，用紫外光侦测器在 360 nm 之波长测其吸收强，进目标待测物的确认与定。二、适用范围（一）本方法适用于水样、土壤、废弃物、及毒性化学物质样品检测。各目标待测物出如下：（二）方法侦测极限在表一及表二。视样品基质干扰情形及步骤中所使用的样品体积，各样品的方法侦测极限，可能与表中所之值同。三、干扰（一）方法的干扰可能源自于溶剂、试剂、玻璃器皿和样品处用设备的污染，导致随机干扰，或使层析图谱的基线升高，因此必须使用相同的检测条件设定，依七、（四）节步骤执实验室内试剂及器皿之方法空白检测，以确定无干扰物存在。待
3、测物 CAS No.a甲醛(Formaldehyde) 50-00-0乙醛(Acetaldehyde) 75-07-0丙醛(Propanal, Propionaldehyde) 123-38-6巴豆醛(Crotonaldehyde) 123-73-9丁醛(Butanal, Butyraldehyde) 123-72-8环己酮(Cyclohexanone) 108-94-1戊醛(Pentanal, Valeraldehyde) 110-62-3己醛(Hexanal, Hexaldehyde) 66-25-1庚醛(Heptanal) 111-71-7辛醛(Octanal) 124-13-0壬醛(N
4、onanal) 124-19-6癸醛(Decanal) 112-31-2注：a 化学文摘社登记号码。醛酮化合物检测方法高效能液相层析法(NIEA R502.11C) 第 1 页，共 20 页http:/www.niea.gov.tw/niea/REFUSE/R50211C.htm 2008/10/61.玻璃器皿必须绝对洁净，使用后必须即以最后所使用的溶剂冲洗，接着用清洁剂和热水清洗，再用自水和含有机物的试剂水清洗，清洗完成后，晾干并干燥之，使用前再于 130 烘箱中烘 2-3 小时。乙腈的冲洗步骤可以烘箱烘烤步骤取代，可用甲醇或丙酮清洗玻璃器皿，因这些溶剂会与 DNPH 反应而生成干扰物。于干
5、燥并却后，玻璃器皿应保存于一洁净区域，避免灰尘堆积或其它污染物的污染。2.使用高纯试剂和溶剂可减少干扰，并可使用全玻璃蒸馏系统蒸馏纯化溶剂。3.当执硅胶管处步骤时，必须戴聚乙烯 (PE) 材质的手套，以避免可能的污染。（二）由于环境中自然存在甲醛，故常发生 DNPH 试剂被甲醛污染，所使用的 DNPH 试剂必须以 HPLC 级的乙腈进多次再结晶纯化步骤，再结晶纯化步骤系于 40 - 60 慢慢将溶剂蒸发以得到最多的结晶，纯化后的 DNPH 结晶保存于 HPLC 级的乙腈中。于执样品检测前应先执 DNPH 中所含醛酮化合物纯物的检测，纯物的应小于 25 mg/L。附之 DNPH 再结晶步骤。（三
6、）基质干扰可能自于与样品共同被萃取出的污染物，基质干扰情形可分成样品源和基质本身。一系样品都有干扰问题，则应换移动相或进必要的清洗步骤。（四）样品中含有乙醇则于进衍生步骤时，会产生乙醛，此背景问题，将无法检测浓低于 0.5 ppm ( 500 ppb ) 的乙醛。四、设备（一）高效液相层析仪(组装式)1.泵系统：可梯冲提，固定控制可达 1.5 mL/min.。2.高压注射阀，附 20 L 样品回。3.管柱：250 mm 4.6 mm 内径， 5 - m 径之 C18 填充剂 (Zorbax）或同级品。4.吸光侦测器：360 nm。5.与侦测器通的记器：最好用据处系统以测尖峰面积及滞时间。6.氦
7、气：供移动相溶剂除气。7.移动相盛装容器和抽气过装置：供盛装和过 HPLC 移动相之用，过装置必须全为玻璃和铁氟材质，并使用 0.22 m 聚酯膜。8.样品注射针：将样品注入 HPLC 样品回中，至少需承装样品回体积之四倍的容。（二）衍生反应设备1.反应瓶：250 mL 平底长颈圆烧瓶。2.分液斗：250 mL 附铁氟栓。3.K-D 装置：分液斗液相液相萃取法（NIEA R106.00C）或其它萃取方法系的适当方法。(其它浓缩装置经实验室验证，具同等功能者亦可使用)。4.沸石：以二氯甲烷溶剂萃取洁净处过，约为 10 / 40 mesh (碳化硅或同级品)。5.pH 计：能测精确至 0.01 单
8、位。6.玻璃纤维纸：孔径 1.2 m (Fisher G4 级或同级品)。醛酮化合物检测方法高效能液相层析法(NIEA R502.11C) 第 2 页，共 20 页http:/www.niea.gov.tw/niea/REFUSE/R50211C.htm 2008/10/67.固相吸附管：内部充填 2 g C18 (Baker 或同级品)。8.真空固相萃取装置：能同时萃取 12 个样品 (Supelco 或同级品)。9.样品容器：容为 60 mL (Supelco 或同级品)。10.微吸管：能精确转置 0.10 mL 的溶液。11.水浴槽：加热用，附同心圆盖，可控制温(精确至 2 )，需在抽气
9、柜中操作。12.样品震荡器：回转震荡式及附温控制烘箱(精确至 2 ) (Lab-Line OrbitEnviron-Shaker Model 3527 或同级品)。13.注射针：5 mL、500 L、100 L，(附旋转密合接头或同级品)。14.针筒过片：0.45 m 片匣，(Gelman Acrodisc 4438 或同级品)。（三）瓶：5 mL 、10 mL 及 250 mL 或 500 mL。（四）样品瓶：10 或 25 mL 玻璃瓶，附铁氟内衬旋盖或加压密合盖。（五）天平：分析天平，精确至 0.0001 g。（）玻璃斗。（七）聚乙烯 (PE) 手套：用处硅胶吸附管。（八）固体样品萃取设
10、备1.旋转装置：此装置必须能以每分钟 30 2 次之频旋转萃取容器。2.萃取容器：500 mL 含铁氟垫片旋转式盖或压合式盖。3.过器附玻璃纤维纸。五、试剂（一）所有检测所需的无机试药皆需使用试药级。需使用其它等级试药，则在使用前必须确认该试药的纯足够高，使检测结果的准确致低。（二）含有机物的试剂水：所使用的试剂水中干扰物的浓，应小于目标待测物方法侦测极限值。（三）甲醛溶液：浓为 37.6 % (w/w)，将甲醛溶于含有机物的试剂水中。依下述步骤执甲醛储备溶液的正确浓确认。（四）醛和酮标准品：分析级，用制备除甲醛外之其它目标待测物的 DNPH 衍生标准品，目标待测物表。市售已衍生化标准品亦可使
11、用（照水中甲醛、乙醛和丙醛检测方法液相层析仪/紫外光侦测器法 NIEA W782.50B 五（）、节）。（五）使用之试剂1.二氯甲烷，CH2Cl2：HPLC 级或同级品。2.乙腈，CH3CN： HPLC 级或同级品。3.氢氧化钠，NaOH：1.0 N 和 5 N。4.氯化钠饱和溶液，NaCl：于含有机物的试剂水中加入过的试药级的氯化钠固体。5.亚酸钠溶液，Na2SO3：0.1 M。6.酸钠，Na2SO4：，无水。醛酮化合物检测方法高效能液相层析法(NIEA R502.11C) 第 3 页，共 20 页http:/www.niea.gov.tw/niea/REFUSE/R50211C.htm 2
12、008/10/67.柠檬酸，C8H8 O7：1.0 M 溶液。8.柠檬酸钠，C6H5 Na3O7 2 H2O：1.0 M 含二个结晶水的三钠盐。9.冰醋酸，CH3 CO2H。10.醋酸钠，CH3 CO2Na。11.盐酸，HCl：0.1 N。12.柠檬酸盐缓冲液，1 M，pH = 3：将 80 mL 之 1 M 柠檬酸溶液加入于 20 mL 之 1M 柠檬酸钠溶液中，混合均匀，视需要使用 NaOH 或 HCl 调整 pH 值。13.醋酸盐缓冲液，5 M，pH = 5（分析甲醛时使用）：将 40 mL 之 5 M 醋酸溶液加入于 60 mL 之 5 M 醋酸钠溶液中，混合均匀，视需要使用 NaOH
13、 或 HCl 调整pH 值。14.2,4-二硝基苯胼，2,4-(O2N)2C6H3NHNH2 (DNPH)，70 % (w/w) 于含有机物的试剂水中：将 428.7 mg 之 70 % (w/w) DNPH 溶液溶于 100 mL 乙腈中，即制备成浓为 3.00 mg/mL 之溶液。15.萃取液：将 64.3 mL 之 1.0 N NaOH 和 5.7 mL 之冰醋酸加入于 900 mL 含有机物的试剂水中，再以含有机物的试剂水稀释至 1 L，pH 应为 4.93 0.02。（）储备标准溶液1.甲醛储备标准溶液，约 1000 mg/L：取适当之甲醛确认标准品，或甲醛标准溶液(约 265 L
14、)于含有机物的试剂水中稀释。无法取得甲醛确认标准品，或甲醛确认标准品的质量无法确定时，需依下述步骤执进溶液的标定。甲醛储备溶液标定：取 25 mL 之 0.1 M Na2SO3 溶液置于烧杯中并记 pH值，加入 25.0 mL 之甲醛储备溶液，记pH 值，以 0.1 N HCl 滴定此混合溶液，使 pH 回至原 pH 值。依下式计算甲醛的浓：式中：N HCl =所使用 HCl 溶液之当浓，毫当 (meq)/mL (1 mmole HCl = 1meq HCl)mL HCl =标定所使用之 HCl 溶液体积30.03 =甲醛之分子，mg/mmole2.醛及酮储备标准溶液：取适当之标准品加入于 9
15、0 mL 之乙腈中，稀释至100 mL，浓即为 1000 mg/L。（七）标准品储存：所有标准溶液需储存于附铁氟内衬旋盖的玻璃瓶中，应尽充满，使瓶端空间尽小，于 4 暗处保存，标准品可稳定保存 6 周。应经常检查储备标准溶液是否有解或蒸发现象，尤其是制备校正标准品前应作检查。（八）校正标准品取储备标准溶液，于含有机物的试剂水中，配制至少五种同浓之包含每一目标待测物的校正标准溶液，每一目标待测物的低浓，应恰好或稍高于表一或表二中所之方法侦测极限，其它校正标准溶液的浓，则可配合预期之真实样品的浓范围作适当的调整。醛酮化合物检测方法高效能液相层析法(NIEA R502.11C) 第 4 页，共 20 页http:/www.niea.gov.tw/niea/REFUSE/R50211C.htm 2008/10/6、采样与保存（一）事业废弃物采样方法 NIEA R118.00B有关有机待测物相关之采样与保存规范。（二）采样后之样品需于 4 以下藏，但毒性化学物质在此限。水溶液样品必须采样后三天内进衍生反应及萃取步骤。固体萃取液样品应尽早检测。所有衍生反应后的样品萃取液应于制备后三天内完成检测。七、步骤（一）样品萃取处1.含固体及水溶液相样品萃取法样品中包含固体，及水溶液样品中所含固体物大于百分之一，则应将水相与固相分，依、（二）节步骤分别保存，供日后
