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1、葛根素对急性缺血再灌流损伤肾脏的保护作用葛根素对急性缺血再灌流损伤肾脏的保护作用葛根素对急性缺血再灌流损伤肾脏的保护作用2011-09-15 江德文 周琳英 林从容 高丽真 吴翊钦 葛根素(普乐林)是从中药野葛根的总黄酮提取物中经分离纯化的一种注射剂，大量动物实验及临床研究：葛根素能改善心脏、脑缺血性疾病及其微循环作用1 ；但对脂质过氧化过程和 Na+-K+-ATPase 活性影响，尚无报道。本实验建立大鼠肾脏急性缺血再灌流模型，观察葛根素对急性缺血再灌流 SD 大鼠肾脏形态功能和肾脏组织丙二醛(MDA)、Na+-K+-ATPase 活性的影响，以探讨葛根素对急性缺血再灌流损伤肾脏功能保护作用
2、及机制。 一、材料与方法 1.实验动物：雄性 SD 大鼠共 18 只，体重(180200 g)，选用8 周龄，由福建医科大学实验动物中心提供，随机分成假手术组，对照组和治疗组。 2.模型建立：大鼠经戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔注射麻醉后游离双侧肾脏，银夹阻断右肾动、静脉 30 分钟后放开，观察右肾充血后，再结扎左肾动、静脉，切除左肾。假手术组：游离双侧肾脏，暴露 30 分钟后再缝合，不作治疗。治疗组：肾缺血前尾静脉注射葛根素(中外合资烟台中策药业有限公司提供，15 mg/kg)，缺血 30 分钟后再静脉追加相同剂量药物，以后按 30 mg/kg 的剂量每 6 小时腹腔注射一次。对照组：用
3、相同的方法注射等体积注射生理盐水，三组大鼠分别于再灌注 48 小时后处死。 附表 葛根素对肾急性缺血再灌流损伤血 Scr，肾组织 MDA 及Na+-K+-ATPase 影响 组别 只数 血肌酐 丙二醛 Na+-K+-ATPase (mol/L) (nmol/mg 蛋白) (mol pi*mg*pr-1/10 min) 假手术组 6 56.128.52 4.810.52 38.123.21 治疗组 6 96.125.52 5.020.35* 34.032.39 对照组 6 186.3111.63* 7.820.95* 21.380.58* 注：与假手术组比*P0.05，与治疗组比P0.01 3.
4、肾组织丙二醛(nmol/mg 蛋白)含量测定：采用 TBA 荧光法2 ；肾组织 Na+-K+-ATPase(mol pi*mg-1*pr-1/10 min)活力测定采用哇巴因抑制法3 。 4.电镜检查按常规方法进行。 5.统计学处理：实验数据结果用表示，统计采用成组 t 检验法，差异显著性标准为 P0.05。 二、结果 1.血肌酐、肾组织 MDA 含量和 Na+-K+-ATPase 活性变化：见附表。 2.电镜观察：组织形态学改变。假手术组：细胞膜完整，细胞密度中等，细胞核，线粒体均正常(图 1)；对照组：部分细胞密度降低，胞质疏松，线粒体肿胀明显，嵴甚至消失，并可见大量脂褐素聚积(图 2，3
5、)。治疗组：细胞病变明显改善，细胞密度恢复正常，多数细胞内线粒体正常，仅个别线粒体仍有轻度肿胀(图 4，5)。 讨论 上述研究发现，肾缺血 30 分钟再灌流 48 小时所致急性肾脏损伤大鼠应用葛根素治疗后，血肌酐、肾组织 MDA 含量显著下降、Na+-K+-ATPase 活性显著升高，线粒体大部分恢复正常，细胞肿胀明显好转，改善了肾脏形态结构和功能。表明葛根素具有保护急性缺血再灌流肾脏损伤作用。目前已知氧自由基(RF)、肾细胞Na+-K+-ATPase 损伤在肾脏缺血再灌流损伤中起重要作用4 。本实验也证实了这一点，对照组血肌酐，肾组织 MDA 显著升高，而Na+-K+-ATPase 活性显著
6、下降，线粒体肿胀，嵴断裂及消失。原因是肾缺血时，肾组织局部肾素-血管紧张素系统，儿茶酚胺增高，造成肾缺血，缺氧加重，线粒体功能受损，肾细胞损伤；当肾血流再通后，局部组织细胞生成大量 RF，RF 堆积对线粒体功能进一步破坏使肾组织脂质过氧化损伤加重；另一方面线粒体功能受损，使 Na+-K+-ATPase 供应能量受到影响；Na+-K+-ATPase 活性下降，造成细胞内钠离子转运到细胞外发生困难，导致细胞水肿，胞质疏松，又加重了肾细胞损伤。因此，分析葛根素对急性缺血再灌流肾脏损伤保护作用，可能通过(1)具有清除自由基和抗脂质过氧化损伤作用；改善肾细胞 Na+-K+-ATPase 活性；(2)拮抗
7、肾素-血管紧张素，儿茶酚胺所致收缩微血管作用，改善肾缺血、缺氧5 。最终改善肾形态结构和肾功能作用，通过本实验研究拓展了葛根素应用范围，为临床上治疗急性缺血灌流肾功能衰竭打下基础，具有临床应用价值。 图 1 假手术组：细胞密度中等，细胞核(Nu)，线粒体(Mi)均正常 电镜12 000 图 2 对照组：细胞内见大量脂褐素()及部分线粒体肿胀，嵴消失() 电镜9 000 图 3 对照组：细胞内多数线粒体(Mi)肿胀，嵴消失 电镜9 000 图 4 治疗组：细胞病变明显减轻，仅个别线粒体轻度肿胀，嵴断裂() 电镜6 000 图 5 治疗组：细胞基本正常，细胞核(Nu)，线粒体(Mi)均未见明显改变
8、 电镜6 000 作者单位：350005 福州，福建医科大学附属第一医院肾内科(江德文、林从容、高丽真)，福建医科大学电镜室(周琳英、吴翊钦) 参考文献 1 陶忠华.新药葛根素的研究.中国新药杂志，1993，2：1-3. 2 Ohkawa H, Ohishi N, Yagi K. Assay for lipid peroxides in animal tissues by thiobarbituric acid reaction. Anal Biochem, 1979,95：351-358. 3 Kim MS, Akera T. O2 free redicals: cause of ische
9、mia reperfusion injury to cardial Na+-K+-ATPase. Am J Pysiol, 1987,252：H252-257. 4 Du XH, Yang CL. Mechamism of gentamicin nephrotoxicity in rats and the protective effect of zinc-induced metallothionein synthesis. Nephrol Dial Transplant, 1994,9 Suppl 4：135-140. 5 李小鹰，王培仁，邵建华，等.静脉注射葛根素对犬急性心肌梗塞范围的影响.山东医科大学学报，1984，22：9-17.
