肿瘤坏死因子α对缺血复灌心肌的保护作用及其信号转导机制

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1、浙江大学硕士学位论文肿瘤坏死因子-对缺血/复灌心肌的保护作用及其信号转导机制姓名：傅琛申请学位级别：硕士专业：生理学指导教师：夏强2003.5.1浙江大学硕士学位论文肿瘤坏死因子一a 对缺血复灌心肌的保护作用及其信号转导机制浙江大学医学院生理学教研室硕士研究生傅琛导师夏强教授摘要r 一一一一，I 肿瘤坏死因子删( T u m o rn e c r o s i sf a c t o r - a l p h p ，T N F “) 堤一类具有多种生物学效应7L 、一一一一一的细胞因子。除激活的巨噬细胞外，心肌细胞本身也可分泌产生T N F a ，并参与多种心脏疾病如充血性心力衰竭、心肌炎、缺血性心

2、脏病的病理生理过程。研究证明T N F - , f f具有抑制心肌收缩的负性肌力作用，其机制可能是抑制收缩期细胞内钙水平的增高。此外，近年来研究发现，T N F - o t 还具有抑制心肌缺血，再灌注损伤的保护作用，其作用机制可能是通过诱导锰超氧化物歧化酶( m a n g a n o u ss u p e r o x i d ed i s m u t a s e ，M n - S O D ) 的表达：及活性提高，但是关于T N F - c t 究竟是通过哪些信号转导通路诱导M n S O D 表达及活性；提高而起到心肌保护作用，尚未见到相关的报道。因此，本文首先在亚细胞水平上研究；了T N

3、F - c t 对心肌细胞舒张期胞内钙重摄取外排作用的影响，深入探讨了T N F a 的心肌负性肌力作用机制：并且着重分别在器官和细胞水平上，研究了T N F - c t 心肌缺血保护的，机制及其涉及的信号转导途径。 彳，。、目的、( 1 ) 观察i i 叠对心肌细胞肌浆网c a 2 + A 1 P 酶和肌膜上的c a 2 + 触f P 酶、N a + K +- A T P 酶活性的影响，以探讨T N F a 的心肌负性肌力作用机制。( 2 ) 分别在离体心脏和培养的心肌细胞上观察T N F n 在心肌缺血再灌注或缺氧复氧损伤中的作用。浙江大学硕士学位论文( 3 ) 研究括。性氧、线粒体A T

4、 P 敏感性钾通道和一氧化氨对T N F - a 心肌保护作用的影响，以探讨T N F - a 保护作用机制及其下游的信号转导途径。f 方法、( I ) 离体大鼠右心室乳头肌的制各及张力的测定：常规右心室乳头肌灌流及张力测定技术。( 2 ) 心室肌细胞酶解分离：I 型胶原酶酶解分离心室肌细胞。( 3 ) 细胞内游离钙的测定：用细胞内双波长钙荧光系统( T I L L ，德国) 检测细胞内游离钙离子浓度，以F u r a - 2 A M 为钙指示剂。( 4 ) 离体大鼠心室肌细胞肌浆网制各( 5 ) 离体大鼠心室肌细胞膜的制备( 6 ) 肌浆网和肌膜c a 2 + - A T P 酶和N a +

5、 K + - A T P 酶活性测定：c a 2 + - A T P 酶和N a + K +- A T P 酶活性均用无机磷比色法测定。( 7 ) 离体心脏L a n g e n d o r f f 灌流及左室功能评价：L a n g e n d o r f f 恒压灌流技术。( 8 ) 乳鼠心肌细胞制备和培养( 9 ) 离体心脏缺血一再灌注模型和培养的乳鼠心肌细胞缺氧复氧模型：离体灌流心脏的缺血模型采用全心停灌方法，以停止灌流2 0r a i n ，复灌2 0r a i n 作为缺血，复灌过程。培养的心肌细胞缺氧复氧模型经缺氧培养1 2 h 后，再常氧培养6 h ，作为复氧处理。( 1 0

6、) 心肌损伤和线粒体M n S O D 活性指标的分析：利用分光光度法测定冠脉流出液中乳酸脱氢酶( 1 a c t a t ed e h y d r o g e n a s e ，L D H ) 的活性。提取线粒体以黄嘌呤氧化酶法检测M n S O D 活性。结果第一部分：T N F 对正常大鼠心脏的作用及其可能机制浙江大学硕士学位论文( 1 ) T N F - c t 抑$ , J 大鼠右心室乳头肌的收缩力，2 0U m l 和2 0 0U m lT N F - - a 灌流1 0m m后，乳头肌收缩力分别减小到对照的9 l 和7 6 ( P 均 0 0 5 ) ：( 3 ) T N F q

7、 明显抑制肌浆网c a 2 + - A T P a s e 活性，平均抑制率达到2 0 ；( 4 ) T N F - c t 拮抗肌浆网C a Z + - A T P a s e对底物中不同水平的c a 2 + 和A T P 的正相关反应性；( 5 ) T N F 对肌膜c a 2 + - A T P 酶和N a + K - _ A T P 酶活性无明显抑制作用。第二部分：T N F - c t 对缺血复灌心肌的作用及其可能机制1 、观察T N F - a 预处理对缺血再灌注心脏心功能和酶学指标的影响及其可能作用机制( 1 ) 与单独缺血再灌注组相比，缺血前T N F 0 1 ( 1 0U m

8、 1 ) 预处理明显减弱缺血再灌注对L V D P 、L V E D P 、+ d P d t m a x 和L V D P H R 的抑制作用( P 0 0 5 ) ：( 2 ) T N F _ a +缺血再灌注组复灌后，冠脉流出液中L D H 含量显著降低：线粒体中M n - S O D 活性明显高于单独缺血再灌注组( P 0 0 5 ) ；( 3 ) 分别使用抗氧化剂2 - M P G ( O 3m M ) 、一氧化氯合酶抑制剂L - N A M E ( 0 5m M ) 或m i t o K T P 通道抑制剂5 - H D ( 1 0 0 弘M ) 预处理后，减弱了T N F - (

9、 z 改善缺血再灌注后心功能的作用；( 4 ) 分别使用2 - M P G 、L - N A M E 或5 - H D 预处理后，T N F - o L 抑制缺血再灌注后心肌L D H 释放和诱导M n - S O D 活性增高的作用被减弱。2 、研究活性氧和线粒体A T P 敏感钾通道是否参与介导T N F - x 对缺氧复氧心肌的保护作用。( 1 ) 用T N F - c c ( 1 0 5 0 0 U m 1 ) 预处理，缺氧复氧后心肌细胞内M n - S O D 活性增高、L D H 释放量减少( P ( 0 0 5 ) ：( 2 ) 抗氧化剂N A C ( 1r a M ) 、a n

10、 t i m y c i n A ( 5 0 “M ) 、2 - M P G( 4 0 0F M ) 和C u Z n - S O D 抑制剂D D C ( 1 0 0 r i M ) 预处理后，取消了T N F - 。的抑制缺氧复氧心肌细胞L D H 释放和诱导M n - S O D 活性增高的作用；( 3 ) m i t o K m P 通道抑制剂5 - H D 预处理可阻断T N F - o L 对缺氧复氧心肌细胞的保护作用：选择性m i t o K A r v 通道浙江大学硕士学位论文开放剂d i a z o x i d e ( 5 0g M ) 预处理后可减少复氧后心肌细胞L D H

11、 释放( P o0 1 ) ，其作用可被5 - H D ( 1 0 0u M ) 和N A C 所抑制。3 、探讨一氧化氮在T N F - o L 对缺氧复氧心肌保护中的作用。( 1 ) 用T N F - c t ( 1 0 0U m 1 ) 预处理，缺氧复氧( I - I R ) 后心肌细胞内M n S O D 活性增高、L D H 释放量减少；( 2 ) N O 供体S N P ( 5 # m o l L ) 和前体L - A 曙( 5m m o l L )预处理心肌细胞3h ，I - F R 后细胞内M n S O D 活性增高、L D H 释放量减少，用N I 】石自基一L 一精氨酸甲

12、酯( L - N A M E ) ( 1 0 0 x m o l L ) 预处理后削弱了T N F - c t 的抑制缺荤【，复氧心肌细胞L D H 释放和诱导M n - S O D 活性增高的作用；( 3 ) 可溶性鸟苷酸环化酶( s G C )抑制剂O D Q ( 1 0 肛m o l L ) 和P K C 抑制剂C h e l e r y t h r i n e ( 5 # m o l L ) 可分别减轻S N P 、L A r g 和T N F m 对缺氧复氧心肌细胞的保护作用；( 4 ) T N F q 对缺氧复氧心肌细胞的保护作用可被抗氧化剂2 - M P G ( 4 0 0 #

13、m o l L ) 削弱但是蛋白酪氨酸激酶( T K ) 抑、制荆G e n i s t e m ( 5 0 # m o l L ) 预处理对T N F 一诱导的心肌I - I R 保护无影响。卜石结论( 1 ) T N F - a 抑制心肌收缩力的负性肌力作用机制可能部分与心室肌浆网c a 2 + - A T P 酶活性下降相关，而与膜上的C a 2 + - A T P 酶和N a + K + - A T P 酶活性无关。( 2 ) T N F - 预处理具有减轻心肌细胞缺血再灌注或缺氧愎氧损伤的作用活性氧和线粒体A T P 敏感钾通道参与介导T N F - a 的心肌保护作用。( 3 )N

14、 O 参与调节T N F - a 诱导的心肌缺氧，复氧损伤保护作用，P K C 和G C 可能为其下游信号途径成分。浙江大学硕士学位论文C a r d i o p r o t e c t i o no fT um o rN e c r o s i sF a c t o r - a lp h aa n dt sS i g n a lT r a n s d u c t i o nM P I l i l C a l l d i d a t e ：F uC h e nS u p e r v i s o r ：P r o f e s s o rX i aQ i a n gD e p a r t m e

15、n to f P h y s i o l o g y , Z h e j i a n gU n i v e r s i t yS c h o o lo f M e d i c i n eA B S T R A C TT h eh e a r ti sat u m o rn e c r o s i sf a c t o r - a l p h a ( T N F - c 0 - p r o d u c i n go r g a n A c c u m u l a t i n ge v i d e n c ei n d i c a t e st h a tm y o c a r d i a lT

16、N F - c ti sa l la u t o c r i n ec o n t r i b u t o rt h a th a sb e e ni m p l i c a t e di nt h ep a t h o g e n e s i so fc a r d i o v a s c u l a rd i s e a s e s ，i n c l u d i n gm y o c a r d i a ld y s f u n c t i o n P r e v i o u ss t u d i e sh a v es u g g e s t e dt h a tT N F - i n

17、d u c e sn e g a t i v ei n o t r o p i ce f f e c t sb yd i s r u p t i o no f e a l e i u mh a n d l i n g B u ts e v e r a ls t u d i e ss h o w e dt h a tT N F - ni ss u f f i c i e n tt op r o t e c tc a r d i a cm y o c y t e sa g a i n s te i t h e rh y p o x i eo ri s c h e m i ei n j u r yb

18、 ye l e v a t em R N Aa n dp r o t e i nl e v e l so fm a n g a n o u ss u p e r o x i d ed i s m u t a s e ( M n - S O D ) ，w h i c hi sr e g a r d e da st h ep r i m a r yd e f e n s i v ee n z y m ea g a i n s to x i d a t i v es t r e s sw i t h i nm i t o e h o n d r i a H o w e v e r , t h ec

19、e l ls i g n a l i n gm e c h a n i s mi n v o l v e dT N F - o Li n d u c e dc a r d i o p r o t e c t i o ni sn o tc l e a r O b j e c t i v e s ：( 1 ) T oi n v e s t i g a t et h em e c h a n i s mo ft h en e g a t i v ei n o t r o p i oe f f e c to fT N F - o ti nc a r d i o m y o c y t e s ；( 2

20、 ) T od e f i n et h er o l eo fT N F - o fi ni s o l a t e dr a th e a r ta n dc u l t u r e dn e o n a t a lv e n t r i c u l a rm y o c y t e sd u r i n gi s e h e m i “r e p e r f u s i o na n dh y p o x i “r e o x y g e n a t i o n ；5 浙江大学硕士学位论文( 3 ) T e s t i f yw h e t h e rt h er e a c t i v

21、 eo x y g e ns p e c i e s ，n i t r i co x i d eo rn t i t o c h o n d r i a lA T P s e n s i t i v ep o t a s s i u m ( m i t o K A T e ) c h a n n e l sa l ei n v o l v e di nt h ec a r d i o p r o t e c t i o ni n d u c e db yT N F 瑾M e t h o r d s ：( 1 ) P a p i l l a r ym u s c l ep r e p a r a

22、 t i o na n dm e a s u i e m e n to fc o n t r a c t i o nT h eh e a r to f m a l eS p r a g u e - D a M e yr a tw a sr a p i d l yr e m o v e da n dt r a n s f e r r e di ni c e - c o l dT y r o d es o l u t i o n P a p i l l a r ym u s c l ew a se x c i s e df r o mt h ef i g h tv e n t r i c l ea

23、 n df i x e di nat i s s u eb a t hb yt w op i e c e so f s t a i n l e s ss t e e lp i n I tw a sp e r f a s e dw i t hw a r m e dT y r o d es o l u t i o na e r a t e dw i t h9 5 0 2a n d5 C 0 2 a tar a t eo f3m Y m i n T h et e n d o nw a sl i g a t e dw i t has i l kl i n e dt oat e n s i o nt r

24、 a n s d u c e rt h a tw a sc o n n e c t e dt ot h ec o m p u t e r P a p i l l a r ym u s c l ew a ss t i m u l a t e dw i t hb i p o l a re l e c t r o d e sa tt w i c et h r e s h o l dv o l t a g ew i t hap u l s ew i d t ho f1I m T h ec o n t r a c t i l ef o r c ew a sr e c o r d e da n da n

25、a l y z e dw i t hM e d L a bs y s t e m ( 2 ) P r e p a r a t i o no fi s o l a t e dv e n t r i c u l a rm y o c y t e sT h eh e a r t sw e r ep e r f u s e dw i t hc a 2 + - f r e eT y r o d e ss o l u t i o nw i t hL a n g e n d o r f fa p p a r a t u s T h e nt h ep e r f u s i o ns o l u t i o

26、 nw a ss w i t c h e dt oal o wC a 2 + ( 5 0mT y r o d e ss o l u t i o nc o n t a i n i n gO0 3 c o l l a g e n a s ea n d1 b o v i n es e l U l na l b u m i n 限S A ) f o r1 0m a n T h e nt h ev e n t r i c l e sw e r ec u t ，m i n c e d ，a n dg e n t l yt r i t u r a t e dw i t hap i p e t t ei nt

27、 h el o wC a “T y r o d e Ss o l u t i o nc o n t a i n i n gB S Aa t3 T Cf o r1 0m m T h ec e l l sW e l er e s u s p e n d e di nt h eT y r o d e Ss o l u t i o ni nw t f i c ht h eC a “c o n c e n t r a t i o nW a sg r a d u a l l yi n c r e a s e dt o1 2 5m Mo v e r4 0m m ( 3 ) I n t r a c e l l

28、 u l a rc a l c i u mr e c o r d i n gM o n i t o r i n go fi n t r a c e l l u l a rc a l c i u mW A Sc a r r i e do u tu s i n gt h ef l u o r e s c e n td y cf i l m - 2 A M F l u o r e s c e n c ew a sm e a s u r e do na l lO l y m p u si n v e r t e dm i c r o s c o p ee q u i p p e dw i t haf

29、l u o r o m e t e rs y s t e mc r I L L ，G e r m a n y ) T h eC a ”d e p e n d e n ts i g n a lo f f u r a - 2W a so b t a i n e db y6 浙江大学硕士学位论文i l l u m i n a t i n ga t3 4 0a n d3 8 0n ma n dr e c o r d i n gt h ee n t i t l e dl i g h ta t5 1 0m T h e C a ” it r a n s i e n tw a si n d u c e db

30、ys u p r a - t h r e s h o l ds t i m u l ia tO 5H zd e l i v e r e dt h r o u g ht w op l a t i n u mf i e l d s t i m u l a t i o ne l e c t r o d e si nt h eb a t h i n gf l u i d ( 4 ) P r e p a r a t i o no f c a r d i a cs a r c o p l a s n t i cr e t i c u l u m ( s R ) f i a c t i o n s( 5 )

31、 P r e p a r a t i o no f c a r d i a cp l a s m am e m b r a n e( 6 ) D e t e r m i n a t i o no f C a 2 + - A T P a s ea n dN a + K + - A T P a s ea c t i v i t yT h ea c t i v i t i e so fm tm y o c a r d i a lS RC a 2 + - A T P a s e ，C a ”- A T P a s ea n dN a + K + - A T P a s eo fp l a s m am

32、 e m b r a n eW e r em e a s u r e dw i t hc o l o r i m e t r i c a lm e t h o d sb ym e a s u r i n gt h eP il i b e r a t e df r o mA T Ph y d r o l y s i s ( 7 ) I s o l a t e dp e r f u s e dr a th e a r tp r e p a r a t i o nM a l eS Dr a th e a r tw a sr e t r o g r a d e l yp e r f n s e dw

33、i t ha9 5 O z + 5 C 0 2e 删l i b m t e dK r e b s H e n s e l e i t ( K - 田s o l u t i o nv i at h ea o r t aa tac o n s t a n tp r e s s u r eo f7 4m m H g T h eL e f tv e n t r i c u l a rd e v e l o p e dp r e s s u r e ( E V D P ) ，l e Rv e n t r i c u l a re n dd i a s t o l i cp r e s s u r e (

34、 L V E D P ) ，t h em a x i m a lr a t e so fl 吐v e n t r i c u l a rp r e s s u r ee l e v a t i o n ( + d p d t m a x ) a n dd e p r e s s i o n ( - d p d l a n a x )w e r er e c o r d e db yM e d L a bd a t aa c q u i s i t i o ns y s t e m ( 8 ) N e o n a t a lr a tc a r d i o m y o c y t ec u l

35、t u r eH e a r t sw e r eq u i c k l yr e m o v e df r o m1 - d a y - o l dS Dr a t s T h ee x c i s e dv e n t r i c l e sw e r ec u ti n t o1t o2 - m mc u b e s ，t h e np l a c e di n1 0 m lD - H a n k sc o n t a i n i n g0 1 t r y p s i nt od i s s o c i a t e T h ed i s s o c i a t e dc e l l sw

36、 e r ec o l l e c t e d ，a n da d d e dt ot h ec o l dD u l b e c c o Sm o d i f i e dE a g l e Sm e d i u m ( D M E M ) T h ec o l l e c t e ds u p e r n a t a n tc o n t a i n i n gd i s s o c i a t e dc e l l sw a sc e n t r i f u g e d ，a n dt h e nr e s u s p e n d e di n1 0m lD M E Mc o n t a

37、i n i n g1 5 F B S A f t e ri n c u b a t i o nf o r1h ，n o n - a d h e r e n tc e l l sw e r ec o u n t e da n dp l a t e do n2 4 - w e l l - p l a t e sa tad e n s i t yo f5 x 1 0 4 c m 2 I n c u b a t e df o r3 - 4d a y s ，s y n c h r o n o u sc o n t r a c t i o n so ft h em o n o l a y e rc e l

38、 l sw e r en o t e da n dt h eb e a t i n gr a t e so f m y o c y t e se x c e e d e d18 0t i m e s m i n 7 -一塑垩查兰堡主兰垡堡三( 9 ) I s c h e m i aa n dr e p e r f u s i o n ( I ，R ) o fi s o l a t e dh e a r ta n dh y p o x i aa n dr e o x y g e n a t i o n( I - I R ) o f c u l t u r e dn e o n a t a lv

39、e n t r i c u l a rm y o c y t e s1 1 1t h ep r e s e n ts t u d y t h eh e a r t sw e r es u b j e c t e dt o2 0m i no fg l o b a li s c h e m i aa n d 2 0r n i no fr e p e r f u s i o n I na n o t h e rs e r i e so fe x p e r i m e n t si nc u l t u r e dv e n 恤c u l a rm y o c y t e s ，H Rw a sc

40、o n s i s t e do fc o n t i n u o u sh y p o x i a ( 9 5 n i t r o g e n - 5 C 0 2 ) f o r1 2ha n dn o r m o x i cc o n d i t i o n sf o r6 h ( 1 0 ) M e a s u r e m e n t so f L D Ha n dM n - S O Da c t i v i t i e sL D Hl e v e l sw e r ed e t e r m i n e dw i t hac o l o r i m e t r i ca s s a yt

41、 h a tm e u r e st h eC O I l V e r s i o uo fp y m v i ca c i dt ol a c t i ca c i db yL D H M n - S O Da c t i v i t yW a sd e t e r m i n e dw i t hac o l o r i m e t r i ca s s a yk i t R e s u l t s ：P a r t1 ：M e c h a n i s mo fn e g a t i v ei n o t r o p i ce f f e c t0 ft u m o rn e c r o

42、s i sf a c t o r - o nr a tm y o c a r d i u mI tw a ss h o w nt h a tT N F - da t2 0U m la n d2 0 0U m ld e p r e s s e dt h ec o n t r a c t i l i t yo fv e n t r i c u l a rp a p i l l a r ym u s c l et o9 1 a n d7 6 o fc o n t r o l ( p 0 0 1 ) ，r e s p e c t i v e l y , b u th a dn oe f f e c t

43、o nt h ea m p l i t u d eo fe l e c t r i c a l l yi n d u c e dc a l c i u mt r a n s i e n ti ns i n g l em y o c y t e T N F - ai n h i b i t e dt h er e s p o n s i v e n e s so fS RC a 2 + A T P a s ea c t i v i t yt oA T Pr 0 1 4m m o V L ) a n dC a “( 1 - - 4 0w n o l L ) T N F - o d i dn o t

44、a l t e rt h ea c t i v i t i e so fc a 2 + - A T P a s ea n dN a + K + A T P a s eo fp l a s m am e m b r a n ec o m p a r e dw i t hc o n t r o lg r o u p P a r t2 ：E f f e c to ft u m o rn e c r o s i sf a “o r 俚i np o s t i s c h e m i eo rp o s t h y p o x i cm y o c a r d i u ma n dt h ep o s

45、s i b l em e c h a n i s m1 T h ee f f e c to fT N F do i lc o n t r a c t i l ep a r a m e t e r si ni s o l a t e dr a th e a r td u r i n gi s c h e m i a r e p e r f u s i o na n di t sp o s s i b l em e c h a n i s mP e r f u s i o nw i t hT N F - q ( 1 0u M ) a t t e n u a t e dt h ei n h i b

46、i t o r ye f f e c t si n d u c e db y8 ，浙江大学硕士学位论文i s c h e m i a r e p e r f u s i o no nL V D P , L V E D P , + d r ) d t m a xa n dL V D P H R T N F - as i g n i f i c a n t l yd e c r e a s e dt h er e l e a s eo fI S ) H ( P O 0 5 ) a n di n c r e a s e dt h ea c t i v i t yo fM n S O Di nt h

47、em y o c a r d i u m ( P 0 0 5 ) A n t i o x i d a n t2 - M P G ( 0 3m M ) ，N O Si n h i b i t o rL - N A M E ( o 5m M )o rr r f i t o c h o n d r i a ls e l e c t i v eK A T Pc h a n n e li n h i b i t o r5 - H D ( 1 0 0 脚) a t t e n u a t e dt h ei n c r e a s ei nL V D P , _ + d p d t m a xa n dL

48、 V D P x H R ，a n dd e c r e a s ei nL V E D Pr e d u c e db yT N F - a ，r e s p e c t i v e l yA n dt h ee f f e c t so f T N F mi nr e d u c i n gt h el e v e l so f L D Ha n di n c r e a s i n gt h eM n - S O Da c t i v i t yw e r ea l s oa t t e n u a t e db y2 - M P GL - N A M Eo r5 - H D ，r e

49、s p e c t i v e l y2 T h ee f f e c t so fr e a c t i v eo x y g e ns p e c i e sa n dm i t o c h o n d r i a l A T P - s e n s i t i v ep o t a s s i u m( m i t o K h - r P ) c h a n n e l si nt h ec a r d i o p r o t e c t i o nm d u c e db yT N F do nc u l t u r e dn e o n a t a lr a tc a r d i o

50、 m y o c y t e st h t r i n gh y p o x i a r e o x y g e n a t i o nP r e t r e a l m e n tw i 血T N F - 1 ( 1 0 ，5 0 ，1 0 0 ，o r5 0 0U m 1 ) s i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e dt h eM n - S O Da c t i v i t i e sa n dr e d u c e dL D Hr e l e a s ei nt h en e o n a t a lv e n t r i c u l a rm

51、y o c y t e ss u b j e c t e dt oh y p o x i aa n dr e o x y g e n a t i o n P r e t r e a t m e n tw i t hN A C ( 1m M ) ，a n t i m y c i nA ( 5 0p M ) ，2 - M P G( 4 0 0 弘M ) ，D D C ( 1 0 0n M ) o r5 - H D ( 1 0 0 M ) ，r e s p e c t i v e l y , a t t e n u a t e dt h ei n c r e a s eo fM n - S O Da

52、 c t i v i t i e sa n dr e d u c t i o no fL D Hl e v e li n d u c e db yT N F 一i nv e n t r i c u l a rm y o c y t e sD i a z o x i d e ( 5 0u M ) ，as e l e c t i v eo p e n e ro f t h em i t o c h o n d r i a lK A r Pc h a n n e l ，d e c r e a s e dt h eL D Hr e l e a s eo ft h em y o c y t e ss u

53、 b j e c t e dt oh y p o x i aa n dr e o x y g e n a t i o n , w h i c hc o u l db ea b o l i s h e db yp r e t r e a t m e n tw i t hN A C ( 1m M ) o r5 - H D ( 1 0 0p M )3 T h er o l eo f m t r i co x i d es y n t h a s e ( N O S ) ，s o l u b l eg n a n y l y lc y c l a s e ( s G C ) a n dp r o t

54、e i nk i n a s eC ( P K C ) s i g n a l i n gi nt u m o rn e c r o s i sf a c t o r - 0 L ( T N F ) 一m d u c e dc a r d i o p r o t e c t i o na g a i n s th y p o x i a r e o x y g e n a t i o n ( w g ) i n j u r yT N F - o ( 1 0 0U 枷1s i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e dt h eb a n S O Da c t

55、i v i t ya n dd e c r e a s e dr e l e a s eo fL D Hf r o mv e n t r i c u l a rm y o c y t e s T h ec a r d i o p r o t e c t i o na g a i n s tH R 侧u r yw a si n d u c e db yt h ep r e t r e a t m e n tw i t hS N P ( 5 x m o l L ) o rL - A r g ( 5m m o l L ) ，w h i c hw a sb l o c k e db yO D Q9 浙

56、江大学硕士学位论文( 1 0 # m o l L ) ，t h es p e c i f i cs G Ci n h i b i t o r a n dC h e l ( 5 z m o l L ) ，t h es p e c i f i cP K Ci n h i b i t o r P r e t r e a t m e n tw i t 1L - N A M E ( t o o , u m o l L ) ，O D Q ，C h e l ，a n t o x i d a n t2 - M P G ( 4 0 0 # m o l L ) o rt y r o s i n ek i n a

57、s ei n h i b i t o rg e n i s t e i n ( 5 0 u m o l L ) r e s p e c t i v e l y ，a t t e n u a t e dt h ei n c r e a s e dM n S O Da c f i v i t ya n dr e d u c e dL D Hl e v e li n d u c e db yT N F - 0 【C o n c l u s i o n s ：( 1 ) T N F - ad e c r e a s e st h em y o c a r d i a lc o n t r a c t

58、i l i t yb y , a tl e a s tp a r t l y , i n h i b i t i n gt h ea c t i v i t yo fS Rc a 2 + - A T P a s e ( 2 ) T N F - ap r e t r e a t m e n ta t t e n u a t e dt h em y o c a r d i a li a j u r yi n d u c e db yi s c h e m i a r e p e r f u s i o no rh y p o x i a r e o x y g e n a t i o nv i a

59、r e a c t i V eo x y g e ns p e c i e sa n dm i t o e h o n d r i a lA T P s e n s i t i v ep o t a s s i u mc h a n n e l s ( 3 ) N i t r i co x i d ep l a yar o l ei nT N F m - i n d u c e dc a r d i o p r o t e e t i o n ，i nw h i c hp r o t e i nk i n a s eCa n ds o l u b l eg u a n y l y lc y c

60、 l a s ea r ei n v o l v e di nt h es i g n a lt r a n s d u c t i o np a t h w a yK e y w o r d s ：t u m o rF l e c r e s i sf a c t o r - A T P 酶和肌膜上的c a “A T P 酶、N a + K + - A T P 酶活性的影响，以探讨T N F - a 的心肌负性肌力作用机制。1 材料与方法l _ 1 药品和试剂T N F m 购自中国科学院上海生物工程研究中心t h a p s i g a r g i n ( T G ) 、A T P 、h

61、i s t i d i n e 、E D T A 均购自S i g m a 公司。A T P 酶、蛋白测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所。1 6浙江大学硕士学位论文1 2 实验方法1 2 1离体大鼠右心室乳头肌的制各及张力的测定选用雄性S p r a g u e - - D a w l c y ( s D ) 大鼠，体重2 4 0 2 7 0g ，由中科院上海实验动物中心提供。用木锤击昏大鼠，迅速取心脏，置于4 0 改良T y r o d e 液( m m 0 1 , ，L ：N a C l1 3 70 ，K C l3 0 ，M g C l 20 5 ，C a C l 22 5 ，N a H

62、 C 0 31 2 0 ，N a H 2 P 0 418 ，葡萄糖1 1 O ) 中除去血液，移入含T y r o d e 液的培养皿中，取出右心室乳头肌，置于容积为2 5m l 的有机玻璃槽内，用9 5 0 2 + 5 C 0 2 饱和的T y r o d e 液恒温( 3 6 a ：0 5 C ) 恒流灌流( 3m Y m i n ) p H73 7 4 。乳头肌一端固定，另一端用丝线连于张力传感器臂端。双极起搏刺激( 波宽1I l l s ，2H z 2 倍闽强度) 诱发收缩。乳头肌给予最适前负荷( 0 3 5 ：0 0 5g ) 。张力变化信号输入M e d L a b 系统自动显示和

63、记录分析各参数。1 2 2心室肌细胞分离用酶解法分离大鼠心室肌细胞。大鼠处死后，取出心脏，置于4 氧饱和T y r o d e液中洗净血液后固定于L a n g e n d o r f f 灌流装置上进行恒流灌流( 3 7 C ) ，流速1 0 m l m i n ，并阻9 5 0 2 + 5 0 0 2 饱和。先以无钙T y r o d e 液灌流5m i n ，再以含I 型胶原酶0 3 叽的无钙T y r o d e 液灌流1 0m i n 。无钙T y r o d e 液成分( m m o l L ) ：N a C l1 0 0 0 ，K C l1 0 0 ，K I t 2 P 0 41

64、 2 ，M g S 0 45 , 0 ，葡萄糖2 0 0 ，牛磺酸1 0 0 M O P S1 0 0 ( p H7 4 ) 。将心室肌剪碎，于含0 1 B S A 的无钙W y r o d e 液中3 7 C 孵育1 5m i n ，细胞悬液用2 0 0u m 的尼龙网过滤，滤液在无钙T y r o d e 液中逐步复钙至c a 2 + 浓度为l _ 2 5m m o l L 。获得的细胞在室温下静置I - 2 h 后备用。1 2 3细胞内游离钙的测定用细胞内双波长钙荧光系统( T I L L ，德国) 检测细胞内游离钙离子浓度。用钙指示剂f u r a - 2 A M ( 11 t m o

65、 l L ) 室温下负载3 0m i n ，负载后的细胞用含1 B S A 的K - H 液浙江大学硕士学位论文5 0 0r r a i n 离心去除负载液并洗涤3 次，细胞悬液( 1 0 0 山) 加在浴槽中静止片刻使细胞贴壁，以氧合K - H 液持续灌流。在灌流槽中施加频率为0 2I - I z ，强度为5 0v 的电场刺激诱导细胞兴奋。光信号通过工I L L 放大器经D i g i d a t a1 2 0 0 输入计算机。使用3 4 0n m 3 8 0n l n 的比值来反映细胞内钙离子浓度( C a 2 + 】，) ”。1 2 4离体大鼠心室肌细胞肌浆网制备取大鼠心脏，置于4 改良

66、K - H 液中除去血液，然后迅速转移、固定于L a n g e n d o r f f灌流装置，以改良K - H 液行恒流灌流( 8m l m i n ) 。改良K - H 液成分如下( m m o l L ) ：N a C I1 1 8 0 ，K C I4 7 ，K 2 P 0 412 ，M g S 0 41 2 ，N a H C 0 32 5 0 ，C a C l 21 2 5 ，葡萄糖1 0 0 ，p H7 4 ，以9 5 0 2 + 5 C 0 2 饱和，维持灌流液温度3 7 C 。剪下心室肌放入9 m l 预冷的匀浆介质( 5 0m r n o l L N a 2 H P 0 4

67、，1 0m m o l L N a 2 E D T A ，2 5m m o l L N a F ，p H7 4 ) 中尽快剪碎，用内切式组织匀浆器制成2 0 组织匀浆( 匀浆时间1 0s 次，间歇3 0s 连续3次，在冰水中进行) 。将匀浆以1 4 0 0 0g 离心2 0m m 两次后，取上清液再以4 5 0 0 0g 离心6 0m m ，弃上清，沉淀用预冷的贮存液( 3 0m m o l L h i s t i d i n e ，0 2 5m o l Ls u c r o s e ，1 0m m o l L E D T A ，1 0 m m o l L N a F ，p H7 4 ) 重悬

68、，所得即为提取的心肌细胞肌浆网，8 0存放待测( 1 1 ) 。1 2 5离体大鼠心室肌细胞膜的制备将上述方法中1 4 0 0 0g 离心2 0m m 后获得的沉淀加5m l 试剂I ( O 1m o l LS U C V O S C ，2m m o l LE D T A ，1m m o l Li m i d a z o l e ，p H6 8 ) 洗2 次( 每次均需以1 4 0 0 0g 离心2 0r a m ) ；离心后在沉淀物即一I i , 肌细胞膜中加入l On 1 1 试剂I I ( 1 3m o l La q u a e a r e ，1 2m m o V Li m i d a

69、z o l e - 2m m o l L E D T A ，0 1m m o l L M g C I 。6 H 2 0 ，7 6m m o l L ( N H 4 ) 2 S 0 4 ，p H7 4 )混匀后于0 * C 放置4 8 h ；将沉淀物混悬液以1 4 0 0 0 9 离心2 0 m i n ，然后再用试剂I I I ( 2 5m m o l L i m i d a z o l e ，1 2 5 m m o l L h i s t i d i n e ，1 3 # m o l L E D T A ，p H 6 8 ) 洗两次：最后将沉淀物即制备的心肌细胞膜悬于约l O “试剂中( 2

70、 5m m o l Li m i d a z o l e ，5 0m m o F Lh i s f i d i n e ，0 3 # r n o l LE D T A ，p H6 8 ) ，置0 。C 中保存，于4 8h 内测A T P 酶活性。浙江大学硕士学位论文1 2 6肌浆网和细胞膜c a 2 + - A T P 酶和N a + K - - A T P 酶活性测定c a 2 + - A T P 酶和N a + K + - A T P 酶活性均用无机磷比色法测定，根据试剂盒说明操作。c a A T P 酶和N a + K + _ A T P 酶活性单位用每小时每毫克蛋白分解A T P 产生

71、1 衄1 0 1 无机磷的量表示，即u n o lP i m g p r o t h o u r 。1 2 7蛋白含量测定肌浆网和细胞膜蛋白含量测定采用考马斯亮兰蛋白测定法。1 3 实验分组及给药方法本实验共分为四大组。A 组为离体大鼠右心室乳头肌组：A l 组为空白对照组( n = 8 ) ，在实验过程中始终用T y r o d e 液灌流乳头肌，稳定l h 后。分别记录灌流后第3 、5 、1 0 、2 0 和3 0m m 的乳头肌收缩力；A 2 组为2 0U m lT N F - C t 实验组( 月= 8 ) ：A 3 组为2 0 0U m lT N F 实验组( F8 ) 。该两组分别

72、用含有2 0U m l 或2 0 0 U m lT N F - 硼T y r o d e 液灌流，记录3 、5 和1 0r a i n的乳头肌收缩力，最后用T y r o d e 液洗脱2 0r a i n ，记录洗脱1 0m m 及2 0m i l l 时乳头肌的收缩力。B 组为酶解分离的大鼠单个一t L 室肌细胞实验组：B 1 组为空白对照组( n = 1 0 ) ，心肌细胞不作任何处理，连续观察3 0 m i n ；B 2 组为T N F - t x 组( H = 1 0 ) ，分别用各浓度的T N F - o t作用1 0m i n 后，观察电刺激诱导的细胞内钙瞬变幅度，1 N F 终

73、浓度分别为2 0 0 、5 0 0 、8 0 0 、1 0 0 0U h l 。C 组为离体大鼠心室肌细胞肌浆网组：c 1 组为空白对照组( n _ 1 2 ) ，肌浆网不作任何处理；c 2 组为T G 组( n ：6 ) ，用T G ( 终浓度分别为O 0 1 、O 1 、1 0 、1 0 0t z M ) 室温下孵育肌浆网5r a i n 后，检测肌浆网c a ”- A T P 酶活性：c 3 组为T N F q 组( n = 9 ) ，用T N F q 室温处理肌浆网2 0m i n 后，检测肌浆网c f + A 1 甲酶活性。T N F - c z 终浓度分1 9 浙江大学硕士学位论文

74、别为2 0 0 、5 0 0 、8 0 0 、1 0 0 0U m l ；C 4 组为c a 2 + 浓度组( H = 6 ) ，分别检测S RC a 2 + - A T P酶在C a 2 + 浓度为1 、2 5 、5 、1 0 、2 0 和4 0 “m o l L 时的活性；C 5 组为T N F c t + C a 2 一浓度组( n ：6 ) ，用T N F - ( 2 0 0U m 1 ) 室温处理肌浆网2 0m m 后，分别检测S R _ C a 2 + A T P酶在C a 2 + 浓度为1 、2 5 、5 、1 0 、2 0 和4 0p m o l L 时的活性；C 6 组为A

75、T P 组( n = 6 ) ，分别检测S R - C a “- A T P 酶在A T P 浓度为0 1 、0 2 、0 5 、1 0 ，2 0 和4 0m m o l L 时的活性：C 7 组为T N F - c t + A T P 组( H = 6 ) 用T N F - ( 2 0 0U m 1 ) 室温处理肌浆网2 0m i n 后分别检测s R - c a 2 + - A T P 酶在A T P 浓度为O 1 、0 2 、0 5 、1 0 、2 0 和4 0m m o l L 时的活性。D 组为离体大鼠心室肌细胞膜组：D l 组为空白对照组( n = 1 2 ) ，心室肌细胞膜不作任

76、何处理，检测其c a 2 + - A T P 酶和N a + K + A T P 酶活性：D 2 组为T N F q 组( n - 9 ) ，用T N F a x室温处理细胞膜2 0 m i n 后，检测肌浆网C a ”- A T P 酶和N a + K + - A T P 酶活性。T N F 旺终浓度分别为2 0 0 、5 0 0 、8 0 0 、1 0 0 0U m ! 。1 4 统计学处理所有数据均以x s 表示，采用t 检验、单因素方差分析和N e w m a n - K e u l s 法进行差异显著性检验P 0 0 5 表示有显著差异。2 结果2 1T N F - 口对心室乳头肌收

77、缩力的作用如图1 所示，T N F - a 灌流后使心室乳头肌收缩力减弱2 0U m l 和2 0 0U m lT N F - a灌流1 0 m i n 后，乳头肌收缩力分别减小到对照的9 1 和7 6 。用T y r o d e 液洗脱2 0 n u n后，乳头肌收缩力基本恢复到药物处理前水平。2 0 浙江大学硕士学位论文 I N F 吨W A S H O U Tr 广1焉I。1 02 03 0 ( m i n )P e r u s i o nt i m e一c o n t r o IT N F a ( 2 0u ，m 1 )一T N F - a ( 2 0 0U ，m I )圈1 r N

78、F - c t 对离体大鼠一1 5 室乳头肌收缩力的影响( 萨8 )F i g1 T h ee f f e c to ft u m o rn e c r o s i sf a c t o r - c t ( T N F - a ) O nd e v e l o p e dt e n s i o no f i s o l a t e dr a tp a p i l l a r ym u s c l e s 即= 8 )4 p 0 0 1 ，”p 0 0 5 ，n = 1 0 ) 。各浓度的T N F d 作用1 0m m 后，电刺激诱导的细胞内钙瞬变幅度都没有明显影响( P o 0 5 ，n =

79、 1 0 ) 。2 3T N F - u 对心室肌肌浆网C a Z + A T P 酶活性的影响对照组C a 2 _ A I P 酶活性为6 0 1 ：L - 0 4 4 # t o o lP i m gp r o t h o u r ，与文献报道水平一致”。检测C a 2 + - A T P 酶对各浓度T G ( 肌浆阿C a 2 + - A T P 酶抑制剂) 的反应性，发现T G 对c a 2 + - A T P 酶活性有浓度依赖性的抑制作用( 图2 ) ，表明所得到的肌浆网c a 2 + - A T P 酶活2 l一毋一coIsco_口ocfoJ。o浙江大学硕士学位论文性良好。图3 结

80、果表明，各浓度的T N F - 分别处理2 0r n i n 后，肌浆网c a ”A T P 酶活性明显被抑制，随T N F m 浓度升高，酶活性分别为4 7 9 - J ：0 5 7 、4 8 1 I - - 0 6 7 、51 2 ：- 0 3 9 、4 ，8 7 + 0 5 5# m o lP i m gp r o t h o u r ，平均抑制率达到2 0 。00 0 10 111 0C o n c e n t r a t i o no rT G ( 舢图2 T G 对大鼠心室肌肌浆网C a 2 A T P 酶活性的影响( n = 6 )F i g2C a 2 + A T P a s

81、ea c t i v i t yi nm y o c a x d i a lS Rt r e a t e dw i t hd i f f e r e n td o s e so fT G ( n = 6 ，S Rf r o m1 2r a t s ，r e s p e c t i v e l y )”p 00 1WC O i l C e s t t F a l i o l l0f O l l e - w a yA N O V A )2 2 浙江大学硕士学位论文j 上：| 薹毒蠹皇岳志- 5U 皇02 0 05 0 08 0 01 0 0 0C o n c e n t r a t i o no

82、fT N F a ( U m 1 )图3 T N F - d 对大鼠心室肌肌浆网C a 2 + - A T P 酶活性的影响( H = 9 ，S Rf r o m1 2r a t s r e s p e c t i v e l y )F i g3E f f e c to f T N F - dO i lt h ea c t i v i t yo f r a tm y o c a r d i a lS RC a ”- A T P a s e ( H = 9 )”p 00 1 c o n c e n t r a t i o n0r o n e - w a yA N O V A )2 4T N F

83、“对心室肌肌浆网C a 2 + _ A T P 酶的c a 2 + 反应特性的影响图4 结果表明，心室肌肌浆网C a 2 + _ A T P 酶对底物中不同水平c a 2 + 的反应性与c a 2 +浓度呈正相关当c a 2 + 浓度为4 0u M 时，C a 2 + A T p 酶活性为1 u m o l LC a 2 + 底物水平时的2 3 6 ( p o 0 1 ) ：而经过T N F 口( 2 0 0U n i l ) 处理后，肌浆网c a 2 + - A T P 酶对底物中不同水平c a ”的正相关反应性消失( p 0 0 1 ) 。2 3 浙江大学硕士学位论文12 551 02 0

84、4 0 “M )C o n c e n 把a l i o no fC a 2 +oC o n t o lT 阡( 2 0 0U m 1 )图4 T N F - d 对大鼠心室肌肌浆网c 一A T P 酶的c a 2 + 反应特性的影响( 萨6 ，S Rf r o m1 2r a t s ，r e s p e e u v e l y )F i g4 n ed o s e _ r e s p o n s ec u r v eo fS RC a 2 + A T P a s ea c t i v i t yt of r e ec a 2 + c o n c e n i o n si nt h ea b

85、 s e n c e o r p r e s e n c e o f T N F - d ( 2 0 0 u m 1 ) O = 6 )+ p o 0 5 ，”p 0 叭 c o n t r o l ( S t u d e n tt - t e s t )2 5T N F 一“对心室肌肌浆网C a 2 + A T P 酶的A T P 反应特性的影响如图5 所示，心室肌肌浆网C a 2 + - A T P 酶对底物中不同水平A T P 的反应性与A T P 水平呈正相关，当底物中A T P 浓度为O 1 和4 0m m o l L 时，c a 2 + - A T P酶活性分别为5 4 5 ：q

86、3 4 1 和1 6 9 4 a ：1 0 6p m o lP i m gp r o f f h o u r ( p o 0 1 ) ；而经过T N F - a ( 2 0 0U m 1 ) 处理后，肌浆网C a 2 + _ A T P 酶对底物中不同水平A T P 的正相关反应性降低( 口 o 0 5 ) 。2 4 一一巳luo=o享一鲁言o，Bo浙江大学硕士学位论文012345C o n c e n t r a t i o no fA T P ( m M )oC o n t r o lT N F d ( 2 0 0L E m l )图5 T N F - c f 对太鼠心室肌肌浆网C a 2

87、 + A T P 酶的A T P 反应特性的影响( n = 6 ，S R f r o mI2r a t s ，r e s p e c t i v e l y )F i g5 r h cd e p e n d e n c eo f C a Z + - A T P a s ca c t i v i t y i nr a th e a r tS R O n A T Pc o n c e n t r a t i o n s i n t h ea b s e n c eo rp r e s e n c eo f T N F d ( 2 0 0 U m 1 ) S Rv e h i c l e sw e

88、r ei n c u b a t e di n0 E ta s s a ym e d i u mw h o s eA T Pc o n c c n 嘣i o nv a r i e db c t w c e n01a n d4r a M ( t l = 6 )+ p o 0 5 ) 。2 5 竺加幅仲5o上u 一旦o J doE!正石E3喜!芑m们口乱_I_v上7o浙扛大学硕士学位论文表】T N F - a 对心肌细胞膜C a 2 + A T P 酶和N r 小+ A T P 酶活性的作用T a b1T h ea c t i v i t i e so fC a 2 A T P a s ea n

89、dN a + K + - A T P a s eo fm y o c a r d i a lp l a s m am e m b r a n et r e a t e dw i t hd i f f e r e n td o s e so f T N F - nO l a s m af r o m1 2r a t s ，r e s p e c t i v e l y )O n e w a yA N O V A3 讨论本研究表明，T N F - a 使离体大鼠心室乳头肌产生负性肌力作用，并且可在一定时问内被完全洗脱，这与以往的报道一致。T N F - a 处理对心肌细胞钙瞬态变化幅度无显著影响，

90、但是抑制心肌肌浆网C a 2 + - A T P 酶。本研究结果表明，T N F - c E 的负性肌力作用可能部分是通过抑制心肌肌浆网C a 2 + - A T P 酶的活性实现的。细胞内钙稳态调节是影响心肌正常兴奋一收缩耦连功能的最重要因素。肌浆网又通过调节胞浆游离c a ”浓度在心肌舒缩活动中起关键性调控作用”) 。其中，胞浆c a 2 + 回复到静息水平主要是通过肌浆网c a 2 十- A T P 酶的钙离子回摄取和肌膜上N a + C 一交换体的钙离子外排。C a a + _ A T P 酶是S R _ 中含量最丰富的蛋白，约占S R 蛋白的7 0 9 0 ，是调节钙稳态的最重要物质

91、，心肌细胞舒张期胞浆内c a 2 + 浓度下降的7 0 7 5 通过它将c a 2 + 泵入s R 内而完成( “) 。而细胞内低浓度c a ”的维持又是细胞行使正常生理功能的关键。S E R C A 活性的降低，引起S R 重摄取C a ”功能的下降，从而延缓心肌细胞舒张期c a ”的回复，导致心肌舒张功能的异常，同时影响S R 内C a “的储备量”) 。由于s R 释放c a 2 + 是受其c a 2 + 储备量影响的，c a ”含量减少引起s R 释放c a 2 + 功能障碍，进一步影响心肌细胞的收缩功能( “ 。因此S E R C A 活性的降低将直接导致心肌细胞收缩与舒张2 6 浙

92、江大学硕士学位论文功能障碍。本研究发现T N F d 有抑制心肌细胞肌浆网c a ”A T P 酶活性的作用，提示T N F - e t 的负性肌力作用可能部分是通过抑制肌浆网的功能而实现的。此外本研究观察了在不同的底物缓冲液A T P 和钙离子浓度时，T N F “对S R - C a “- A T P 酶活性的影响，结果显示T N F d 处理后抑制了S R - C a 2 + _ A T P 酶对A T P 和钙离子的反应特性，进一步确实了T N F 对S R C a 2 + - A T P 酶的影响。虽然心肌细胞舒张期胞浆内大部分c a 2 + 泵入S R 内，但为了维持胞浆和细胞器C

93、 a 2 +浓度稳定，在动作电位期间由细胞外内流的C a 2 + 必须被泵出细胞，其中部分就是通过肌膜上的c a 2 + - A T P 酶完成的”。c a 2 + 外流的减少促进钙超载的发生和发展，导致心肌舒缩功能障碍。此外肌膜上的N a + K + - A T P 酶具有保持细胞膜I 彤 1 - 畔a 和t K + l 的跨膜梯度的作用，【N a + 的跨膜梯度也是C a 2 + 通过N a + C a 2 + 交换体排出胞外的动力1 ；N a + K + A T P酶的活性被抑制时，细胞内c a 2 + 浓度将升高进而会影响细胞的收缩能力。本文研究结果发现T N F - d 对肌膜上的c

94、 a 2 + 筒口酶和N a + 压0 A T P 酶活性无明显抑制作用，进一步提示T N F m 可能通过影响肌浆网C a z + - A T P 酶而影响心肌细胞的钙处理能力，从而产生负性肌力作用。值得指出的是，T N F o o ! 处理对心肌细胞钙瞬态变化幅度无抑制作用的实验结果与前人的报道不同”) 。本研究结果提示，T N F a 的负性肌力作用除了与其抑制肌浆网c f + - A T P 酶活性外，可能还存在其他机制，如对收缩机构的钙敏感性和肌凝蛋白A T P酶活性的影响等。总之，本研究结果提示，T N F - a 对大鼠心肌的负性肌力作用可能部分与其使肌浆网c f + A r P

95、 酶活性下降相关，而与膜上的c a 2 + - A T P 酶和N r 依+ A T P 酶活性无关。关于T N F 对收缩机构的钙敏感一肚和肌凝蛋白A T P 酶活性的作用有待进一步的研究。2 7 堑垩查堂堡主兰些堡苎参考文献 1 A I T a gM ，H o c h eA ，B o h l eRE c k e r tP ，f a c t o r - a l p h ai nm a c r o p h a g e so fh e a r t , l i v e rT i s s u eR e s1 9 9 6 ；2 8 5 ( 1 ) ：3 9 - 4 9R i e d e lW ，S c

96、 h a p e rJ T u m o rn e c r o s i sk i d n e y , a n di nt h ep i t u i t a r yg l a n d C e l l 2 】K a p a d i aS ，L e eJ ，T o e A m i o n eG ，B i r d s a l lH H ，M aT S ，M a n nD L T u m o rn e c r o s i sf a c t o r - a l p h ag e n ea n dp r o t e i ne x p r e s s i o ni na d u l tf e l i n em

97、y o c a r d i u ma l t e re n d o t o x i na d m i n i s t r a t i o n JC l i nI n v e s t1 9 9 5 ；9 6 ( 2 ) ：1 0 4 2 1 0 5 2 【3 L e v i n eB ，K a l m a nJ ，M a y e rL ，F i l l i tH M ，P a c k e rM E l e v a t e dc i r c u l a t m gl e v e l so ft t l m o rn e c r o s i sf a c t o r i ns e v e r ec

98、h r o n i ch e a r tf a i l u r e NE n g lJM e d1 9 9 0 ；3 2 3 ( 4 ) ：2 3 6 2 4 1 4 】G f f o kB P ，H u r t o nJ W ，W h i t eD J ，M c I n t y r cK L ，L i nC Q I n h i b i t i o no ft u m o rn e c r o s i sf a c t o r p r e v e n t sm y o c a r d i a ld y s f u n c t i o nd u r i n g b u r ns h o c k

99、A m IP h y s i o l1 9 9 4 ；2 6 7 ( 1P t2 ) ：H 11 8 - H 1 2 4 【5 5R e t t e rA S ，F t i s h m a nW H T h er o l eo ft u m o rn e c r o s i sf a c t o ri nc a r d i a cd i s e a s e H e a r tD i s2 0 0 1 ；3 ( 5 ) ：31 9 3 2 5 6 】M e l d n m aD R T u m o rn e c r o s i sf a c t o ri nt h eh e a r t A mJ

100、P h y s i o l1 9 9 8 ；2 7 4 ( 3P t2 ) ：R 5 7 7 - R 5 9 5 1 7 M o o r e nF C ，K i l 】I r l eR K C e l l u l a rc a l c i u mi nh e a l t ha n dd i s e a s e B i o c h i mB i o p h y sA c t a1 9 9 8 ；1 4 0 6 ( 2 ) ：1 2 7 1 5 1 8 】C a r a f o l iE T h eC a 2 + p u m po ft h ep l a s m am e m b r a n e

101、JB i o lC h e m1 9 9 2 ；2 6 7 ( 4 ) ：2 11 5 2 11 8 【9 9F a r m e rB B ，M a n c i n aM ，W i l l i a m sE S ，W a t a n a b eA M I s o l a t i o no fc a l c i u mt o l e r a n tm y o c y t e sf r o ma d u l tr a th e a r t s ：r e v i e wo ft h el i t e r a t u r ea n dd e s c r i p t i o no fam e t h o

102、 d L i f eS c i1 9 8 3 ；3 3 ( 1 ) ：1 18 1 0 V e n t u r aC ，C a p o g r o s s iM C ，S p u r g e o nH A ，L a k a t t aE G K a p p a - o p i o i dp e p t i d er e c e p t o rs t i m u l a t i o ni n c r e a s e sc y t o s o l i cp Ha n dm y o f i l a m e n tr e s p o n s i v e n e s st oC a 2 + i nc a

103、 r d i a cm y o c y t e s A m J P h y s i o l l 9 9 1 ；2 6 1 ( 5P t2 ) ：H 1 6 7 1 一H 1 6 7 4 2 8 浙江大学硕士学位论文 1 1 P a n d eM ，C a m e r o n3 A ，V i gP J ，D e s a i a hD P h e n c y c l i d i n eb l o c ko f C a 2 + A T P a s ei nr a th e a r ts a r c o p l a s m i cr e t i c o l u m T o x i c o l o g

104、y1 9 9 8 ；1 2 9 ( 2 - 3 ) ：9 5 1 0 2 1 2 Y o k o y a m aT ，V a e aL ，R o s s e nR D ，D u r a n t cW ，H a z a r i k aP ，M a n nD L C e l l u l a rb a s i sf o rt h en e g a t i v ei n o a o p i ce f f e c t so ft u m o rn e c r o s i sf a c t o r - a l p h ai nt h ea d u l tm a m m a l i a nh e a r t

105、 JC l i nI n v e s t1 9 9 3 ；9 2 ( 5 ) ：2 3 0 3 - 2 3 1 2 1 3 】L e v i t s k yD ，d el aB D ，S c h w a r t zK ，L o m p r eA M C a ( 2 + ) - A T P a s ea n df u n c t i o no fs a r c o p l a s m i cr e t i c u l u md u r i n gc a r d i a ch y p e r t r o p h y A mJP h y s i o l1 9 9 1 ；2 6 1 ( 4S u p

106、p l ) ：2 3 2 6 1 4 B e t sD M ，B a s s a n iJ W ，B a s s a n iR A C o m p e t i t i o na n dr e d i s t r i b u t i o na m o n gc a l c i u mt r a n s p o r ts y s t e m si nr a b b i tc a r d i a cm y o e y t e s C a r d i o v a s eR e s1 9 9 3 ；2 7 ( 1 0 ) ：1 7 7 2 - 1 7 7 7 1 5 M e l d r u mD R C

107、 l e v e l a n dJ C ，J r ，S h e r i d a nB C ，R o w l a n dR T ，B a n e r j e eA ，H a r k e nA H C a r d i a cs u r g i c a li m p l i c a t i o n so fc a l c i u md y s h o m e o s t a s i si nt h eh e a r t A n nT h o m cS u r g1 9 9 6 ；6 1 ( 4 ) ：1 2 7 3 1 2 8 0 1 6 L o m p r eA M ，A n g e rM ，L

108、e v i t s k yD S a r c o ( e n d o ) p l a s m i cr e t i c u l u mc a l c i u mp u m p si nt h ec a r d i o v a s c u l a rs y s t e m ：f u n c t i o na n dg e n ee x p r e s s i o n JM o lC e l lC a r d i o l1 9 9 4 ；2 6 ( 9 ) ：1 1 0 9 1 1 2 1 17 “Z P ，B u r k eE P ，F r a n kJ S ，B e n n e t tV ，P

109、 h i l i p s o nK DT h ec a r d i a cN a + - C a 2 + e x c h a n g e rb i n d st ot h ee y t o s k e l e t a lp r o t e i na n t w r m JB i o lC h e m1 9 9 3 ；2 6 8 ( t 6 ) ：I1 4 8 9 11 4 9 1 【1 8 】K r o w nK A ，Y a s u iK ，B m o k e rM Je ta 1 T N Fa l p h ar e c e p t o re x p r e s s i o ni nr a

110、tc a r d i a cm y o c y t e s ：T N Fa l p h ai n h i b i t i o no f L - t y p eC a 2 + c u r r e n ta n dC a 2 + t r a n s i e n t s F E B SL e t t19 9 5 ；3 7 6 ( 1 2 ) ：2 4 - 3 0 2 9 浙江大学硕士学位论文二、T N F - a 对缺血复灌心肌的作用及其可能机制背景近年来研究发现，肿瘤坏死因子口( t u m o rn e c r o s i sf a c t o rd ，T N F ) 不仅参与细胞免疫反应调节，

111、而且具有抑制缺血再灌注或缺氧复氧损伤的心脏保护作用。E d d y 和N a k a n o 分别在离体灌流心脏和培养的心肌细胞模型上证明1 翔，T N F 预处理可减轻缺血再灌注或缺氧复氧引起的心肌损伤，其作用机制是通过诱导锰超氧化物歧化酶( m a n g a n o u ss u p e m x i d ed i s r n u t a s e ，M n - S O D ) 的表达及活性提高邶。M n S O D 存在于线粒体的基质中，是线粒体内主要的氧自由基清除剂。但是，T N F d 究竟是通过哪些信号转导通路诱导M n - S O D 表达及活性提高而起到心肌保护作用，尚未见到相关

112、的报道。研究发现T N F - t x 与其受体T R 5 5 结合后，除了诱导M n 。S O D 表达之外，还促发包括产生活性氧( r e a c t i v eo x y g e ns p e c i e s ，R O S ) 在内的多种信号级联反应( “”。R O S 作为胞内信号分子参与激活缺氧预处理的心肌保护作用( ，线粒体呼吸链是R O S 产生的主要来源，抗氧化剂N A C 等可以阻断R O S 诱导的预处理保护作用” 。以往的实验也证明R O S 作为第二信使参与阿片类物质、乙酰胆碱对缺氧复氧损伤心肌的保护作用( “) 。此外，近年来研究发现心肌细胞线粒体内膜上的A T P

113、敏感型钾通道( m i t o c h o n d r i a lA T P s e n s i t i v ep o t a s s i u mc h a n n e l ，m i t O K A T Pc h a n n e l ) 开放剂能模拟缺氧预处理，而m i t o K a r P通道阻断剂对此有抑制作用1 “。F o r b e r 等观察到心肌细胞m i t O K A T P 开放后，R O S 合成增多“，并参与阿片类物质引起的心肌保护作用1 ”，提示细胞内R O S 的产生与m i t O K A T ，有关。因此，本文在离体大鼠心脏缺血再灌注和培养的大鼠心室肌细胞缺氧复

114、氧损伤模型上，研究R O S 和m i t O K A T P 通道是否介导T N F a 预处理诱导的心肌保护作用。在心肌中，T N F - a 与一氧化氮( N i t r i cO x i d e ，N O ) 有着密切关系。研究己证明T N F a抑制心肌收缩的负性肌力作用是通过促进心肌细胞中诱导型一氧化氨合酶( i n d u c i b l eN Os y n t h a s e ，i N O S ) m R N A 表达和N O 合成增多而介导的( ”胛，并且其作用可被特异性3 0 浙江大学硕士学位论文一氧化氯台酶( N O S ) 抑制剂N 6 - n i t r o L -

115、a r g m i n em e t h y le s t e r ( L - N A M E ) 所阻断。而N O 是一种重要的缺氧预处理保护园子，缺氧前给予N O 前体L - A r g ( 18 ；1 9 】、N O 供体o o ，2 1 或N O 预处理都能减轻心肌缺氧复氧损伤，而且缺血预处理过程中心肌i N O S 表达上调。此外，N O 还参与阿片类物质、乙酰胆碱、腺苷抵抗心肌缺氧复氧损伤的保护作用, 2 3 - 2 5 】。但N O 是否参与T N F - d 的心肌保护作用还不清楚。因此我们分别以离体灌流心脏和培养的乳鼠心肌细胞为研究对象，探讨N O 在T N F a 对缺氧复

116、氧心肌保护中的作用及其下游的信号转导途径。1 材料与方法1 1 试剂D i a z o x i d e 、5 - h y d r o x y d e c a n o a t e ( 5 - H D ) 、g l i b e n c l a m i d e ( G 1 i b ) 、N - a c e t y l c y s t e i n e ( N A C ) 、a n t i r n y c i n A ( 舢旧、2 - m e r c a p t o p m p i o n y lg l y c i n e ( 2 - M P G ) 、S o d i u mn i t r o f e

117、m c y a n i d e ( S N P ) 、N w - n i l i o L - a r g i n i n em e t h y le s t e r( L - N A M E )、G e n i s t e i n、1 H 一【l ，2 A o x a d i a z o l o 4 ，3 - a q u i n o x a l i n - 1 - o n e ( O D Q )、1 , 2 - D i m e t h o x y - N - m e t h y l ( 1 ，3 ) b e n z o d i o x o l o ( 5 ，6 - c ) p h e n a

118、n t h r i d i n i u mc M o r i d e ( c h e l e r y t h f i n ec h l o r i d e ，C h e l ) 均为S i g m a 公司产品。L - A r g i n i n e ( L - A r g ) 由A m e r s h a m 公司出品。D M E M培养液( 高糖及无糖) 购自G i b c o 公司。胎牛血清为杭州四季青生物工程材料有限公司生产。D i e t h y l d i t h i o c a r b a r m ca c i d D C ) 由A L E X I S 公司生产。乳酸脱氢酶( 1

119、 a c t a t ed e h y d r o g e n a s e ，L D H ) 、锰超氧化物歧化酶( m a n g m l o u ss u p e r o x i d ed i s n m t a s e ，M n - S O D )和蛋白测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所。T N F - a 由中国科学院上海生物工程研究中心研制。1 2 实验方法1 2 1 离体心脏g d o 坩灌流和左室功能评价浙江大学硕士学位论文雄性S p r a g u e - D a w l e y 大鼠( 体重2 4 0 3 0 0 9 ) 用木锤击昏后，开胸迅速取出心脏，置于4 C 改良K r

120、 e b s H e n s e l e i t ( K - H ) 液中除去血液，然后迅速转移、固定于L a n g e n d o r f f灌流装置，以改良K 。H 液行常规恒压灌流( 7 6 m m H g ) 。改良K - H 液成分如下( m m o l L ) ：N a C I1 1 8 0 ，K C l4 7 ，K 2 P 0 41 2 ，M g S 0 41 2 ，N a H C 0 32 50 ，e a C h1 2 5 ，葡萄糖1 0 0g ，p H7 - 3 7 4 ，以9 5 0 2 + 5 C 0 2 饱和维持灌流滚温度3 7 C 。各组心脏均稳定2 0r n i

121、n后进行实验处理。切开左心耳，将充满水的乳胶囊从左心房插入至左心室，乳胶囊与压力传感器相连，将水注入乳胶囊使左心室舒张末压维持于2 - 7 m m H g 通过M e d L a b 生物信号采集处理系统记录左室内压曲线，并计算左心室发展压( 1 e f tv e n t r i c u l a rd e v e l o p e dp r e s s u r e L V D P ) 、左心室舒张末压( 1 e f tv e n t r i c u l a re n d d i a s t o l i cp r e s s u r e ，L V E D P ) 、心率( h e a r tr a

122、 t e ，H R ) 、最大收缩舒张速率( m a x i m a lr i s e f a l lr a t eo fl e f tv e n t r i c u l a rp r e s s u r e ，d P d t m a x ) a1 2 2 缺血复灌处理方法本实验采用全心停灌的处理方法，以停止灌流2 0m i n ，复灌2 0m i n 作为缺血复灌过程。1 2 3 灌流心脏流出液L D H 和线粒体M n S O D 活性的分析在各时点记录冠脉流量，同时收集冠脉流出液，利用分光光度法测定L D H 的活性。实验结束后取下心脏称重，置于2 0 冰箱保存，集中提取线粒体检测M n

123、 S O D 活性。测定时取心室肌组织加入冰冷的匀浆介质( o0 1 m o l Ls u c r o s e ，O 0 1m o l L T r i s H C I ，0 1m m o l L E D T A 0 2 N a ，口H7 4 ) ，用组织匀浆机制成1 0 匀浆毗2 0 0 0r r a i n 离心1 0m m ，取上清液再以1 0 0 0 0r r a i n 离心1 5r a i n ，沉淀物为线粒体。将分离的线粒体用冰冷的匀浆介质制各成混悬液，用超声波发生仪，5 秒次，间隙1 0 秒反复3 5 次，使线粒体破碎，4 保存，供酶活力测定。测定时按3 2 浙江大学硕士学位论文

124、照试剂盒提供的方法进行，咀黄嘌呤氧化酶法测定M n S O D 活力”。蛋白质用考马斯亮蓝法定量。1 2 4 乳鼠心肌细胞培养取生后1 2 d 的S p m g u c - D a w l e y 大鼠心室肌，剪成1 m m 3 大小后r 用O 1 胰蛋白酶溶液( 3 7 C ) 消化1 0m i n ，收集心肌细胞悬液，并用8m l 含1 5 胎牛血清的D M E MC 高糖) 培养液中和胰酶作用。重复消化收集8 1 0 次，直到心肌组织完全解离，以1 2 0 0r p m 离心6m i n ，所得的沉淀用1 0m lD M E M ( 1 5 胎牛血清) 重悬；然后置于二氧化碳培养箱( 9

125、 5 空气+ 5 C 0 2 ，3 7 C ) 中预培养，1h 后悬浮的心肌细胞用2 0 0 目不锈钢网过滤，将细胞密度调整到2 l0 5 个m l ，分装于2 4 孔板中培养。细胞培养至4 5 天，细胞单层贴壁，互相融合，同簇细胞发生同步搏动，每分钟搏动次数达到1 8 0 次h n i n 以上，可用于实验。缺氧前1 5h ，换为无血清D M E M 培养液培养。1 2 5 缺荤【，复氧模型吸去2 4 孔板中的细胞培养液换9 5 N 2 + 5 c 0 2 混合气体饱和的无糖D M E M培养液，置于缺氧罐中( 用9 5 N 2 + 5 C 0 2 混合气体饱和，3 7 ，0 2 1 ) ；

126、缺氧培养1 2h 后，取出培养板，放回5 二氧化碳培养箱继续培养6h ，作为复氧处理。1 2 6 培养心肌细胞L D H 和M n S O D 活性的测定分别于缺氧处理前和复氧6h 两个时点取上清培养液5 0 儿1 ，利用分光光度法测定L D H 活性。复氧6h 后将心肌细胞超声粉碎制成细胞悬液，采用黄嘌呤氧化酶法测定M n - S O D 的活性。1 3 实验分组第一部分：观察T N Fa 预处理对缺血再灌注心脏收缩功能和酶学指标的影响及其可能作用机制。3 3 浙江大学硕士学位论文实验方案见图1 。分组情况如下：A 组为正常对照组，K - H 液持续灌流8 5m i n ：B组为缺血再灌注(

127、 i s c h e m i a r e p e r f u s i o n ，豫) 对照组，K - H 液灌流4 5m m 后，再依次进行停灌2 0m i n 和K - H 液复灌2 0r a i n 作为缺血复灌处理；C 组为T N F - c z 组：用T N F o o t( 1 0U m 1 ) 灌流1 0m i n ，然后缺血复灌处理；D 组、E 组、F 组分别为2 - M P G + T N F - c 、L - N A M E + T N F - a 和5 - H D + T N F - d 组，T N F - a ( 1 0 U m 1 ) 处理前，2 - M P G ( 0

128、 3m M ) 、L - N A M E ( 0 5m M ) 或5 - H D ( 1 0 0 , a M ) 分别灌流5m i n ，再行缺血复灌。单独使用T N F - a 、2 - M P G 、L - N A M E 和5 - H D 对正常细胞L D H 和M n S O D 在实验观察时间内无明显影响；并且与单纯I R 组相比，2 - M P G 、L - N A M E 或5 - H D 灌注后进行I R 处理后的心脏功能及酶学指标无显著性差异。3 4 堑垩查兰婴主兰堡堡茎C o n t r o lT N F a2 M P G + T N F 咄L _ N A M E + 1

129、1 师一D5 H D + T N F aE q u i l i b r i u mK Hs o l u t i o nl M f u s i o nI s c h e r t n aR e p e r f u s i o n1 N F oM e a s u r e m e n t+ +02 03 03 54 56 58 5T h n e ( m i n )图I离体灌流心脏皖血，复灌实验方案示意圈F i gIE x p e r i m e n t a lp r o t o c o l sf o ri s o l a t e dp e r f u s o dh e a r ts u f f e r

130、 i n gf r o mI R3 5塑垩查堂堡圭兰篁堡苎第二部分：研究活性氧和线粒体A T P 敏感钾通道是否参与介导T N F 对缺氧复氧心肌的保护作用。实验方案见图2 。分组情况如下：对照组：心肌细胞不作缺氧复氧处理；缺氧复氧( I - I R ) 组：心肌细胞无血清D M E M 培养1 5h 后，再进行缺氧1 2h 和复氧6 h 处理；T N F a 组：心肌细胞孵育3h 后，加入T N F - c ( 1 0 ，5 0 ，1 0 0 ，5 0 0 U m 1 ) 1 2h 后，再进行缺氧1 2 h 及复氧6 h 处理；抗氧化剂N A C ( 1m M ) 、a n t i m y

131、c i n A ( 5 0 p M ) 、2 - M P G ( 4 0 0 “M ) 和C u Z n S O D抑制剂D D C ( 1 0 0r i M ) 以及r n i t 0 K m 通道阻断剂5 - H I ) ( 1 0 0 “M ) 、胞膜K A T p 通道阻断剂G l i b ( 1 0t i M ) 预处理对价4 F d ( 1 0 0U m 1 ) 作用影响各组及m i t o K g ，通道开放剂d i a z o x i d e 组的方案见图2 。单独使用T N F - c t ( 1 0 ，5 0 ，1 0 0 ，5 0 0 U r n l ) 、N A C (

132、 1m M ) 、a n t i m y c i n A ( 5 0 “M )和2 - M P G ( 4 0 0c M ) 、5 - H D ( 1 0 0p M ) 、G l m ( 1 0 卢M ) 、D D C ( 1 0 0 n M ) 和d i a z o x i d e( 5 0 “M ) 对正常细胞L D H 和M n - S O D 在实验观察时间内无明显影响。3 6 浙江大学硕士学位论文D M E MH y p o x i aR e o x y g e n a t i o n 二二二 二二二二二二了 二二二】皿皿圃皿皿皿皿D M E MT N F - d 二二二暖蠢疆墨蕊雹

133、田H y p o x i aR e n x y g e n a t i o nl k o x y g e n a d o n叮衄皿皿皿呵珂皿D M E MD i a z o x i d e 二二二圜H y p o x i aR e n x y g e n a t i o n031 52 73 3 图2 培养心肌细胞缺氧复氧实验方案示意图F i g2E x p e r i m e n t a lp r o t o c o l sf o rc u l t u r e dm y o c y t e ss u f f e r i n gf r o mH RA ：T h em y o e y t e s

134、w e r ei n c u b a t e dw i t hD M E Mf o r3 3hB ：T h em y o o y t e sW e l T ei n c u b a t e dw i t hD M E Mf o r1 5hf o l l o w e db y1 2ho f h y p o x i aa n d6ho f r e n x y g e n a t i o n C ：T h em y o c y t e sw e ei n c u b a t e dw i t hD M E Mf o r3h t h e nT N F - w a sa d d e d ( f i n

135、a lc o n c e n t r a t i o n ：1 0 ，5 0 ，1 0 0a n d5 0 0U M ) f o r1 2hp r i o rt oh y p o x i aa n dr e o x y g e n a t i o n D ：T h em y o c y t e sw e mt r e a t e dw i t hN A C ( 1m M ) o ra n t i m y c i nA ( 5 0p h 0o r2 - M P G( 4 0 0 删) o r D D C ( 1 0 0 r i M ) o r5 - H D ( 1 0 0 脚) o r G l

136、i b ( 1 0 Z M ) f o r l 5h f o l l o w e d b y l 2 ho f h y p o x i aa n d6ho f r e o x y g e n a t i o n ，r e s p e c t i v e l y E ：P r e t r e n t m e n tw i t hN A C ( 1m M ) o ra n t i m y e i nA ( 5 0 t M ) o r2 - M P G ( 4 0 0g M ) o fD D C ( 1 0 0n t M ) o r5 - H D ( 1 0 0z M ) o rG l i b (

137、1 0 1 d V l ) f o r3h ，r e s p e c t i v e l y , t h e nT N F - c tw a d d e dr 1 0 0U m 1 ) a n de o - i n c u b a t e df o r1 2hp r i o rt oh y p o x i aa n dr e o x y g e n a t i o n F ：T h em y o c y t e sw e r ci n c u b a t e dw i t hD M E Mf o r3h ，t h e nd i a z o x i d e ( 5 0t a r t ) w a

138、sa d d e df o r1 2hp r i o rt oh ) r p o x i aa n dr e o x y g e n a f i o nG ：P r e t r e a t m e n 1w i t hN A C ( 1r a M ) o T5 - H D0 0 0p M ) f o r3h ，r e s p e c t i v e l y , t h e nd i a z o x i d e ( 5 0z M 、W a Sa d d e da n dc o - i n c u b a t e df o r1 2hp r i o rt oH R3 7 浙江大学硕士学位论文第三部

139、分：探讨一氧化氨在T N F - c t 对缺氧复氧心肌保护中的作用。实验分组情况如下：A 组( 正常对照组) ：心肌细胞不作缺氧复氧处理；B 组为缺氧复氧( 豫) 组：心肌细胞无血清D M E M 培养1 5h 后，再进行缺氧1 2h 和复氧6 h 处理；C 组( T N F d 组) ：心肌细胞孵育3 h 后，加入T N F 0 1 ( 1 0 0 U m 1 ) 1 2 h 后，再进行缺氧1 2h 及复氧6 h 处理：D 组为N O 组。D 1 组( S N P 组) ：S N P ( 5 # m o l L ) 孵育心肌细胞1 2h 后，进行H R 处理；D 2 组( L - A m

140、组) ：L - A r g ( 5m m o l L ) 孵育心肌细胞1 2h 后，进行I - I R 处理：D 3 组( L - N A M E + T N F a 组) ：L - N A M E ( 1 0 0g m o 儿) 处理心肌细胞3h 后，再加T N F d ( 1 0 0 u 抽1 ) 共同作用1 2 h ，进行眦处理；E 组为O D Q 组。E 1 组( O D Q + S N P 组) ，E 2 组( O D Q + L - A r g 组) ，E 3 组( O D Q+ T N F - a 组) ：F 组为C h e l 组。F 1 组( C h e I + S N P

141、组) ，F 2 组( C h e l + L - A m 组) ，F 3 组( C h e l +T N F - d 组) ：G 组( 2 - M P G + T N F - a 组) ：H 组( G e n i s t e i n + I N F - a 组) ；其中E - H 组，O D Q ( 1 0 m n o 儿) 、C h e l ( 5g m o 儿) 、2 - M P G ( 4 0 0 # m o l L ) 、G e n i s t e i n ( 5 0p , m o l L ) 分别处理心肌细胞3h ，再加T N F - a ( 1 0 0U m 1 ) 、L A r

142、g ( 5m m o 儿) 或S N P ( 5v m o l L ) 共同作用1 2h 后，进行H R 处理。单独使用n 眼a ( 1 0 0U n i l ) 、S N P ( 5f m a o 儿) 、L - A m ( 5t r a n o 扎) 、L - N A M E ( 1 0 0# t o o l L ) 、O D Q ( 1 0v , m o F L ) 、C h e l ( 5 啪。l ，L ) 、2 - M P G ( 4 0 0 # m o l L ) 和G e n i s t e i n ( 5 0# m o l L ) 对正常细胞L D H 和M n S O D 水

143、平在实验观察时间内无明显影响。1 4 统计学处理所有数据均以均数标准差( i s ) 表示，采用t 检验、单因素方差分析和浙江大学硕士学位论文N e w m a n K e u l s 法进行差异显著性检验，P O 0 5 表示有显著差异。2 结果2 1T N F o t 预处理对缺血再灌注心脏心功能和酶学指标的影响2 1 1T N F - o f 对缺血复灌离体灌流心脏左心室功能的影响在单纯缺血再灌组，2 0m i n 缺血复灌后，L V D P 、L V E D P 、+ d p d t m a x 和L V D P x I - I R明显降低复灌2 0 m i n 内，随时间延长有逐步改

144、善；与之相比，豫前T N F - a ( 1 0 U m 1 )预处理1 0m i n ，能够明显减弱缺血再灌注对L V D P 、L V E D P 、+ d p d t m a x 和L V D P x H R的抑制作用( P 0 0 5 ) ( 图3 ，4 ，5 )2 1 2T N F - a 对离体大鼠心脏缺血再灌后冠脉流出液中L D H 和心肌M n S O D 的影响如图6 所示，分别检测4 个时间点的冠脉流出液中L D H 释放量，结果显示单独缺血再灌注后，L D H 含量显著增多，而T 卜B d + I ，R 组中，L D H 释放量较单独豫组明显减少( P 0 0 1 ) ；

145、M n S O D 活性也明显高于单独缺血复灌组( P 0 0 1 ) 。2 1 32 - M P G 、L - N A M E 和5 - H D 对T N F - a 预处理的缺血复灌离体灌流心脏左心室心功能的影响为了观察活性氧、N O 或m i t o K A T P 是否参与T N F - o d 对F R 处理后心脏的作用，分别用抗氧化剂2 - M P G ( O 3m M ) 、N O S 抑制剂L - N A M E ( O 5m M ) 或m i t o K n x e 通道抑制剂5 - H D ( 1 0 0 M ) 预处理5m i n 后，加T N F d ( 1 0 U m

146、 1 ) 共同灌流1 0 m i n ，再进行U P 处理。结果如图3 ，4 和5 所示，2 - M P G 、L - N A M E 或5 - H D 预处理后，均能削弱T N F - o f 改善缺血再灌注心脏心功能的作用。2 1 42 - M P G 、L - N A M E 和5 - H D 对T N F - a 预处理的离体大鼠心脏缺血再灌后冠脉流出3 9 浙江大学硕士学位论文液中L D H 和，t L , 肌M n S O D 的影响如图6 所示，与T N F + 豫组相比，2 - M P G 、L - N A M E 或5 H D + T N F d + 豫组中，冠脉流出液中L

147、D H 含量明显增加( P - JU1 0 0 07 5 05 0 00哨L L L j仍群玉En ，051 01 52 02 551 01 52 0r a i n 1 1 m eC o u r s eo C o n l r o I | _ l R一口一T N F - c ( 10 U f m l ) + I t R - 一2 - M P G + T N F - c c + I R一也一L N A M E + T N F + I R 一5 - H D + 1 N F _ o 【+ l R太仍餐!要。云塑_ - q 卜一【卜_ 0 哪p 一口一寸。o51 0 1 52 0 2 551 01 52

148、 0m i n1 1 n l eC o u r s e图3w N I c - O ( 1 0U ，r I l I ) 对离体灌流心脏缺血再灌注期间L V D P ( A ) 和L V E D P ( B ) 的影响F i g3E f f e c t so fT N F “( 1 0U m 1 ) O I lt h eL V D P ( A ) a n dL V E D P0 3 ) o fi s o l a t e dp e r f u s e dr a th e a r t sd u r i n gi s c h e m i aa n dr e p e r f u s i o nm ) V

149、a l u e sa r ee x p r e s s e da sx s ，n _ 1 2p e rg r o u p + P 0 0 5 ”P 0 0 1v s I 限g r o u p# P O0 5 黼P Ju*西cLlo( | 2 l u o uJ o 掌一浙江大学硕士学位论文AB1 2 001 2 0l 喜9 016 0量63 00隧印镶! 霸k k L 石仍群篓E051 01 52 02 551 01 52 0r a i n1 1 m eC o u r s eo C o n l r o I 一l R口一1 N F - c 【f 1 0 U m 1 ) + I Rt L N A M

150、 E + 1 N F - o L + 1 t R+ 2 M P G + T N F e + l f R+ 5 H D + T N F c + l t R蹯螂k k 5E簿羔o51 0 1 52 02 551 01 52 0r a i n- r i m eC o u r s e图4 T N F 吨( 1 0 U h T , J ) 对离体灌流心脏缺血再灌注期间+ d P d 仃n a x ( A ) 和- d P dn l n a x ( B )的影响F i g4 E f f e c t so fw - d ( 1 0U m ) 0 1 3t h e + d P M t m a x ( A )

151、a n d - d P d t m a x ( B ) o fi s o l a t e dp e r N s e dr a th e a r t sd u r i n gi s c h e m i aa n dr e p e r f u s i o n ( I P ) V a l u e sa r ee x p r e s s e da sx s n = 1 2p e rg r o u p -4P 0 0 5 ”P 00 1V S I R g r o u p ；# P O0 5 蜊P 00 lV S T N F - a + I R g r o u p4 2 一石Jlcou芑霉一Elp，dp+

152、量06uco浙江大学硕士学位论文芷工。三互吕品毋喃k L L E豁端051 0 1 5 2 0 2 551 01 5 2 0r a i n1 i m eC o l J r s eo C o n t o J 一I R一口一1 N F - a ( 1 0 U t r n l ) + l l R+ 2 - M P G + T N F - o L + l f Rd L - N A M E + 1 N F a + l f R + 5 - H D + T N F - a + l f R图5T N F - ( 1 ( 1 0U l m t ) 对离体灌流心脏映血再灌注期间L V D p x H R 的影响F

153、 i g5 E f f e c t so fT N F t ( 1 0U m 1 ) o nt h eL V D P x H Ro fi s o l a t e dp e r f u s e dr a th e v n sd u r i n gi s c h e m i aa n dr e p c r f u s i o n ( I R ) V a l u e sa r ce x p r e s s e d x s n ；1 2p e rg r o u p + P 0 0 5 ”P 00 1v s I Rg r o u p# P 0 0 5 擀P 00 1v sT N F c c + I Rg

154、 r o u p4 3 一一巳芑oo苗孚一浙江大学硕士学位论文ABR e p e r f u s i o n ( m i n )图6T N F - ( 1 0U m 1 ) 对离体灌流心脏缺血再灌注期后心肌L D H 释放量( A ) 和M n S O D活性( B ) 的影响F i g6 E f f e c t so fT N F - n ( 1 0U M ) o nt h eL D Hr e l e a s e ( A ) a n dM n - S O Da c t i v i t y ) i ni s o l a t e dp e r f u s e dr a th e a r t sa

155、 i d e ri s c h e m i aa n dr e p e r f u s i o n ( I ，R ) V a l u e ss 2 ee x p r e s s e da sx s ，n 21 2p e rg r o u p P 0 0 5 ，”P 0 0 lv sI Rg r o u p ；# P 0 0 5 ，槲P 00 1v sT N F - c E + I Rg i o u p4 4 塑垩查兰堕主兰些堡苎2 2 活性氧和线粒体A T P 敏感钾通道在T N F - a 心肌保护中的作用2 2 1T N F - c E 预处理对H R 乳鼠心肌细胞的作用如表l 所示，与对

156、照组比较，1 2h 缺氧及6h 复氧处理后，心肌细胞L D H 释放量显著增多( P 0 0 1 ) ，细胞内M n S O D 活性也明显升高( P 0 0 5 ) 。与H R 组比较，经过T N F 一口( 1 0 - 5 0 ，1 0 0 和5 0 0U m 1 ) 预处理后的心肌细胞，L D H 释放明显减少( P 0 0 1 )同时M n - S O D 活性显著升高( P O 叭) 。表1T N F - 3 处理对缺氧愎氧后心肌细胞L D H 释放量和M n - S O D 活性的影响( n = 1 5 )T a b iE f f e c to f T N F 。d 0 I t h

157、 ea c t i v i t y o f M n - S O Da n d t h er e l e a s eo f L D H i nc a r d i o m y o e y t e ss u f f e r i n g f r o mh y p o x i a r e o x y g e n a t i o nLDHr e l e a s eM n S O Da c t i v i t y( f o l di n c r e a s e )( f o l di n c r e a s e )C o n t r o l1 1 5 ：t ：0 0 81 0 4 士o 0 6H 瓜2 8

158、0 - 1 4 ) 2 6 1 2 s 士0 0 7 *T N F - a1 0 U m l2 0 9 - x 0 1 4 + “2 4 2 士o 2 6 * 45 0 U m l1 7 6 ：t ：0 0 7 + ”2 4 4 如2 2 “1 0 0 U m l1 5 8 - 士- 0 0 4 + + ”2 3 3 士O 2 1 “5 0 0 U m l1 6 3 i - 0 0 8 “k “2 5 6 士0 2 8 “D a t a ee x p r e s s e d m e a n ：k S Do ft h ef o l di n c r e a s ei nL D Hr e l e

159、a s ea n dM n S O Da c t i v i t yV St h ev a l u eo f p r e - h y p o x i & I s o l a t e dc a r d i a cm y o c y t e sW C l ep r e t r e a t e dw i t hT N F - ( xb e f o r eH 肫+ P 00 5 + + P 0 0 1V Se o n i x o g r o u p# P ( 00 5 蒯P 0 0 lV S H Rg r o u p4 5 浙江大学硕士学位论文2 2 2N A C 、a l l t i m y c i

160、 n A 、2 - M P G 和D D C 对T N F m 预处理的I - I R 心肌细胞的影响为了观察活性氧是否参与T N F - c 对H R 处理后心肌细胞的作用，心肌细胞分别用抗氧化剂N A C ( 1m M ) 、a n t i m y c i n ( 5 0 a M ) 和2 - M P G ( 4 0 0 x M ) 预处理3h 后，加T N F - ( 1 0 0U r n l ) 共同作用1 2h 后再进行H R 处理。结果如图7 所示，N A C 、a n t i m y c i nA 和2 - M P G 预处理心肌细胞后，均能阻断T N F - c ( 1 0 0

161、U m 1 ) 抑制心肌细胞L D H 释放及诱导M n - S O D 活性增加的作用。为了观察过氧化氢是否参与T N F - a 对H R 处理后一t L , 肌细胞的作用，心肌细胞用C u Z n S O D 抑制剂D D C ( 1 0 0 n M ) 预处理3h 后，加T N F - a ( 1 0 0 U n d ) 共同作用1 2h 后，再进行H R 处理。图7 结果表明，D D c 预处理心肌细胞后，阻断了T N F - a ( 1 0 0 U m 1 )对H R 心肌细胞的作用。单独用N A C 、a n t i m y c i nA 、2 - M P G 和D D C 处理

162、心肌细胞，对I - I R 诱导心肌细胞L D H 释放量和M n S O D 活性的改变无明显影响。2 2 35 - H D 对T N F - a 预处理的H R 心肌细胞的影响为了观察m i t O K n T e 是否参与T N F a 对I - F R 处理后心肌细胞的作用，用选择性m i t O K A T P 通道抑制剂5 - H D ( 1 0 0 “M ) 预处理心肌细胞3h 后加入T N F “( 1 0 0U m 1 )共同作用1 2h 后，再进行H R 处理。图8 结果表明，用5 - H D 预处理后，阻断了T N F - a( 1 0 0U m 1 ) 抑制心肌细胞L

163、D H 释放及诱导M n S O D 活性增加的作用。单独使用5 - I - I D( 1 0 0 口M ) 处理，与单独H R 组相比，对I - I R 处理后心肌细胞L D H 释放及M n - S O D活性无明显作用。同时，我们观察了m i t o K A r e 通道开放剂d i a z o x i d e ( 5 0 儿M ) 对H R 心肌细胞L D H和M n S O D 的影响。D i a z o x i d e 可显著减少心肌细胞L D H 的释放量( P o 0 5 ) ( 图9 ) 。4 6塑坚查兰堡兰兰焦笙苎AB毋蒂1 - J+ T h F ( 1 0 0 t 州)G

164、 r o u p s穸毒G r o u p s+ T N F - C 1 w 一)图7 N A C ( 1m M ) 、a n t i m y c i nA ( 5 0 州) 、2 - M P G ( 4 0 0 x M ) 和D D C ( 1 0 01 1 M ) 对T N F ( 1 0 0u “) 引起的缺氧复氧乳鼠心肌细胞L D H 释放量( A ) 和M n S O D ( B ) 活性改变的影响F i g7 E f f e c t so f T N F - q ( 1 0 0U m 1 ) O i lt h er e l e a s eo fL D H ( A ) a n dt

165、h ea c t i v i t yo f v l n S O D ( B )i nc u l t u r e dc a r d i o m y o c y t e ss u f f e r i n gf r o mh y p o x i a ，r e o x y g e n a t i o n ( H R ) i nt h ep r e s c eo ra b s e n c eo f N A C ( 1m M ) ，a n t i m y c i nA ( 5 0 删) ，2 - M P G ( 4 0 0 “M ) ，o rD D C ( 1 0 0r i M ) n = 1 5p e

166、rg r o u p+ P 00 5 + + P 00 1v s H Rg r o u p ；# P 0 0 5 槲P 00 1V ST N F - ag r o u p4 7 43210宙*日量口置一ong重zoJIa霉右点口10I一亡苫_譬口or至丝扩痧浙江大学硕士学位论文dm3器巴2旦1 210图85 - H D ( 1 0 0 删) 对T N F - ( ( 1 0 0 U 珊) q l 起的缺氧馒氧乳鼠心肌细胞L D H 释放量和M n S O D 活性改变的影响F i g8E f f e c t so f T N F d ( 1 0 0U h n l ) o nt h er e l

167、 e a s eo f L D H ( A ) a a dt h ea c t i v i t yo f M n S O D ( B )i nc u l t u r e dc a r d i o m y o c y t e ss u f f e r i n gf r o mh y p o x i a r e o x y g e n a t i o n ( H R ) i nt h ep r e s e n c eo i a b s e n c eo f 5 H D ( 1 0 0 “M ) 1 1 = 1 5p e rg r o u p“P 0 O lV s 腿g r o u p# P 0 0

168、 5 蝌P 0 叭v s T N F c tg r o u p4 8 塑望查兰堡圭兰堡堡苎d3巴UE2刁石止10L D HS O D图9 5 一H D ( 1 0 0 州) 或N A C ( 1m M ) 对DJ a z o x i d e ( 5 0 9 M ) B l 起的缺氧复氧乳鼠心肌细胞L D H 释放量和M n S O D 活性改变的影响F i g9 E f f e c t so fd i a z o x i d e ( 5 0p M ) o nt h er e W a s eo fL D Ha n dt h ea c t i v i 埘o fM n S O Di nc u l t

169、 u r e dc a 】d i o m y o c y t e ss u f f e r i n gf r o mh y p o x i a r e o x y g e r m i o n ( 叭) i nt h ea b s e n c eo rp r e s e n c eo f 5 - H D ( 1 0 0 “M ) o fN A C ( 1m M ) n = 1 5p e rg r o u p+ P 0 0 5v s H Rg r o u p2 2 4G l i b 对耵师卅预处理的H R 心肌细胞的影响此外，我们还观察了细胞膜K A T eJ l 匾道_ 在T N F a 心肌保

170、护中的作用，发现胞膜K m通道阻断剂G l i b ( 1 0 弘M ) 对T N F a 抑制L D H 释放和诱导M n - S O D 活性的作用无影响( 数据未显示) 。4 9 -浙江大学硕士学位论文2 3 一氧化氨在T T 师对缺氧复氧心肌保护中的作用2 3 1I N F - d 预处理对H 喂乳鼠心肌细胞的作用如图1 0 所示，1 2h 缺氧复氧处理后，与正常对照组比较，心肌细胞L D H 释放量增多，细胞内M n S O D 活性也相应升高。与未经T N F - d 处理的H R 组比较，经过n 吓d( 1 0 0u A n l ) 预处理的心肌细胞，L D H 释放明显减少，同

171、时M n - S O D 活性升高。图1 0 T N F - q ( 1 0 0U m ) 对缺氧，复氧引起的乳鼠心肌细胞L D H 释放量和M n - S O D 活性改变的影响F i g1 0E f f e c t so f T N F - an 0 0U n i l ) O i lt h er e l e a s eo f L D Ha n dt h ea c t i v i t yo f M n S O Di nc u l t u r e dc a r d i o m y o c y t e ss u f 岱e r i n gf r o mh y p o x i a r e o x y

172、 g e n a t i o n ( W R ) X S ，i q = I5p e rg r o u p + P 0 0 5 ”P 0 0 1V S H R g r o u p槲P 00 1v sT N F - 1 2 g r o u p5 0 浙江大学硕士学位论文2 3 2 N O 在T N F a 对H R 心肌细胞作用中的影响缺氧前分别用S N P ( 5p m o l L ) 和L ，A r g ( 5m m o l L ) 预处理心肌细胞1 2h ，复氧6h 后，检测心肌细胞释放的L D H 量和细胞内M n S O D 活性。结果如图1 所示，与不经过任何药物处理的单纯H R 组比

173、较，L D H 释放明显减少，同时M n S O D 活性升高。图1 0 结果表明，在T N F - o ! ( 1 0 0U m 1 ) 处理前，用L - N A M E ( 1 0 0 m a o l L ) 作用细胞3h ：复氧后，T N F a 抑制心肌细胞L D H 释放及诱导M n - S O D 活性的作用减弱。2 3 2 O D Q 在T N F - a 对H R 心肌细胞作用中的影响在无血清的D M E M 培养基中加入可溶性鸟苷酸环化酶( s G C ) 抑制剂O D Q ( 1 0# m o l L ) 3 h 后，再给予S N P ( 5 , u m o l L ) 或

174、L - A r g ( 5 m m o l L ) 及缺氧复氧处理。如图1 1 所示，与单纯S N P 组比较，L D H 活性增加，M n S O D 活性下降；与L - A r g 组比较，O D Q + L - A r g 组培养液中L D H 的活性增高，细胞内的M n S O D 活性降低。用O D Q ( 1 0 # m o l L ) 后，再给予T N F - o f ( 1 0 0 U m 1 ) 及缺氧腹氧。观察发现，与单纯T N F - c E 组比较，培养液中L D H 的活性增高，细胞内的M n - S O D 活性降低( 图1 1 ) 。2 3 4C h e l e

175、r y t h r i n e ( C h e l ) 在T N F - o 对H R 心肌细胞作用中的影响用P K C 抑制剂C h e l ( 5 # m o l L ) 处理后，复氧期间，S N P 和L - A r g 抑制心肌细胞L D H 释放及诱导M n S O D 活性增加的作用被减弱( 图1 1 ) 。与T N F - t 1 组比较，复氧后C h e l ( 5 # m o l L ) + T N F 组心肌细胞释放的L D H 活性增加，胞内M n S O D 活性降低( 图1 1 ) 。浙江大学硕士学位论文AB圈1 1O o Q ( 1 0 m 0 1 几) 和C h

176、d ( 5p m o l L ) 对T N F - a ( 1 0 0 U m 1 ) 、S N P ( 5p m o l L )或L A r g ( 5m m o F L ) 引起的缺氧复氧乳鼠心肌细胞L D H 释放量( A ) 和M n - S O D ( B ) 活性改变的影响F i g1 1 E f f e c t so f T N F - a ( 1 0 0U m 1 ) ，S N P ( 5p m o l L ) o rL - A r g ( 5m m o l L ) o nt h er e l e a s eo fL D H ( A ) a n dt h ea c t i v

177、i t yo fM n - S O D ( B ) i nc u l t u r e dc a r d i o m y o c y t e ss u f f e r i n gf r o mh y p o x i a r c o x y g e n a t i o n ( f 豫) i nt h ep l - e s b 。n c eo ra b s e n c eo fO D Q ( 1 0p m o l L ) o rC h e l ( 5p m o l L ) x s ，n = 1 5p e rg r o u pP 0 0 5 ，”P 0 ，叭v sH Rg r o u p ；# P 0

178、0 5 ，辫P O0 1V ST N F - c tg r o u pP 0 0 5 ，丛P O O lV SS N Pg r o u p ；“P 00 5 ，“P O O lV S L - A r gg r o u p5 2 激江大学硕士学位论文2 3 52 - M P G 对T N F - c t 预处理的H ，R 心肌细胞的作用培养液中加入抗戴化剂2 - M P G ( 4 0 0g m 0 1 L ) 作用3h 后，加入T N F “( 1 0 0U m 1 )共同作用1 2 h ，行缺戴，复氧处理，与纂独T N F - a 组I 电较，L D H 释放明显增加，M n S O D活槛

179、减弱( 图1 2 ) 。2 3 。6C , - e n i s t e i n 对T N F - a 颓楚理豹t - I R 心飘麴麓弱终耀如图1 2 所示，蛋白酪氪酸激酶( T y r o s i n e k i n a s e ，T K ) 抑制剂G e n i s t e i n ( 5 0 # t o o l L )预处理3 h ，不能阻断T N F 口( 1 0 0 U m 1 ) 对L D H 释放的抑制作用和促M n S O D 潘性升裹麓臻蔼。新江大学硕士学搬论文AB蹰1 22 - M P G ( 4 0 0j u m o F L ) 和G e n i s t e i n (

180、5 0 # m o l ，L ) 对T N F o l l ( 1 0 0U z r d ) l 起的缺氧，复氧乳鼠心肌绷勰L D H 释放量和M a S O D 活性改变的嚣嚷F i g1 2 E f f e c 拄o f T N F - 0 0 0u 捌o nt h er e l e a s eo f L D Hf A ) a n dt h ea c t i v i t yo f M n - S O D( B ) i nc u l t u r e de a r d i o m y o c y t e ss u f f e n n gf r o m 埘p o x l 叶e o x y g a

181、 t j o n ( f 非) i nt h ep r e s e n c eo ra b s e n c eo f 2 - M Y G ( 4 0 0m o l L ) o rG e n i s t e i n ( 5 0 舢l ，U n 21 5p e r 乒o u p+ P O 0 5 “P 0 0 1v sH P - g r o u p ；错P ，邵R O S 诱导m i t o K A 种谲道开放。但谢研究表明，5 - H D 可阻断乙酰腮碱= 3 6 1 和阿片擞物质”诱导R O S 的产生，提示m i t o K A w 通道为R O S 的上游途径。因此，有关m i t o K

182、 A T P逶道殍救究竟是R O S 对驰 孓舀瓢糅护露霜靛下游还是上游途径，骞惩送一步黪研究。线幸立体呼吸链复合物是参与诱导心肌缺氧损伤保护的话性氧的主嚣来源引o 。敝然H i g u c h i 等在心肌细臆中观察到T N F 。税诱导活性氧台成的现象o ”，但麓机制仍然不漓楚。H e i j i n e n 等蓉鬟窭辩嚣类魏质可臻被嚣僚鸯羟冀懿细髓因子”，盔蹋跨类秘曩与免疫麴胞的交甄作用的研究中发现了几乎所材的细胞因子野勺特征，因此我们认为与阿片类物质的心肌傈护作用机制炭似，T N F 疆也可能通过激活m i t o K A w 通道，樾进活性氧产生葡发挥箕潜皱羲损痿鏊心魏鞠像护痒用。遮

183、一点镶设，迩嚣要更多匏实验证实。鬻予活性氧调节的F N F 毡心肌保护作用的下游惟母通路，存程糟争议。H i g u c h i 等在培养鲍心肌细胞上发现N A C 抑制T N F - c E 诱导的N F A 。p p a B 激活”) ，僵R c h a r d 姆的藓竞结聚帮表翡N F - k a p p aB 不参与T N F - g 售号逶爨靛滴繁摊 。擐褥我稻嚣研究缀檠，活性氧谯T N F - o L 的心肌保护作用中越了重要的调节作用，又由于P K C 是缺氧预处趣的主要调节因子，因此我们试为P K C 可自参与了T N F n 旺髂薅的信号谂柽。m i t o K A T r

184、, 避道激活螽淹过P K C 臻号邋路发挥抗挟敷摄揍翡 筝焉删。露豆，P K C 激添裁秘渡蘸P M A引起的像护作用可被5 - H D 所抑制”) 。此外，环鸟苷酸( M P ) 也是一种重要的第二惯惯，其产生取决于细胞内鸟替酸环他酶的滏性，过氧化氯与一氧化氮可激添可溶性鸟哿酸环 乏酶8 ) 。K u m a r 等菠蕊n 疆楚理螽浓度羲赣整蛾；l 起心魏缀憨雨c G 垂P 承乎鹣增离，襁离体灌流的心脏上也直接观察别缺血再灌注道稷中c G M P 含僚增高o ”，由此我们挂测骱婚可能部分遁过c G M P 偿母途径发挥心飘保护瘁雳。髂逡毽括心魏雀惑静大多蒙鞠藏均可台袁秘o ，磊帮狠多研究谖蜜

185、N O 参与了心觏缺血预兜 ! 理( I P C ) 的心肌保护作用。有资料表明，L - A r g ( N O 前俅) 途径可模拟I P C5 7 浙江大学硕士学位论文的保护效应，且N O S 抑制剂L 。N A M E 可消除这一保护效应。缺血预处理也可上调i N O S 的表达，而抑制其基因的转录则使缺血梗死面积减小的保护作用消失( z 2 ) 。Z b a n g等报道N O 与氧竞争线粒体电子传递链末端的细胞色素氧化酶上的氧结合位点46 1 ，而直接抑制线粒体能量代谢，这可能是N O 参与心肌I P C 的部分机制。此外，氧自由基产生过量是心肌缺血再灌注损伤的主要机制之一，N O 可

186、能通过拮抗氧自由基发挥保护作用，抑制催化超氧阴离子产生的黄嘌呤氧化酶括性0 7 ) 。已知P K C 是在I P C 的心肌保护中发挥关键作用的一种蛋白激酶“) ，T h o m a s 等也发现N O 可能通过P K C 发挥其抗心肌缺血损伤的保护效应( 4 9 ) ，其机制可能是诱导P K C - e 从胞浆易位于胞膜上而发挥信号传递的作用”。此外，N O 下游的靶蛋白可溶性鸟苷酸环化酶( s G C ) 也参与介导了N O 的，B , i l t 保护作用。近几年来，有研究发现N O 诱导的心肌保护作用与I I l i t 0 K m 通道也有着联系。S a s a k i 等在兔心肌细

187、胞上发现N O 直接激括m i t O K A T P 通道开放，并且能够增强d i a z o x i d e 开放该通道的作用o ”。此外，在离体心脏灌流模型上，m i t o K x ，通道抑制剂5 - H D 具有逆转N O 供体S N A P 减少缺血梗死面积的作用。最近，L e b u f f e 等发现N O 的合成能够被5 - H D 所抑制，表明N O 的合成可能是m i t o K A T P 通道开放后的下游环节( 4 2 ) 。T N F - o t 与N O 关系非常密切T N F - a 通过促进心肌细胞中i N O Sm R N A 表达和N O合成增多而抑制心肌

188、收缩”- ”) 。本研究分别使用了S N P 、L - A r g 和N O S 抑制剂L - N A M E ，发现S N P 和L - A r g 可减轻心肌缺氧，复氧损伤，并且T N F - a 拮抗心肌损伤的作用被L - N A M E 削弱，由此我们认为N O 参与调节T N F d 诱导的心肌保护作用。另外，我们首先证实了N O 诱导的心肌保护可分别被P K C 抑制剂C h e l 和s G C 抑制剂O D Q 部分阻断，C h e l 和O D Q 还分别减弱了T N F - a 对缺血心肌的保护作用说明P K C 和G C 可能参与了T N F - o 心脏作用的信号途径，

189、而且T N F d 的作用共享N O 的信号转导途径。G e n i s t e m 不能抑制或削弱T N F - a 对缺血损伤心肌作用表明，T N F - a 可能不通过蛋白酪氨酸激酶信号途径发挥作用。已知经典I P C 的过程如下：激动剂一G 蛋白偶联一磷脂酶C ( P L C ) 激活一激活P K C巍汪丈学硬士学垃论文一激活效应器膜上的镩离子通道一保存越r P 一细胞保护园此我们认为，T N F - c # 对心肌缺盘绦护静撬制之一可能楚通过N O 减少心虢细胞漪氧耗，减少收缩，保存A T P 而发挥保护作耀。Y a g u c h i 等太在离俸心靛L a n g e n d o

190、r f f 灌流接型上发现缺惑蔫过氧拖氯预整理产生心腿绦护终瘸约搬囊# 之一是缳存了娆量代溅犍蹑A T P o ”。抗氧化瓤2 - M P G 是一荸孛透膜的小分子巯簿复台物，除了浚除腿内辨姆O H 之乡 ，还是胬效盼O N O O - 清除剂。A l t u g 等在离体大鼠心脏上发现2 - M P G 通过剂量依赖性抑制O N O O 一的合成椰而逆转缺血预处理的作用。此外，在缺血再灌注过程中，N O 也是- O H产生的来源之一，Oi - 和N O 快速反应生成O N O O 一，后者分解为O H 或其他氧化产物。B o l l i 等研究发现抑制N O 的产生可阻断I P C 的作用5

191、 “，表明N O 自身或其副产物( 如O N O O 和或- O H ) 触发了I P C 。本研究结果发现T N F - a 诱导的心肌缺血保护作用可分剐被L - N A M E 和2 - M P G 所削弱，缀然我们没有直接证明T N F - a 诱导N O 、O N O O - 和- O H产生增多，僵醴上研究结果提示N O 与O ：产生韵氧纯产物 如o N o o - 和或O H ) 在T N F - o 【的心薤瑶绦护中其有重蘩鲍谴，这可麓是N O 参与T N F - o t 辩心莲魏缺盘保护静另一机制。瞧姥，凝据零研究结果，在心瓿缺盎复灌( 缺戴复载) 损痿过疆中，T N F -

192、c E j 与R O S 、m i t o K A B 通邀和N O 之间可熊的关系如图1 3 辫示。T N F t 通过与其位于膜表嚣的受体缝台后激活存在于线粒体内膜上的m i t o K “w 通道开放，促进线粮体呼吸链复合体H I 部经活性氧的产生增加；后赣通过线粒体内膜上的离子通道I M A C 而进入胞质，并被胞浆中的C W Z n S O D 氧化生成H 2 0 2 ，H 2 0 2 作为第二信使通过未知途径激活存在于线粒体中的M n S O D 活性升商而发挥心肌保护作用。此外，I N F - t x 还可能通过促进N O S 活性升高增加N O 合成，而激活m i t o K

193、A T P 通道开放，成者通过N O 下游的c G M P 途径而发挥其保护效应。一5 9 。浙江大学硕士学位论文嚣1 3 曰 F 啦抗心飘缺血复灌( 靛氧复氧) 损挠作用静菇号转导速径F i g1 3 S i g n Mt r a n s d u c t i o np a t h w a yo f T N F - c c - i n d u c e dc a r d i o p r o t e c t i o nd u r i n gI Ro rI - l R 6 0 浙江大学硕士学位论文参考文献1E d d yu ，G o e d d e lD V ，W o n gG H T u m o

194、rn e c r o s i sf a c t o r - a l p h ap r e t r e a t m e n ti sp r o t e c t i v ei nar a tm o d e lo fm y o c a r d i a li s c h e m i a - r e p e r f u s i o n 蛳u r y B i o c h e mB i o p h y sR e sC o m r n u n1 9 9 2 ；1 8 4 ( 2 ) ：1 0 5 6 1 0 5 9 2 N a k a n oM ，K n o w l t o nA A ，D i b b sZ

195、，M a n nD L T u m o rn e c r o s i sf a c t o r - a l p h ac o n f e r sr e s i s t a n c et oh y p o x i c 叫u r yi nt h ea d u l tm a m m a l i a nc a r d i a cm y o c y t e C i r c u l a t i o n1 9 9 8 ；9 7 ( 1 4 ) ：1 3 9 2 1 4 0 0 3 】F r i d o v i c hI S u p e m x i d er a d i c a la n ds u p e r

196、 o x i d ed i s m u t a s e s A n n L lR e vB i o c h e m1 9 9 56 4 ：9 7 11 2【4 】W a r n e rB B ，B u r h a n sM S ，C l a r kJ C ，W i s p eJ R T u m o rn e c r o s i sf a c t o r - a l p h ai n c r e a s e sM n - S O De x p r e s s i o n ：p r o t e c t i o na g a i n s to x i d a n ti n j u r y A mJP

197、 h y s i o l1 9 9 1 ；2 6 0 ( 4P t1 ) ：L 2 9 6 - L 3 0 1 5 W o n gG H ，G o e d d e lD V I n d u c t i o no fm a n g a n o u ss u p e r o x i d ed i s m u t a s eb yt u m o rn e c r o s i sf a c t o r ：p o s s i b l ep r o t e c t i v em e c h a n i s m S c i e n c e1 9 8 8 ；2 4 2 ( 4 8 8 0 ) ：9 4 1 -

198、 9 4 4 6 】W a r n e rB B ，S m a r tL G e b bS ，W i s p e 瓜R e d o xr e g u l a t i o no fm a n g a n e s es u p e r o x i d ed i s m u t a s e A mJP h y s i o l1 9 9 6 ；2 7 1 ( 1P t1 ) ：L 1 5 0 一L 1 5 8 7 T a r t a g l i aL A ，W e b e rR F , V i g a r iI S ，R e y n o l d sC ，P a l l a d i n oM A ，J

199、r ，G o e d d e lD V T h et w od i f f e r e n tr e c e p t o r sf o rt u l n o rn e c r o s i sf a c t o rm e d i a t ed i s t i n c tc e l l u l a rr e s p o n s e s P m c N a i lA c a dS c iUSA1 9 9 1 ；8 8 ( 2 0 ) ：9 2 9 2 9 2 9 6 8 C h a n d e lN S ，M a l t e p eE ，G o l d w a s s e rE ，M a t h i

200、 e uC E ，S i m o nM C ，S c h u m a c k e rP T M i t o c h o n d r i a lr e a c t i v eo x y g e ns p e c i e st r i g g e rh y p o x i a - m d u c e dt r a n s c r i p t i o n P r o cN a t IA c a d S c i U S A l 9 9 8 ；9 5 ( 2 ：1 1 7 1 5 1 1 7 2 0 9 9D u r a n t e a uJ ，C h a n d e lN S ，K u l i s z

201、A ，S h a oZ ，S c h u m a c k e rP T I n 扛a c e l l u l a rs i g n a l i n gb yr e a c t i v eo x y g e ns p e c i e sd u r i n gh y p o x i ai nc a r d i o m y o c y t e s JB i o lC h e m1 9 9 8 ；2 7 3 ( 1 9 ) ：11 6 1 9 - 11 6 2 4 1 0 V a n d e nH o c kT L , B e c k e rL B ，S h a oz ，L iC ，S c h u m

202、 a c k e rP T R e a c t i v eo x y g e ns p e c i e sr e l e a s e df i o mm i t o c h o n d r i ad u n n gb r i e fh y p o x i ai n d u c ep r e c o n d i t i o n i n gi nc a r d i o m y o c y t e s JB i o lC h e m1 9 9 8 ；2 7 3 ( 2 9 ) ：1 8 0 9 2 - 1 8 0 9 8 6 1 堂笙查兰堡圭鲎燕堡奎 11 T a n a k aM ，F u j i

203、 w a r aH ，Y a m “a k it qS a s a y a m aS S u p e r o x i d ed i s m u t a s ea n dN - 2 一m e r c a p t o p r o p i o n y lg l y c i n ea t t e n u a t ei n f a r c ts i z el i m i t a t i o ne f f e c to fi s c h a e m i cp r e c o n d i t i o n i n gi nt h er a b b i t C a r d i o v a s cR e s1 9

204、 9 4 ；2 8 ( 7 ) ：9 8 0 - 9 8 6 +【1 2 】M c P h e r s o nB C ，Y a oZ M o r p h i n eM i m i c sP r e c o n d i t i o n i n gv i aF r e eR a d i c a lS i g n a l sa n dM i t o c h o n d r i a lK ( A T P ) C h a n n e l si nM y o c y t e s C i r c u l a t i o n2 0 0 1 ；1 0 3 ( 2 ) ：2 9 0 2 9 5 f 1 3 】Y

205、a oZ ，T o n gJ ，T a nxe ta 1 R o l eo fr e a c t i v eo x y g e ns p e c i e si na c e t y l c h o l i n e - i n d u c e dp r e c o n d i t i o n i n gi nc a r d i o m y o c y t e s 。A mJP h y s i o l1 9 9 9 ；2 7 7 ( 6P t2 ) ：H 2 5 0 4 - H 2 5 0 9 ，【1 4 L i uY ，S a t oT ，0 R o u r k eB ，M a r b a nE

206、 M i t o c h o n d r i a lA T P * d e p e n d e n tp o t a s s i u mc h a n n e l s ：n o v e le f f e c t o r so f c a r d i o p r o t e c t i o n ? C i r c u l a t i o n1 9 9 8 ；9 7 ( 2 4 ) ：2 4 6 3 2 4 6 9 ，【1 5 lF o r b e sR A ，S t e e n b e r g e nc ，M u r p h yE 。D i a z o x i d e - i n d u c e

207、 dc a r d i o p r o t e c t i o nr e q u i r e ss i g n a l i n gt h r o u 醇ar e d o x - s e n s i t i v em e c h a n i s m C i r cR e s2 0 0 1 ；8 8 ( 8 ) ：8 0 2 - 8 0 9 1 6 】F i n k e lM S ，O d d i sC V ，J a c o bT D ，W a 出i n sS C ，H a t t l e rB G ，S i m m o n sR L N e g a t i v em o t r o p i ce

208、 f f e c t so fe y t o k i n e so nt h eh e a r tm e d i a t e db yn i t r i co x i d e 。S c i e n c e1 9 9 2 ；2 5 7 ( 5 0 6 8 ) ：3 8 7 3 8 9 。 1 7 G o l d h a b e rJ I ，K i mK H ，N a t t e r s o nP D ，L a w r e n c eT ，Y a n gP ，W e i s sJ N E f f e c t so fT N F - a l p h ao n 【C a 2 + ia n dc o n

209、 t r a c t i l i t yi ni s o l a t e da d u l tr a b b i tv e n t r i c u l a rm y o c y t e s A mJP b y s i o t1 9 9 6 ；2 7 1 ( 4P t 2 ) ：H 1 4 4 9 - H 1 4 5 5 。 1 8 M a u l i kN ，E n g e l m a nD T ，W a t a n a b eMe ta 1 N i t r i co x i d es i g n a l i n gi ni s c h e m i ch e a r t C a r d i o

210、 v a s cR e s1 9 9 5 ；3 0 ( 4 ) ：5 9 3 - 6 0 1 【1 9 lS h J o n oN ，R a oV ，W e i s e Il i De ta 1 L - a r g i n i n ep r o t e c t sh u m a nh e a r tc e l l sf r o ml o w - v o l u m ea n o x i aa n dr e o x y g e n a f i o n A mJP h y s i o lH e a r tC i r eP h y s i o l2 0 0 2 ；2 8 2 ( 3 ) ：H 8 0

211、 5 - H 8 1 5 2 0 】B n m n e rF L e o n h a r dB ，K u k o v e t zW R ，M a y e rB 。R o l eo f a n d o t h e l i n ，n i t r i co x i d ea n dL - a r g i n m er e l e a s e 趣i s c h a e m i “r e p e r f u s i o n 两n r yo fr a th e a r t C a r d i o v a s cR e s1 9 9 7 ；3 6 ( 1 ) ：6 0 6 6 2 1 1R a k h RR

212、 D ，E d w a r d sR J ，M o c k r i d g e We ta lc u l t u r e dr a tv e m r i c u l a rm y o c y t e s 。A m2 7 8 ( 4 ) ：H 1 2 I1 - H 1 2 1 7 6 2 N i t r i co x i d e - i n d u c e de a r d i o p r o t e c t i o ni nJP h y s i o lH e a r tC i r eP h y s i o l2 0 0 0 ；浙江大学硕士学位论文 2 2 G u oY ，J o n e sW

213、K , X u a nY Te ta 1 T h el a t ep h a s eo fi s c h e m i cp r e c o n d i t i o n i n gi sa b r o g a t e db yt a r g e t e dd i s r u p t i o no f t h ei n d u c i b l eN Os y n t h a s eg e n e P r o cN a t lA c e dS c iUS A l 9 9 9 ；9 6 ( 2 0 ) ：1 15 0 7 - 1 1 5 1 2 2 3 L i uH ，M c P h e r s o

214、nB C ，Z h uX ，D aC o s t aM L ，J e e v a n a n d a mV ，Y a oz R o l eo fn i t r i co x i d ea n dp r o t e i nk i n a s eCi nA C h - i n d u c e dc a r d i o p r o t e c f i o n A mJP h y s i o lH e a r tC i r cP h y s i o l2 0 0 1 ；2 8 1 ( 1 ) ：H 1 9 1 - H 1 9 7 2 4 】Z h a n gH Y ，M c P h e r s o n

215、B C ，L i uHe ta 1 R o l eo f n i t r i c o x i d es y n t h a s e ，f r e er a d i c a l s ，a n dp r o t e i nk i n a s eCd e l t ai no p i o i d - i n d u c e dc a r d i o p r o t e c t i o n JP h a r m a c o lE x pT h e r2 0 0 2 ；3 0 1 ( 3 ) ：1 0 1 2 1 0 1 9 2 5 】Z h a oT ，X iL ，C h e l l i a hJ ，L

216、 e v a s s e u rJ E ，K u k r e j aR C I n d u c i b l en i t r i co x i d es y n t h a s em e d i a t e sd e l a y e dm y o c a r d i a lp r o t e c t i o ni n d u c e db ya c t i v a t i o no fa d e n o s i n eA ( 1 )r e c e p t o r s ：e v i d e n c ef r o mg e n e - k n o c k o u tm i c e C k c u

217、l a f i o n2 0 0 0 ；1 0 2 ( 8 ) ：9 0 2 - 9 0 7 【2 6 】Z h i - t o n gz ，Y a oz ，H u i - q i a n gL ，J i a n - s h lL Y iLP r o t e c t i v ee f f e c to fp u e r a n no nc a r d i o m y o c y t e so fn e o n a t a lm i c ei n j u r e db yl i p i dp e r o s i d a t i o nd t m n gh y p o x i a - r e o

218、x y g e n a t i o n C h i n e s eT r a d i t i o n a la n dH e r b a lD u g s2 0 0 2 ；3 3 ( 4 ) ：3 4 3 - 3 4 6 【2 7 】C a d e n a sE ，D a v i e sK J M i t o c h o n d r i a lf r e er a d i c a lg e n e r a t i o n ，o x i d a t i v es t r e s s ，a n da g i n g F r e eR a d i cB i o lM e d2 0 0 0 ；2 9

219、( 3 - 4 ) ：2 2 2 2 3 0 【2 8 】H o s h i d aS ，K u z u y aT ，F u j iHe ta 1 S u b l e t h a li s c h e m i aa l t e r sm y o c a r d i a la n t i o x i d a n ta c t i v i t yi nc a n i n eh e a r t A mJP h y s i o l1 9 9 3 ；2 6 4 ( 1P t2 ) ：H 3 3 - H 3 9 【2 9 】M a u l i kN ，E n g e l m a nR M ，W e iZ

220、，L uD ，R o u s o uJ A ，D a sD K I n t e r l e u k i n - 1a l p h ap r e c o n d i t i o n i n gr e d u c e sm y o c a r d i a li s e h e m i ar e p e r f u s i o nt h j u r y C i r c u l a t i o n1 9 9 3 ；8 8 ( 5P t2 ) ：1 1 3 8 7 1 1 3 9 4 3 0 】R h e eS G R e d o xs i g n a l i n g ：h y d r o g e np

221、 e r o x i d ea sm t r a c e l l u l a rm e s s e n g e r E x pM o lM e d1 9 9 9 ；3 1 ( 2 ) ：5 3 5 9 31 H i g u c h iY ，O t s uKN i s h i d aKe ta 1 I n v o l v e m e n to fr e a c t i v eo x y g e ns p e c i e s - m e d i a t e dN F - k a p p aBa c t i v a t i o ni nT N F - a l p h a i n d u c e dc

222、 a r d i o m y o c y t eh y p e r t r o p h y JM o lC e l lC a r d i o l2 0 0 2 ；3 4 ( 2 ) ：2 3 3 - 2 4 0 【3 2 】T a k a h a s h iM A ，A s a d akS u p e r o x i d ea n i o np e r m e a b i l i t yo fp h o s p h o l i p i dm e m b r a n e sa n dc h l o r o p l a s tt h y l a k o i d s A r c hB i o c h

223、 e mB i o p h y s1 9 8 3 ；2 2 6 ( 2 ) ：5 5 8 - 5 6 6 6 3 濒汪大举颞土学疰论文【3 3 T o u f e k t s i a uM C ，M o r e lS ，T a n g u yS ，J e u n e tA ，D eL e i f i sj ，B o u c h e rF I n v o l v e m e n to fr e a c t i v eo x y g e ns p e c i e si nc a r d i a cp r e c o n d i t i o n i n gi nr a t s A n t i o x

224、 i dR e d o xS i g n a l2 0 0 3 ；5 ( 1 ) ：1 1 5 - 1 2 2( 3 4 Y a g u c h iY ，S a t o hH ，W a k a h a r aNe ta 1 P r o t e c t i v ee f f e c t so f h y d r o g e np e r o x i d ea g a i n s ti s e h e m i a m p e r f u s i o ni n j u r yi np e r f u s e d 豫| h e a r t s ，C i r cJ2 0 0 3 ；6 7 ( 3 ) ：

225、2 5 3 - 2 5 8 。【3 5 】Y a m a s h i t a N ，H n s h i d a S ，O t s u 墨A s a h i M ，K u z u y a t H o r i M E x e r c i s e p r o v i d e s d i r e c tb i i p h a s i cc a r d i o p r o t e c t i o nv i am a n g a n e s es u p e r o x i d ed i s m u t a s ea c t i v a t i o n JE x pM o d1 9 9 9 ；1 8 9

226、( 1 1 ) ：1 6 9 9 - 1 7 0 6 【3 6 G a r l i dK D ，P a u c e kP ，Y a r o v - Y a r o v o yVe ta 1 C a r d i o p m t e c t i v ee f f e c to fd i a z o x i d ea n di 蟾i n t e r a c t i o nw i t hm i t o e h o n d r l a lA 臼- s e n s i t i v eK + 穗a r m e l s ，P u s s i b l em e c h a n i s mo fc a r d i

227、 o p m t e c t i o n C i r cR e s1 9 9 7 ；8 1 ( 6 ) ：1 0 7 2 1 0 8 2 3 7 0 1 R o u r k eB M y o c a r d i a lK ( A T P ) c h a n n e l smp r e c o n d i t i o n i n g C i r eR e s2 0 0 0 ；8 7 ( 1 国：8 4 5 * 8 5 5 【3 8 】H o l m u h a m e d o vE L ，J o v a n o v i cS ，D 厕aP P ，J o v a n o v i eAT e r z

228、 i cA M i t o c h o n d r i a lA T P - s e n s i t i v eK + c h a n n e l sm o d u l a t ec a r d i a cm i t o c h o n d r l a If u n c t i o n A mJP h y s i o l1 9 9 8 ；2 7 5 ( 5P t2 ) ：H 1 5 6 7 - H 1 5 7 6 【3 9 】H e i j n e nC J ，K a v e l a a r sA ，B a l l i e u xR E B e t a - e n d o r p h i n

229、：c y t o k i n ea n dn e u r o p e p t i d e 1 l n n l t 2 3 1 0 lR e v1 9 9 l ：1 1 9 ：4 1 - 6 3 ， 4 0 R o g e r sR J ，M o n n i e rJ M ，N i 呔H S T u m o rn e c r o s i sf a c t o r - a l p h as e l e c t i v e l yi n d u c e sM n S O De x p r e s s i o nv i am i t o c h o n d r i a - t o - n a c l

230、e n ss i g n a l i n g ，w h e r e a si n t e r l e u k i n l b e t au t i l i z e sa I la l t e m a t i v ep a t h w a y JB i o lC h e m2 0 0 1 ：2 7 6 ( 2 3 ) ：2 0 4 1 9 2 0 4 2 7 4 1 T a k a s h iE ，W a n g Y ，A s h r a f M A c t i v a t i o no f m i t o c h o n d r i a lK ( A T P ) c h a n n e le

231、l i c i t sl a t ep r e c o n d i t i o n i n ga g a i n s tm y o c a r d i a li n f a r c t i o nv i ap r o t e i nk i l l j a s eCs i g n a l i n gp a t h w a y C i r e R e s l 9 9 9 ；8 5 ( 1 2 ) ：1 1 4 6 - 1 1 5 3 【4 2 】L e b n f f eG ，S c h u m a c k e rP T ，S h a oZ H ，A n d e r s o nT 1 w a s

232、e 鞋，V a n d e nH o e kT L 。R O Sa n dN Ot r i g g e re a r l yp r e c o n d i t i o n i n g ：r e l a t i o n s h i pt om i t o c h o n d r i a lK A T Pc h a n n e l A mJP h y s i o lH e a r tC i r cP h y s i o l2 0 0 3 ；2 8 4 ( 1 ) ：H 2 9 9 一H 3 0 8 ， 4 3 】B r a d yA J ，W a r r e n 疆，P o o l e - W i

233、 l s o nP A ，W i l l i a m sT J ，H a r d i n gs E N i t r i co x i d ea t t e n u a t e sc a r d i a cm y o c y t ec o n t r a c t i o n A mJP h y s i o l1 9 9 3 ；2 6 5 ( 1P t2 ) ：H 1 7 6 一H 1 8 2 6 4 蟥蛙大学硬掌瞧渣文泓 K u m a rA ，B r a t 靴W a n gFe ta l ，R o l eo fn i t r i co x i d ea n dc G M Pi nh u m

234、m ls e p t i ct u m - i n d u c e dd e p r e s s i o no fe a r d i a cm y o c y t ec o n t r a c t i l i t y A mJP h y s i o l1 9 9 9 ；2 7 6 ( 1p l2 ) ：R 2 6 5 - R 2 7 6 f 4 5 3L o c h n e rA ，G e t d eS ；T r o m pE 税a l 、R o l eo fc y c l i cn u c i e o d d ep h o s p h o d i e s t e r a s e s 遮i s

235、 e h e m i cp r e c o n d i t i o n i n g M o lC e l lB i o c h e m1 9 9 8 ；1 8 6 ( 1 - 2 ) ：1 6 9 ”1 7 5 ， 4 6 】Z b a n gx ，X i eY w N a s j l e t t iA ，X nx ，W o l i nM S , H i n t z eT H 。A C Ei n h i b i t o r sp r o m o t en i l r i eo x i d ea c c u m u l a t i o nt om o d u l a t em y c ”e a

236、r d i a lo x y g e nc o n s u m p t i o n C i r c u l a t i o n1 9 9 7 ；9 5 ( 1 ) ：1 7 6 * 1 8 2 ， 4 7 F u k a h o r iM ，I e h i m o f iEI s h i d aH ，N a k a g a w aH ，O k i n oH N i t r i co x i d er e v e m i b I ys u p p r e s s e s x a n t h i n e o x i d a s e a c t i v i t y F r e e R a d i c

237、 R e s l 9 9 4 ；2 1 ( 4 ) 2 0 3 - 2 1 2 。 4 S jF r y e rR M ，S e h u l t z 掘，H s uA G r o s sG J I m p o r t a n c eo fP K Ca n dt y r o s i n ek m a s ei ns i n g l eo rm u l t i p l ec y c l e so f p r e c o n d i t i o n i n gi nr ah e a r t s A mJP h y s i o l1 9 9 9 ；2 7 6 “P t2 1 ：Ht 2 2 9 - H

238、 1 2 3 5 4 9 3V o n d r i s k a 测Z h a n gZS o n gCe t P r o t e i nk i p e s eCe p s i l o m S r cm o d u l e sd h e e ts i g r u at f a a n s d u c t i o ni nn i t r i co x i d e * i n d u c e dc a r d i o p r o t e e t i o n ：c o m p l e xf o r m a t i o na sam e s 1 sf o rc a r d i o p r o t e c

239、 f i v es i g n a l i n g C i r cR e s2 0 0 1 ；8 8 ( 1 2 ) ：1 3 0 6 - 1 31 3 瑟麓t i n gP ，T a k a n oH ，Z h a n gje ra t 1 s o f o r m - s e l e c t i v ea c t i v a t i o no fp r o t e i nk i n a s eCb yn i t r i co x i d ei nt h eh e a r to fc o n s c i o u sr a b b i t s ：as i g n a l i n gm e c h

240、 a n i s mf o rb o t hn i t r i co x i d e i n d u c e da n di s c h e m i a - i n d u c e dp r e c o n d i t i o n i n g C i mR e s1 9 9 9 ；8 4 ( 5 ) 5 8 7 - 6 0 4 5 1 】S a s a k iN ，S a t o 鼍O h t e rA ，O R o a r k eB ，M a r b a nE A c t i v a t i o no fm i t o c h o n & i a lA T P - d e p e n d e

241、 m p o t a s s i u m c h a m a e t sb y n i t r i co x i d e C i r c u l a t i o n2 0 0 0 ；t 0 1 鳓：4 3 9 - 4 4 5 【5 2 】B e l lR M ，M a d d o c kH L ，Y e l l o nD M T h ec a r d i o p r o t e c t i v ea n dm i t o c h o n d f i a ld e p o l a d s i n gp r o p e r t i e so f e x o g e n o u sn i t r i

242、 co x i d ei nm o u s eh e a r t C a r d i o v a s cR e s2 0 0 3 ；5 7 ( 2 ) ：4 0 5 - 4 1 5 【5 3 A t t u gS ，D e m k 3 m r e kA T ，K m 撼K A ，K a n z i kI E v i d e n c ef o rt h ei n v o l v e m e n to fp c r o x y n i t r i t ei ni s c h a e m i cp r e c o n d i t i o n i n gi nr a ti s o l a t e dh

243、 e a r t s B rJP h a r m a c o l2 0 0 0 ；1 3 0 ( I ) ：1 2 5 1 3 1 【5 4 】B o U i B h a t f iZ A ，T a n g 魁档a 1 E S d e r w 2t h a tl a t ep r e c o n d i t i o n i n ga g a i n s tm y o c a r d i a ls t u n n i n gi nc o n s c i o u sr a b b i t si st r i g g e r e db yt h eg e n e r a t i o no fn i

244、t r i co x i d e C i r cR e s1 9 9 7 ；8 1 ( 1 ) ：4 2 - 5 2 一6 5 -濒淫丈学硬学穗论文总缕举课题分别从离体器官、细胞和溉细胞多个水平出发，研究了蜘胞因子肿瘤坏既因子d ( T N F - a ) 对心脏的作用，包括对正常心脏负性肌力作用和在心肌缺g n 复灌( 或缺氡，錾戴) 损臻孛魏佟蕊，莠探谤箕搏爝撬镪聂售母鹱导途径。遵斑实验，本研究得出咀下缩论：1 T N F - a 抑制心肌收雅力的负性肌力作用机制可豁分与心室肌浆网c a 2 _ A 等P 酶活爆下降疆关，藤与膜主魏e 扩- A X P 臻帮N a + W - A T P

245、酶活缝燹荚。2 T N F - a 预处理具有减轻心肌细胞缺血再灌注或缺氧复氧损伤的作用活性激和线粒体A T P 敏感钾遇遂参与介导T N F - a 的心肌保护作慝。3 ，N O 参与疆节T N F - c f 诱导翦心露l 潦氧凄氧撮岱稼护箨矮，P K C 移G C 霉麓为蒸下游惰号途径成分。一6 6 -浙江大学硕士学位论文综述心肌再灌注损伤中的药理学保护途径通过溶栓或经皮冠状动脉血管成形术( p e r c u t a n e o u sc o r o n a r ya n g i o p l a s t y ，P T C A )恢复心脏血流再灌注是急性心肌梗死治疗中的常规治疗手段。虽然

246、心肌梗死区血流的恢复是治疗的必须手段，但是再灌注本身却引起额外的较血供恢复前更严重的损伤，即“再灌注损伤”，其临床表现为心律失常、可逆性收缩功能障碍一心肌顿抑、内皮功能障碍和细胞死亡。有不少研究认为不可逆性再灌注损伤是由其自身引起的病理学现象“，虽然该观点还存在着争议) 。引起再灌注损伤的机制很多，包括氧自由基的形成、钙超载、中性粒细胞介导的心肌及内皮损伤、再灌注区毛细血管血流量的逐渐减少和高能量磷酸盐贮存物的耗竭等。现有的研究论文己对再灌注损伤的可能机制进行了广泛的阐述，其内容主要是围绕通过药理学手段抑制再灌注损伤的可能性睁”。大部分体内体外研究表明，再灌注刚启动时进行干预 生治疗具有可行性

247、，其中多数治疗是在未发生冠状动脉粥样硬化的完好血管中进行。但是相应的临床研究却很少，其原因可能是由于技术难度较高，包括心肌梗死面积定量、冠脉结扎到复灌持续时间差异等。但令人欣喜的是，基于基础研究所获得的阳性结果，几项运用不同药理学治疗手段的临床试验正在进行。因此本文将综述对目前运用药理学手段减少心肌再灌注损伤的实验性研究的概况。已有的研究对各种药物在心肌再灌注损伤中的作用进行了探讨( 如图l 所示) ，包括氧自由基清除剂、抗氧化剂、钙通道阻断剂、中性粒细胞抑制剂、一氧化氨( N i t r i co x i d e ，N O ) 、腺苷相关因子、肾素一血管紧张素系统阻断剂、内皮素受体拮抗剂、N

248、 a +用交换体抑制剂和抗凋亡药物等。对其中一些药物的研究，己获得了阳性结果。关于部分研究结果不一致的解释主要有：动物种族差异性、侧支血流循环程度、缺血持续时间、给药时间、给药方法和心肌保护判断指标的差异( 如梗死面积、心肌功能、内皮功6 7 浙扛大学硕士学位论文能和心律失常等) 。例如，缺血时间过短造成再灌注损伤不显著：而缺血时间过长又引起心肌不可逆损伤，使得再灌注损伤被忽略。此外，再灌注刚发生时药物治疗剂量也非常重要，缺乏侧支循环，缺血时静脉注射给药可能不能到达缺血区域；即使存在侧支循环，大剂量的静脉注射也不能在缺血区达到所需的治疗剂量。系统效应可能引起血液动力学副作用，相反，局部给药，如

249、顺行性冠脉内注射具有将药物选择性递送到靶作用区域而不影响非缺血心肌的特点，并且药物浓度达到所需水平。另一项技术是逆行冠静脉药物递送系统【9 ) 。在打开阻塞动脉前进行冠脉内注射在临床上的应用已日益广泛。图I 缺血再灌注过程中调节因子作用概要F i g1S u m J + n a r yo f t h ee f f e c to fs e v e r a lm e d i a t o r sd u r i n gi s c h c m i a r c p e r f i a s i o n辩汪蛊掌颖士攀往培窆m 一一一一p 一襞趣囊濑渣豫嬲裁瘩幽瀑游产裳跫辩攥淀獭穗靛鸯媳滁孛瓣荧穗环镄。滔豫簸势

250、子毯耩嫠鬣瓣蕊予O ；。、t O H 。避国、O N O O - 、L O O H 誉。鸯蠡蕊内幽予港寒袋对邀予* 毽学瞧臻嚣嚣滔泼。纂勰磷链帮怒穗豁瓢楼髭患嚣辫棱o o 袋P T C A 0 ) 懿辩滚疗霉爨蠛璇心魁嚣灌漫j 扭赣串袅产垒丈餐懿鑫蠡蒸。鑫斑蒸瓣释放溉菠袂趣辱 起懿；髓籀鬣 8 酪嚣镬下澳爱簿夺蘸瓷樽非潜藏瓣萄籁，此豁，蕊爨瘀蘩蕊鞠鲴魏国鹣磷鼹菇螫彝蠢藏，g f 越黼艨避氧张张瓣簿蕊戆袋麓德，靛雕蕊交麟滟撩遴馥及器辩腑爨嚣蠡韵渤戆。氡鑫爨鏊添除翊蔽滤氧栊褰爨糕起靛强憋竣魏懿( s 撵c ：r o x i d e 喇甜黼瞧黪S O D ) 、秘毋醛麟黪越戴识餐酶、黄曦蜍壤纯群捧铡

251、凝a i l p F a r i n o I 、镰鬟瓣粼d e f e r o x a m i n e 、熬袋缝垒蒙戡e 喾撬鬟豫裁。J o l l y 囊蒸秘攀謇j 予1 9 8 4 攀黄浚攘遴京突挟囊霹灌注蹊囊上惩髑是囊纂瀵黪裁汝泞势获镄丁鞭整撼黔”。纛蔟实验窜，冠辣菠旋嶷甥瓿9 0 删n嚣踅灌2 4 豪+ 势蕊囊虢艇瓣蔬蒜灌注藏轰出痿嚣S O D 秘嚣麟纯鬣薛，z 办鼗攫楚嚣嵇褥鬃援小；艇越袭器滚注4 溉建簸鲶势魏漆疗，瓣姆艇黧爨糕院笼疆罄差器，凌鼹襞赣盎羹奔霉静黎侮程疑擞薄灌注漤攘孛媳一攀蘩麓臻攀谗。谖蜜黢建表霹缭翡辩糯在髂疗通鹣申魏鬟鞭穗。爨颈蜜骏牵，谯猪发蘸酶囊( 1 e f ta

252、 n t e r i o r d e s c e n d i n g , L A D ) 结扎硬斑横塑、乏懑涎，藏夫静艨遵 擎注辩S O D ，皱斑穗惩藤彀 楚爨麓拽” 。徼怒遴避意心毖蹬予趣鞴裁鼙戆S O D ；犍建鬻黎蠢黉耗，箕瓣瓣避鼓予猪馥乏藏躲蘸寰稻铎；菝鬻霞得L A D 缝撬逑程宰灏襻缭S O D 藏襄舞移慕，避螺瓣支撩环在其中褥惹瑟链。魏辩漆鸯豢E 蹙彀麓黟S 鬃避襞捷撩裁裁罄捻戴筑粼蟪；藏绦铲搀懋逡谍翡了戴纯碰激的鸯警拣。毽楚绦墼豢鞋靛舞豢鬻靛衽逡缎漤渗遴姓姆蕊辫馥了筵程紧急靖越下薛藏臻。露爱，维垒嚣露黉叛秘礴较蔫鼹荣东鼹，程蘧趣瓤灌注籀镄游疗孛斡藏露蕊援广e 糕冠黥鼯巍瓣测影鬟

253、灌h 大甄模甏+ 至，A l t a v i t l a 簿靛蕊再灌淀5 嬲n 籍缭薪鏊霪熏素E 癸髅翡漾F 10 4 2 ，麓够浓爱旅熬髓缝麓多橙琵搿裂“。赡质谶氧忱爨飘自融蒸按嵇魏塞要瓣戮，程猪L A D4 5r a i n 黎整膳鹣鏖瀵摸鼙上，饔灌漫蓠避避嚣搜黪驻遂嚣注射麟礁遘蔑纯搀露裁H 2 9 0 5 1 ，驻餐效减少心虢裰麓蚕辍g 稚。”6 9 *浙江大学硕掌健论文其他的研究也证明自由基清除剂和抗氧化剂有助于改善复灌潍程中心律失常和心肌顿抑的发生。在9 0m i n 冠动脉结扎及复灌1 周的狗缺血再灌注模型上，复灌前及复灌爱lh 注射S O D ，心律失豢茇生鞠鬟减少8 。藏努，在

254、惫往嚣躲援塞患者藩裣瀚疗蔫注射S O D ，也具有减少心律失常和改善心功能的作用o ”。S O D 、过氧化氢酶、抗氧化剂N w ( 2 - m e r e a p t o p r o p i o n y l ) g l y c i n e ( 2 一M P G ) 及其f 电抗氧化剂都具肖增强缺血后心肌收绞动糍麴痒爰。疑盎蘩臻复灌垂誊1r a i n ( 磊不是复 羹器lm i n ) 给挠瓴纯蘩等稳疗，心甄顿抑现象也有所改善，表明复灌后迅速产生的自由撼是造成心肌顿抑的重要原因( ” 。但是也有一些研究发现抗氧化剂蹲对心肌梗死颟积变化无影响。分别有研究观察剥在弱妁或9 0 m m 竣蠡、荐灌

255、注4 天静模壅上S O D 鞫抗氧耗蘩2 - M P G 治疗螽，橙死瑶积无明驻变化( 1 9 ；2 0 ) 。灏似的，在狒狒行1 2 0r a i nL A D 结扎2 2h 复灌模型上，复 鏊前静脉注射人重组S O D 殿过氧化氢酶，也不能减少心肌梗死面积o ”。分析造成实验结果不一致静藤因可戆毒秘支循耀豹审体楚器注帮梗死甏辍测量静方法不碡等。赣斑拜孛闻1 2 0m m 可能过长，已使心肌损伤不能恢复。另外，最近在S O D 基阁过度表达的转基因鼠上进行的实验表明，细胞对于外源憔酶渗透性的的限制可能是造成S O D 效应差肄的琢藩# ”。3 0r n i n 全心缺矗4 5 袋1 2 0

256、m m 复灌螽，S O D 基因表达过菠耱转基困氯与# 转基因鼠捆比，梗死面糨减小5 0 。( 二) 锈掊撬奔j钙超载引起缺血再灌注损伤的途径有多条。首先，复氧启动时钙超载诱导心肌纤维过虞激活，胞内游离钙的增多，大爨转入线粒体，又造成线粒体内的钙超载，从褥掷制了线齄体台或A T P 静能力，限翻了心瓤静代谢饿艇；最后，太量锈激活蛋自农解酶的激活又破坏了细胞内的结构。缺血或复灌前短时间低剂量钙灌注可肖效保护缺血后心肌的功能。钙进人细胞内的明确途径目裁还不确定，毽怒N a + ，c a 2 交换馋和电压门控锈逶道是， 钙避A 细胞静主要途径。缺瓶前钙拮抗剂她理对于心肌缺姐复灌具有保护作用。虽然对钙

257、拮抗剂的保护作- 7 0辩垃丈学礞学谯论文用进行了大量研究，但这些研究郡没谢区分其究竟怒对缺血还是对舞灌引起的损饼发挥保护作用“。关于其作用机制，研究认为与其负性肌力作用或变时作用，而减少黼最清耗掇荧。戴井。菜鏊镪接撬葱本鸯逐建抗氧诧荆帮N O 台藏调节刘；延楚逅弱奄文献报道认为钙拮抗荆无抗单独缺血的作用，而是对再灌注引起的损伤礴保护效应。不少研究发现谯复灌前或刚歼始复灌时给钙挞抗剂具有保护佧甩，表明其传用是针对再灌1 淀日l起懿凝垮啦。2 ”。H e r z o g 等天 芷羁疑灌旱鬟，饕心藏逶蓬L A D 潦慑裁量硗嚣霉黎( D i l t i a z e m ) ，心肌梗瓢面积减小心”，

258、但前提是必须在复灌开始后的1 2m i n 内给药物处理，器则无疗效。在L A D 结扎复灌3h 曲猪模型上。褥灌注前5f n i n 开始冠状静拣逆幸亍注射蘸爨卓甏3 0 撼嚣，蠡麓攘瑟瓣辍藏枣，并显梗死嚣雾 扩簸速度减缓鳓。葺菱灌时间戳长到2 4h 时，也可以观察到非沿地平( F e l o d i p i n e ) 的保护作用”】。另方颤，K l e i n 缚研究发现缺啦前硫氯卓酮预处理能有效减小7 5m 血缺血，4h 羁灌注的猪心臃梗琵嚣积，毽是复壤藕3 0r a i n 静赫淀瓣虢舞辜藜，攫醒蕊较莰毒轾激躐小，努群葵藜因可能怒后种处理方式在再灌注时，到达缺血心肌隧域的药物有效浓度

259、偏低。此外。钙拮抗剡逮存效减少藏灌注畦心律失常及心腿顿抻驰发生。维拽赣浓( V e r a p a w A ! ) 淹减轻离体大藏蠢猪瓣心脏在再壤注黪昏撵失露豹茨燮”蠲。秘嚣靛翡辣结扎1 5m i l l 后复灌3h ，再灌注前2r a i n 从冠脉注射硝苯地平( N i f e d i p i n e ) 7m a n ，缺血卮心收缩功能明显增瓣，虽再灌注时心塞纾维性颤动减少“，；但是辩灌注开始固时洼曩聿磷苯港平S O 趣，番搔掭帮漫有璐鑫馥善。( 三) 中性粒细臆撺划剥孛牲粒筑箍静夫爨聚蔡在再灌注攒伤麓发生孛遴饕重要捧霸，茭作霜祝截是遗过程进氧自凼基、蛋白水解酶和促炎症园子调节物释放，而

260、进一步加深粒细胞渗入损伤的心舰终缓中o 配。减缓犍缎礁舟导的。职矮侉趣途径奁去除粒绍胞、整接搏裁粒纲魏游产生帮细胞糙辩分子在粒懿魏及内斑纲耱袭嚣豹精聚。通过注射抗蒋可囊缓清豫粒缀髓而减少“溉艇流”区和糕骶面积( 3 7 ；3 8 ) 。蝴反，再灌注时，心脏灌注液中加入粒细胞明强加嚣挺麦学硬童学靛谗文重心聪秘糖障裂鞠。蟹溅肘，糙细胞始凝攘是沟通髓螂脓和虑皮绌飚潦面粘附分_ 孑芝阃联系的壤邋，遮静黢蘸 莲蓬豢藤嚣蹬磐、鞑嚣藕蔻掰3 鼬薄。这骜端辩努子塞塞予3 书家藏：建饕豢、艘婺台黼_ 卿免疫球萤翻趟家族。已有珊究通过抑谁4 分子粘酣箍减轻微绷胞介导姻撼惰，从而霄徽械小氍灌注撩攥。狮9 0 妇霜脉

261、赡托后第4 5 热注射单克隧撼体C D I I b C D l 8 ，熬最港褥螽或7 2 h 美瀵，豪瑰鑫飘棰麓露蘸簧委藏2 蛸；镶潼疗警竣鼹蘸莲鼙努蕊穗过减少粒细胞的集聚。挑外，猫群灌溉前1 0r a i n 注射I C A M ，I 、P 髓姆索、L 避择辩戏P E C A 。M I 躲撬髂，糨耀飚藕臻霹趋德观整臻步，心瓣梗蕊藤狡也下洚。这鳖裙究程躁蔻鬻藏澄满丧嚣蓬澈鞑瓣辫蠡发篷中趋爨鬟孬蓬。穗好簸强调的是，瓣灌注损伤不仪板其包括狡辩黻俞导的损偌漆伟。离体缓冲滚灌注的心麟瞧可落导心默摸撵( 顿拯、挺孤) 。此羚，露捧蠹磺究艘袋心瓿粒缨胀鬃黎潦乡著季鼹下瓣蘸琵瑟霉妒雒或竣善办秘糍，筵癸，袋避

262、奏文蘩菝遴游秣瓣务予I C A M - I卸P 躐撵豢基因敲羧大鼹在软盘霉激淀 霪程中，与辫恕型大鬣摆魄，牲细艟蔡聚穰辩有改联* 稷是攘嚣程靛躲没喜变化。( 四) 黼苻蠢姥心蕊孛窘寄竣。蕊浓度熟黢蛰，袋盛，霉灌遵遐粳串藩罄囊懿懋磷酸螽楚壤黪拳簿箕禽鬣氍显蘩舞。臻帑遴过存在乎娅瓤、斑蓉孚游瓤、巍囊缨藏黎糠壤笺衰嚣鹦袋律调节粼列不同的厦成隅1 ) 。此外，畿缺斑预处壤遄稔中，已证明躲瞥介导臀灌潍裰谯匏镙掺。强震歇魂豫然撼进嚣再溪注辩躁鞋，通过瓣繇注鲢骧蛰，辩器毒蠢蕊、蜮步蓑缀魏蕊聚爰摄琵瑟彀g 母。薄蠹礴究煎衮磺，再灌游辩藏弱辩注瓣旃霈往豫彗麟、蠢童帮A 3 爨搏罪型激动裁糍穗子减少心撰溅狡”邶)

263、 。骤棼鞫擦涮耱缨貔瞧悫寝表瑟浆糕瓣，甄壤爹鞭摇藏聪辫；F 谶粒缨悠套孕澳越蕊睨镪数黟垒，菝露整攥心懿僚护终磁獬。然嚣，毽毒些舔裁袋褒簸棼对程溱注损覆没嵩豫轳 事薅。H o m c i # c r 等天蹬瓣獭的冠脉蚺独注射腺瞢兹于锋阚，但是腺糟周利多卡因一趟渡射，梗死耐蠲减少o “。在髑一一7 2 新江大学硕士举使论文项实骧中，狗冠脉结扎1h 2 4h 复灌模型上，也米发现腺苷的保护作用；而注射腺苷A l 祁A 2 激动剂A M P5 7 9 却有显著疗效，说明该剂量的腺苷浓度可能不足5 ”。另外2瑷磷突簿发瑗骧营菠冀A l 激动裁爨蠢心蔽摄护俘蹋( 5 2 ；5 3 ) ，毽是凌予萁楚蠲豹魂

264、镑是受子，缺乏冠脉侧支循环，因此可能魑由于再灌注发擞时到达损伤心肌部位的药物浓度不够所致。( 5 4 )毒磅窕发褒猿蛰A l 受薅接藐裁霹藐参与臻蛊菱灌心虢糅护，获磊使褥事终复杂豫其作用机制可能悬与粒细胞有关。( 五) 蛰俸系统静撵雾j缺血复灌过程中补体系统激活( 图1 ) ，从而引起细胞膜中C 3 a 、C 4 a 、C 5 a 以及中间补体复合物的形成。这些补体因子通过增加细胞渗透性、组胺黢及血小板激活因子器藏瓣l l 起颦蕤囊镑。筵努，替俸颡子尤其是C 5 a ，蹙潜在麓粒缨施猫斑藉超氧纯物产生刺激因子”。c l 麟酶抑制剂5 ”、C 5 a 单克隆抗体、C 5 a 受体拈抗剂。可都可抑

265、制补体的级联反应，而减少缺血复灌后心肌的梗死面板。( 六) 一氧化氮内皮来源的N O 熙有广泛的生物举效应，在心肌缺血复灌过稷中也具有保护效应。N O 蹩静有效豹葑擞管耪厦，有麓予改善复灌霹的斑流；荠虽N O 还捧翻中毪鞍细缒在血管内皮细胞上的粘附。此外，N O 还是复灌过程中产生的超氧化物的清除剂。复灌后，超溉化物盼产生母致N O 失活及会成量减少，从两损伤了其生物学功能。内皮功能障碍笈生速度疆快，褥灌注lm m 后藏可戳或察8 9 “。离体大鬣心脏缺盘复灌后，镉依赖性N O 台酶活性显蒋下降o ”，表明内皮N O 是由结构型N O 合酶介导合成的。基于咀上研究发现，N O 台成的恢复或给予

266、外源性N O ，可以有助于减轻复灌损伤。不少研究在猫帮狗豹不同缺数复灌模型上，像表明注射N O 承溶液或N O 供体减少心瓿梗死面积6 “。此外，体内和体外实验也分别发现N O 前体L 。精氨酸有助于心梗面积下调和心功- 7 3 浙江大学硕士学位论文能的恢复6 1 ：6 “。L - 精氨酸的作用可被N O 合酶抑制剂阻断6 ”，而且D 一精氨酸无心肌保护作用徊) ，说明其作用机制是通过调节N O 的合成。复灌前或复灌同时给予L 精氨酸和N O 供体有助于减缓缺血损伤，表明N O 有抗再灌注损伤的作用。而且内皮N O 合酶基因敲除鼠与野生型大鼠相比，梗死面积较大，心功能恢复也较差( e 4 -

267、“，进一步证明内源性N O 具有抑制缺血复灌损伤的作用。另有研究发现在缺血复灌过程中，N O 有抗心律失常的作用。N O 供体抑制冠脉结扎猪心律失常的发生；而N O 合酶抑制剂增加离体大鼠和兔心脏再灌注过程中引起的心律失常的发生6 7 ，“) 。关于N O 心肌保护作用的可能机制有不同的解释( 图I ) 。有研究证明N O 供体和L 精氨酸通过抑制粘附分子( 如P 一选择素、I C A M 1 、V C A M 1 ) 唧表达而减少中性粒细胞在心肌再灌注区域的集聚。然而，L 精氨酸和N O 供体对离体灌注心脏也有心肌保护作用，说明还存在其他的保护机制6 2 1 。一种可能是抑制超氧化物的活性。

268、N O 可与缺血再灌注过程中产生的大量超氧化物快速反应，生成过( 氧化) 亚硝酸盐O N O O 一，后者在高浓度时具有很强的生物活性和细胞毒性。但是低剂量时却有心肌保护作用”。另外，由于N O 是一种潜在的舒血管物质，因此认为其可能有助于改善血流。P a b l a 等在在体研究中发现复灌过程中，冠脉注射N O 改善透壁血流( 7 ”；体外研究发现有助于减少无复流区域面积。然而，目前还不清楚这是否是N O 保护作用或心肌保护作用的最终效应机制。此外，还有研究发现N O 在缺血复灌过程中起有害作用，并且己在不同的缺虹复灌模型上证明抑制N O 合成减少梗死面积，改善心功能和减少心律失常的发生口2

269、 4 。F l o g e l 等也发现内皮N O 合酶基因敲除鼠缺血后心功能恢复有明显改善“。不同研究报道的结果不一致，对此的解释是N O 台酶抑制剂的特异性不高，不同实验条件下N O 合成的量不同，表达的N O 合酶的亚型也可能不同。另外，N O 和超氧化物生成的O N O O 一的浓度高低可能决定了N O 的最终效应。7 4 浙江大学硕士学位论文( 七) 内皮素1 受体拮抗剂内皮素1 ( E n d o t h e l i n 1 ，E T - I ) 来源于不同内皮细胞，是一种促血管收缩肽，但有研究发现包括血管平滑肌和心肌细胞在内的其他系统也参与合成E T - 1 。心肌缺血复灌过程中

270、E T - 1 合成量增多，其缩血管效应也增强。最初，有研究发现E T 1 单克隆抗体可直接使大鼠，t 3 肌梗死面积减小p “。之后运用选择性E T 受体拮抗剂也获得了相同的结果。在狗冠脉结扎9 0m i n 复灌5h 模型上，局部冠脉注射多肽性E T A 受体拮抗剂B Q1 2 3 后，心肌梗死面积下调4 0 ( 7 ”。另外，小分子非多肽选择性E T 和E T A E T B 杂台受体拮抗剂L u1 3 5 2 5 2 及B o s e n t a n 也有助于减小心梗面积( 7 8 - 8 0 ) ，而且2 种拮抗剂局部或全身注射所引起的心肌保护程度相同。因此，该效应可能通过存在于心肌

271、损伤区域中的E T A受体调节。目前，E T 受体拮抗剂心肌保护作用的机制还不清楚。由于E T - 1 是一种潜在性的缩血管物质，其受体拮抗剂可能通过促血管舒张而减少“无复流”现象的发生。另一种解释是E T 受体拮抗剂抑制中性粒细胞( 图1 ) 。E T A 受体拮抗剂L u1 3 5 2 5 2 明显改善复灌心脏的心功能“) 。E T 1 加强中性粒细胞在心脏中的集聚，并且该效应可被L U1 3 5 2 5 2所逆转。这些发现表明E T 1 促再灌注时中性粒细胞的集聚，而E T A 受体拮抗剂减缓粒细胞介导的心肌损伤。此外，E T 受体拮抗剂还可能抑制E T - 1 诱导的心肌超氧化物的产生

272、，并通过激活磷脂酶C 而增加细胞内钙水平8 ”。还有文献报道了有趣的发现，即E T 受体拈抗剂的心肌保护作用可能与N O 合成相关联。在猪冠脉结扎复灌模型上，E T 。受体拮抗剂L U1 3 5 2 5 2 减少心肌梗死面积的大小，但此作用可被N O 合酶抑制剂所逆转8 “。另外，N O 台酶阻断剂对L U1 3 5 2 5 2 心肌保护作用的遏制可被L 精氨酸所逆转”，表明其保护作用可能是通过促N O 产生而实现。也有一些研究发现内源性E T 1 具有致心律失常作用。u J1 3 5 2 5 2 减少猪心肌缺血时心室纤维性颤动的发生”，E ，r A 厄T B 受体拮抗剂T A K 0 4 4

273、 也下调大鼠心脏再灌注时心律失常的发生。对于E T 1 在缺血复灌过程中的作用也存在有争议性的报道。首先，缺血前注射外浙江大学硕士学位论文源性E T 1 减少心梗面积和心律失常的发生 ”。E T l 预处理效应通过E T A体，受到蛋白激酶c ( P r o t e i n k i r m s eC ，P K C ) 激活调节”。其次，有研究在不同的缺血复灌模型上不能得出E T 受体拮抗剂具有保护效应的结论泌，其原因目前还不能解释，可能与多肽药物的作用长短、给药途径、时间或者实验模型的差异有关。( 八) 肾素一血管紧张素系统抑制剂血管紧张素I I 是肾素血管紧张素系统( R e m n - a

274、 n t i o t e n s i ns y s t e m ，R A S ) 的主要产物，通过增强心肌和平滑肌细胞内钙水平而发挥其正性肌力作用，并改善心脏舒张功能( 图1 ) 。血管紧张素还是突触前神经末梢释放去甲肾上腺素( N o r e p i n e p t m n e tN E ) 的重要调节因子。血管紧张素I I 的这些生物学作用对心肌缺血复灌产生了有害影响。血管紧张素转换酶( A n g i o t e n s i nc o n v e r t i n ge n z y m e ，A C E ) 抑制剂减少心律失常的发生和心肌梗死面积，而改善心功能。卡托普利( c a p t

275、o p r i l ) 的抗心肌缺血复灌损伤作用可能与清除自由基有关，但有可能存在其他机制。A C E 不仅促血管紧张素I 转换为血管紧张素I I ，而且还参与缓激肽的降解，后者具有心肌保护效应。缓激肽B ：受体拮抗剂可阻断A C E 抑制剂的心肌保护作用( 9 “。已经证实血管紧张素I I 受体有2 个亚型A T l 和A T 2 。血管紧张素I I 的心血管效应主要是由A T 】所调节。在麻醉猪身上，A T I 受体阻断剂坎地沙坦( c a n d e s a r t a n ) 9 坫4 1 和E X P31 7 4 ( 9 5 显著下调心肌梗死面积。缺血前静脉注射A T l 受体阻断剂

276、或再灌注前直接作用于缺血心肌，都有助于心梗面积下调。A T I 受体阻断剂的作用机制不是通过改善再灌注过程中的血液动力学效应或心肌局部区域血流9 ”，可能是坎地沙坦或E X P3 1 7 4 通过抑制局部心脏血管紧张素I I 的作用而发挥心肌保护效应。P r e c k e l 等在近期的一项实验中，未发现A L 受体阻断剂依贝沙坦( i r b e s a r t a n ) 对1hL A D 结扎3h 复灌手术处理的狗有下调梗死面积的作用，尽管缺血前注射依贝沙坦增加了通往缺血区的侧支循环血流( 9 “。阻断A L 受体还有助于减少再灌注时心律失常的发生。A T t 。受体基因敲除大鼠复灌后

277、心肌早搏数明显低于野生型大鼠9 。浙江大学硕士学位论文A T l 受体被阻断后，可通过去除血管紧张素I I 的负反馈而上调血管紧张素水平，后者激活内皮细胞中的A T 2 受体，而促进缓激肽的合成( 9 7 ，从而发挥心肌保护作用。事实上，在麻醉猪身上，坎地沙坦产生的下调心梗面积作用可被A B 受体阻断剂P D1 2 3 3 1 9或缓激肽B 2 受体拮抗剂i c a t i b a n t 所消除9 ”。类似的在大鼠离体缺血复灌心脏上，A T 】受体阻断剂洛沙坦( 1 0 s a r t a n ) 恢复缺血后心脏功能的保护作用可被缓激肽B ：受体拮抗剂H O E1 4 0 所逆转。缓激肽B

278、：受体激活后通过激活环氧化酶和N O 合酶而促进前列腺环素及N O 的台成、释放唧) ，该作用可能是A T l 受体阻断剂心肌保护作用的机制。( 九) N a + I - I + 交换抑制剂抑制心肌N a + 8 - I + 交换( N a + H + e x c h a n g e N H E ) 在调节细胞内p H 和N a + 、c a 2 +离子平衡中被认为起着非常重要的作用( 9 9 ；I C O ) 。早期复灌过程中，N a + 皿+ 交换体抑制药物的保护作用机制可能通过2 条途径( 图1 ) 。第一，N a + H + 交换体被抑制后，心肌细胞H + 外流减少而保持早期复灌过程中

279、细胞内较低的p H 值，被认为具有抗再灌注损伤的保护作用。第二，抑制N a + H + 交换体减少N a + 内流而抑制C a 2 + 内流，从而减缓钙超载现象。N H E 抑制剂H O E 6 9 4 预处理可明显下调猪的心梗面积”1 ：”，复灌前短时间H O E 一6 9 4 处理也获得相同结果) 。为了证明后一研究结果，L i n z ( 】并口G u m i n a 1 0 4 ) 等人分别在兔和狗模型上观察到再灌注前短时间N I - I E 抑制剂c a r i p o r i d e 和E M D 一8 5 1 31 有类似的保护作用。但是另外3 项实验在猪和兔模型上却没有发现c

280、a r i p o r i d e 的保护作用，不能说明N H E 抑制剂是限制复灌引起的致命性损伤的最佳药理学治疗手段。另外，对复灌时给N I l E 抑制剂处理是否减少心肌顿抑的发生，也存在着不少阳性和阴性结果报道】0 5 ；1 0 “。然而，对N H E 抑制复灌引起的心律失常的保护作用则有一致性的报道。在大鼠缺血复灌处理的心脏上，H O E 6 9 4 或c a r i p o r i d e 浓度依赖性地抑制再灌注引起的心室纤维性颤动的发生m ”。在猪和狗动物模型上，也观察到了N H E 抑制剂的类似效应”，”。7 7 浙江大学硕士学位论文( 十) 阿片类物质阿片类物质在外周心血管器

281、官系统的分布非常广泛，包括心脏、交感神经和肾上腺髓质；并且心脏_ “o 和心肌细胞4 1 均能台成3 种阿片肽物质( 脑啡肽、内啡肽和强啡肽) 。应激状况如心肌缺血可诱导阿片肽的合成及分泌( 1 1 5 ；1 1 6 ) ，临床研究也证明急性心肌缺血或血管成形术治疗的患者体内口一内啡肽水平较高( t t 6 ) 。阿片类物质可与存在心肌上的阿片受体结合，抑制心脏钙超载而减缓复灌损伤“”。S c h u l t z 等人于1 9 9 5 年发现大鼠缺血预处理的保护作用可被非选择性阿片受体拮抗剂n a l o x o n e 所阻断，而首次报道了阿片类物质可能参与缺血预处理的研究结果。大鼠持久性冠

282、脉结扎前1 0m i n 皮下注射外源性阿片类物质吗啡( 3m g k g ) ，4 8h 后心肌梗死面积减小4 0 左右( “”。T a k a s a k i 等研究发现外源性阿片类物质吗啡具有与缺血预处理类似的心肌保护作用，并且该效应可被n a l o x o n e 阻断( ”。非选择性I P 敏感性钾通道拮抗剂g l i b e n e l a m i d e 和线粒体K T P 拮抗剂5 - H D 也都能阻断吗啡抗心肌细胞缺血复灌损伤的作用埘，表明吗啡可能通过激活线粒体码。通道而发挥保护作用。此外，吗啡还能促进低血压患者心肌保护因子腺苷的释放) 。关于其作用机制，研究发现阿片类物

283、质诱导的心肌保护作用可能共享缺血预处理的信号作用通路。A T P 敏感性钾通道、G 蛋白”“、P K C ( 1 2 3 ) 、酪氨酸激酶T I C s ( ”4 可能分别参与介导阿片类物质的保护作用途径。在临床上也有不少研究发现6 阿片受体激活具有心肌保护作用。T o m a i 与其同事们发现n a l o x o n e 抑制多次球囊血管成形手术患者对缺血的适应性”，也有临床研究发现冠脉注射吗啡对经皮腔内冠状动脉成形术患者具有模拟缺血预处理的作用。这些研究结果为阿片类物质在临床上用于急、慢性心肌缺血的治疗提供了依据。( 十一) 抗凋亡因子越来越多的研究表明致死性再灌注损伤可能由细胞死亡的

284、2 个环节所组成：坏死和橱亡( 即程序性细胞死亡) 。缺血发生后的短时间内引起凋亡发生，再灌注时由于高能7 8 浙江大学硕士学位论文量磷酸盐物质的补充、胞浆及线粒体内钙超载的发生、氧自由基的产生等原固进一步增强了凋亡的发生( 1 2 6 ) 。凋亡抑制剂有助于下调与复灌相关联的不可逆损伤的发生，该假说最近被M o c a n u 等人的实验所证明”。复灌早期，参与凋亡发生的关键性蛋白酶c a s p a s e 抑制剂处理明显下调离体大鼠心脏的梗死面积。外源性S O D 和过氧化氢酶处理也可抑制缺血再灌注过程中细胞凋亡的发生，表明凋亡的发生可能与氧应澈有关”。此外，凋亡的发生也能被粒细胞浸润相

285、关补体c 5 的单克隆抗体所抑制”。这些研究结果表明凋亡可作为复灌引起的致死性损伤治疗的重要作用窗。( 十二) 药物联合治疗心肌再灌注损伤可能是有多种作用机制所引起的复杂过程。目前这些机制间的关系还不清楚。多种药物联合治疗减缓复灌损伤的现象表明存在多种启动因子或一系列事件。比较多种不同药物联合治疗及各种药物单独治疗疗效的区别是研究的方法之一。在猪缺血复灌动物模型上，S h i m i z u 等研究了钙拮抗剂非洛地平( f e l o d i p i n e ) 、脂质过氧化抑制剂H 2 9 0 5 1 和蛆1 1 受体阻断剂坎地沙坦的联合作用和单独作用( ”0 ) 。再灌注时通过冠状静脉逆行

286、分别单独注射3 种药物，心肌梗死面积减小程度相同：有趣的是，3 种药物联合注射较单独给药处理，心梗面积有明显减少。在另一项研究中，W e i d i n b a c h 等人在猪9 0r a i n 低血流缺I 1 2 0m i n 复灌模型上发现，单独A C E 抑制剂r a r m p r i l a t 和A T l受体阻断剂坎地沙坦处理，心梗面积均下调5 0 左右，2 者联合作用则进一步减少心梗面积9 4 ) 。对其机制的解释目前还不清楚。一种可能性是这些药物通过不同的途径起作用，因此联合给药时的保护作用要大于单独给药的作用。另一解释是常规保护调节因子的作用被增强，例如缓激肽N O ，

287、其参与A C E 抑制剂、A T 。受体阻断剂和E T 一1 受体拮抗剂的心肌保护作用( 图1 ) 。( 十三) 药物对不同冠脉疾病模型缺血复灌损伤的作用7 9 浙江大学硕士学位论文在具有正常血管功能的动物上进行的大量研究数据证明了缺血复灌损伤保护。然而，在临床上，大多数急性心梗患者伴随着冠脉疾病高危险因子，包括血胆固醇过多、糖尿病、高血压和动脉粥样硬化等。不能确定以上讨论的药物对这些患者是否还具有类似的心肌保护作用。如上文提到的，N O 与A C E 抑制剂和E T 1 受体拮抗剂的心肌保护作用密切相关，但冠脉疾病高危险因子患者体内N O 的生物学活性可能被削弱，从而下调了一些药物治疗的有效

288、性。在血液胆固醇水平正常的动物身上，S i m v a s t a t i n 通过促进N O 合成途径减轻缺血复灌损伤”。对载脂蛋白E 缺乏的大鼠喂食高胆固醇食物后，S i m v a s t a t i n 仍旧能够减缓中性粒细胞的集聚、减少心梗面积”2 ) 。高胆固醇血症兔子缺血预处理作用被钝化，但是有意思的是，P r a v a s t a t i n 却能逆转这种钝化”。此外，p 肾上腺素受体阻断剂卡维地洛也具有抗氧化作用，能够减少高胆固醇血症兔子的心梗面积( 1 3 4 ) 。在糖尿病大鼠模型上进行的研究发现，C D l 8 单抗抑制粒细胞集聚，而减缓缺血复灌损伤“”。这些研究结果

289、说明上文所提及的这些药物中还是有部分对不同冠脉疾病的动物模型具有心肌保护作用。目前的研究证明使用不同的药物干预可能有助于减缓心肌缺血复灌损伤，并且在血管正常及高胆固醇血症、动脉粥样硬化动物模型上都取得了阳性的治疗结果。但是其中一个重要问题是这些药物在临床上是否也具有类似的保护作用。上文提到的许多药物目前己在临床上使用。因此，在P T C A 过程中通过球囊导管局部给这些药物治疗，也许有助于阐明这些药物在临床上使用的方便性。最近，有不少临床研究通过冠脉给腺苷( 】”和c a r i p o r i d e ( ”作为辅助治疗，获得了令人兴奋的结果。考虑到这些临床试验的规模较小，因此还需要进行大规

290、模的临床研究才能确定这些药物在急性心梗治疗中的重要性。8 0 浙江大学硕士学位论文参考文献【1 】F a r bA ，K o l o d g i eF D ，J e n k i n sM ，V i r m a n iR M y o c a r d i a li n f a r c te x t e n s i o nd u r i n gr e p e r f u s i o na f t e rc o r o n a r ya r t e r yo c c l u s i o n ：p a t h o l o g i ce v i d e n c e JA mC o i lC a r d i

291、 o l1 9 9 3 ；2 l ( 5 ) ：1 2 4 5 1 2 5 3 2 】F r a m eL H ，L o p e zJ A , K h a wB A ，F a l l o nJ T ，H a b e rE ，P o w e l lW J ，J r E a r l ym e m b r a n ed a m a g ed u r i n gc o r o n a r yr e p e r f n s i o ni nd o g s D e t e c t i o nb yr a d i o l a b e l e da n t i c a r d i a cm y o s i n

292、 ( F a b 。1 2 Jc l mI n v e s t1 9 8 3 ；7 2 ( 2 ) ：5 3 5 5 4 4 3 M a t s a m u r aEJ e r e m yR W ，S c h a p e rJ ，B e c k e rL C P m g r e s s i o no fm y o c a r d i a ln e c r o s i sd u r i n gr e p e r f u s i o no f i s c h e m i cm y o c a r d i u m C i r c u l a t i o n1 9 9 8 ；9 7 ( 8 ) ：7

293、9 5 - 8 0 4 I n G a n zW D i r e c tD e m o n s t r a t i o ni nD o g so ft h eA b s e n c eo fL e t h a lR e p e r f u s i o nI n j u r y JT h r o m bT h r o m b o l y s i s1 9 9 7 ；4 ( 1 ) ：1 0 5 - 1 0 7 【5 】5S c h a p e rW ，S c h a p e rJ R e p e r f u s i o n 删u r y ：A no r I i n i o n a t e dV

294、i e w JT h r o m bT h r o m b o l y s i s1 9 9 7 ；4 ( 1 ) ：1 1 3 1 1 6 6 】A m b r o s i oG ，T r i t t oI R e p e r f u s i o ni n j u r y ：e x p e r i m e n t Me v i d e n c ea n dc l i n i c a lm a p l i e a f i o n s A mH e a r tJ1 9 9 9 ；1 3 8 ( 2P t2 1 ：s 6 9 - $ 7 5 7 P a r k 几，L u c e h e s iB

295、 I LM e c h a n i s m so f m y o c a r d i a lr e p e r f u s i o ni n j u r y A n nT h o r a cS u r g1 9 9 9 ；6 8 ( 5 ) ：1 9 0 5 - 1 9 1 2 8 P i p e rH M ，G a r c i a - D o m d oD ，O v i z eM Af r e s hl o o ka tr e p e r f u s i o ni n j u r y - C a r d i o v a s cR e s1 9 9 8 ；3 8 ( 2 ) ：2 9 1 -

296、3 0 0 9 】R y d e nL ，T a d o k o mH ，S j o q u i s tP Oe ta 1 P h a r m a c o k i n e t i ca n a l y s i so fc o r o n a r yv e n o u sr e t r o i n f u s i o n ：ac o m p a r i s o nw i t ha n t e r o g r a d ec o r o n a r ya r t e r yd r u ga d m i n i s t r a t i o nu s i n gm e t o p r o l o la

297、sa t r a c e r J A m C o l l C a r d i o l1 9 9 1 ；1 8 ( 2 ) ：6 0 3 6 1 2 【l O B e a r dT ，C a r r i eD ，B o y e rM Je ta 1 P r o d u c t i o no fo x y g e nf r e er a d i c a l si nm y o c a r d i a li n f a r c t i o nt r e a t e db yt h r o m b o l y s i s A n a l y s i so fg l u t a t h i o n ep

298、 e r o x i d a s e ，s u p e m x i d ed i s m u t a s ea n dm a l o n d i a l d e h y d e A r c hM a lC o e u rV a i s s1 9 9 4 ；8 7 ( 1 0 ) ：1 2 8 9 1 2 9 6 1 1 R o b e r t sM J ，Y o u n gI S ，T r o u t o nT Ge ta 1 T r a n s i e n tr e l e a s eo fl i p i dp e r o x i d e sa f t e rc o r o n a r ya

299、 r t e r yb a l l o o na n g i o p l a s t y L a n c e t1 9 9 0 ；3 3 6 ( 8 7 0 8 ) ：1 4 3 _ 1 4 5 8 1 浙江大学硕士学位论文 1 2 J o l l yS R ，K a r l eW J ，B a l l i eM B ，A b r a m sG D ，L u c c h e s iB R C a n i n em y o c a r d i a lr e p e r f u s i o ni n j u r y I t sr e d u c t i o nb yt h ec o m b i n

300、 e da d m i n i s t r a t i o no fs u p e r o x i d ed i s m u m s ea n dc a t a l a s e C i mR e s1 9 8 4 ；5 4 ( 3 ) ：2 7 7 - 2 8 5 1 3 H a t o r iN ，T a d o k o r oH ，S a t o m u r aKe ta 1 B e n e f i c i a le f f e c t so fc o r o n a r yv e u o u sr e t r o i n f u s i o nb u tn o tl e f ta t r

301、 i a la d m i n i s t r a t i o no fs u p e m x i d ed i s m u t a s eo nm y o c a r d i a ln e c r o s i si np i g s E u rH e a r tJ1 9 9 1 ；1 2 ( 3 ) ：4 4 2 - 4 5 0 1 4 A l t a v i l l aD ，D e o d a t oB ，C a m p oG Mc ta 1 I R F l0 4 2 ，an o v e ld u a lv i t a m i nE l i k ea n t i o x i d u n t

302、 ，i n h i b i t sa c t i v a t i o no fn u c l e a rf a c t o r - k a p p a Ba n dr e d u c e st h ei n f l a m m a t o r yr e s p o n s ei nm y o c a r d i a li s c h e m i a - r e p e r f u s i o ni n j u r y C a r d i o v a s cR e s2 0 0 0 ；4 7 ( 3 ) ：5 1 5 - 5 2 8 【1 5 】S h i m i z uM ，W a n gQ

303、D ，S j o q u i s tP O ，R y d e nL T h el i p i dp e m x i d a t i o ni n h i b i t o ri n d e n o i n d o l eH 2 9 0 5 1p r o t e c t sm y o c a r d i u ma tr i s ko fi n j u r yi n d u c e db yi s c h e m i a - r e p e r f u s i o n F r e eR a d i oB i o lM e d1 9 9 8 ；2 4 ( 5 ) ：7 2 6 7 31 【1 6 】N

304、 e j i m aJ ，K n i g h tD R , F a l l o nJ Te ta 1 S u p e r o x i d ed i s m u t a s er e d u c e sr e p e r f u s i o na r r h y t h m i a sb u tf a i l st os a l v a g er e g i o n a lf u n c t i o no rm y o c a r d i u ma tr i s ki nc o n s c i o u sd o g s C i r c u l a t i o n1 9 8 9 ；7 9 ( 1

305、) ：1 4 3 - 1 5 3 1 7 】M e h t aJ L ，N i c h o l sw w ，S a l d e e nT Ge ta 1 S u p e r o x i d ed i s m u t a s ed e c r e a s e sr e p e r f u s i o na r r h y t h m i a sa n dp r e s e r v e sm y o c a r d i a lf u n c t i o nd u r i n g t h r o m b o l y s i sw i t ht i s s u ep l a s m i n o g e

306、 na c t i v a t o r JC a r d i o v a s cP h a m l a c o l1 9 9 0 ；1 6 ( 1 ) ：1 1 2 1 2 0 【1 8 】B o l l iR ，J e m u d iM O ，P a t e lB Se ta 1 M a r k e dr e d u c t i o no ff l e er a d i c a lg e n e r a t i o na n dc o n t r a c t i l ed y s f u n c t i o nb ya n t i o x i d a n tt h e r a p yb e

307、g u na tt h et i m eo fr e p e r f u s i o n E v i d e n c et h a tm y o c a r d i a l “s t u n n i n g ”i sai l m m f e s t a t i o no fr e p e r f u s i o ni n j u r y C i r cR e s1 9 8 9 ；6 5 f 3 ) ：6 0 7 6 2 2 1 9 】U m i z e eA ，R e i m e rK A ，M u r r yC E ，J e n n i n g sR B F a i l u r eo fs

308、u p e r o x i d ed i s m u t a s et ol i m i ts i z eo fm y o c a r d i a li n f a r c t i o na f t e r4 0m i n u t e so fi s c h e m i aa n d 4d a y so fr e p e r f u s i o ni nd o g s C i r c u l a t i o n1 9 8 7 ；7 5 ( 6 ) ：1 2 3 7 1 2 4 8 2 0 V e n m r i n iC M ，F l i c k i n g e rA G ，W o m a c

309、 kC R , S m i t hM E ，M c M a h o nE G T h eA n t i o x i d a n t ，N - ( 2 - m e r c a p t o p r o p i o n y l ) - g l y c i n e ( M P G ) ，D o e sN o tR e d u c eM y o c a r d i a lI n f a r c tS i z ei na l lA c u t eC a n i n eM o d e lo fM y o c a r d i a lI s c h e m i aa n dR e p e r f u s i o

310、 n JT h r o m bT h r o m b o l y s i s1 9 9 8 ；5 ( 2 ) ：1 3 5 1 4 1 8 2 浙江大学硕士学位论文【2 1 】W a t a n a b eB I ，P r e m a r a m eS ，L i m mW ，M u g i i s h iM M ，M c N a m a r aJ J 。H i g h - a n dl o w - d o s es u p e m x i d ed i s m u t a s ep l u sc a t a l a s ed o e sn o tr e d u c em y o c a r d

311、 i a li n f a r c ts i z ei nas u b h u m a np r i m a t em o d e l A mH e a r tJ1 9 9 3 ；1 2 6 ( 4 ) ：8 4 0 - 8 4 6 【2 2 】K u k r e j aR C ，J a n i nY 。R e p e r f u s i o nI n j u r y ：B a s i cC o n c e p t sa n dP r o t e c t i o nS l r a t e g i e s JT h r o m bT h r o m b o t y s i s1 9 9 7 ；4

312、 ( 1 ) ：7 - 2 4 。 2 3 W a n gP ，C h e nH ，Q i nHe ta 1 O v e r e x p r e s s i o no fh u m a nc o p p e r ，z i n c - s u p e r o x i d ed i s m u t a s e ( S O D l ) p r e v e n t sp o s t i s c h e m i ci n j m y P r o cN a i lA c a dS c iUSAt 9 9 8 ；9 5 ( 8 ) ：4 5 5 6 - 4 5 6 0 。【2 4 lG a r c i a

313、- D o r a d oD ，T h e r o u xP ，F e m a n d e z - A v i l e sF ，E l i z a g aJ ，S o l a r e sJ ，G a l i n a n e sM D i l t i a z e ma n dp r o g r e s s i o no fm y o c a r d i a li s c h e m i cd a m a g ed u r i n gc o r o n a r ya r t e r yo c c l u s i o n a n d r e p e r f u s i o n i n p o r c

314、 i n e h e a r t s j A m C o l l C a r d i o t1 9 8 7 ；1 0 ( 4 ) ：9 0 6 - 9 1 1 2 5 】K n a b bR M ，R o s a m o n dT L ，F o xK A ，N o b e lB E ，B c r g n m n nS R E n h a n c e m e n to f s a l v a g eo fr e p e r f u s e di s c h e m i cm y o c a r d i n mb yd i l t i a z e m JA mC o l lC a r d i o

315、l1 9 8 6 ；8 ( 4 ) ：8 6 1 - 8 7 1 f 2 6 1V a t n e rS F , P a t r i c kT A ，K n i g h tD M a n d e 搭W T ，F a l l o nJ T E f f e c t so f c a l c i u mc h e r m e lb l o c k e ro nr e s p o n s e so fb l o o df l o w ，f u n c t i o n , a r r h y t h m i a s ，a n de x t e n to fi n f a r c t i o nf o l

316、 l o w i n gr e p e r f u s i o ni nc o n s c i o u sb a b o o n s C i r cR e s1 9 8 8 ；6 2 ( 1 ) ：1 0 5 * 11 5 【2 7 1H a t o r i N ，H a g a Y ，S j o q u i s t P O ，N o r d l a n d e r M ，R y d e n b C o m n a r y v e n o u sr e t r o i n f u s i o no ff e l o d i p i n er e d u c e sm y o c a r d i

317、 a ln e c r o s i sa f t e rc o r o n a r yo c c l u s i o na n dr e p e r f u s i o n + jC a r d i o v a s cP h a n n a c o l1 9 9 3 ；2 2 ( 1 ) ：1 6 0 1 6 6 【2 8 H e r z o gW R V o g e lR A , S c h t o s s b e r gM L ，E d e n b a u mL R ，S c o R 脚，S e r e b r a a n yV L S h o 靠- t e r ml o wd o s e

318、i n t r a c o r o n a r yd i l t i a z e ma d m i n i s t e r e d 蕺t h eo n s e to fr e p e r f u s i o nr e d u c e sm y o c a r d i a li n f a r c ts i z e h a tJC a r d i o l1 9 9 7 ；5 9 ( 1 ) ：2 1 - 2 7 2 9 K l e i nH H ，P i c hS ，L m d e r tS ，N e b e n d a h l 琏W a r n e k eG ，K r e u z e rH T

319、 r e a t m e n to fr e p e f f u s i o ni n j u r yw i t hi n t r a c o r o n a r yc a l c i u mc h a n n e la n t a g o n i s t sa n dr e d u c e dc o r o n a r yf r e ec a l c i u mc o n c e n t r a t i o ni nr e g i o n a l l yi s c h e m i c ，r e p e r f u s e dp o r c i n eh e a r t s 。JA mC o

320、l lC a r d i 0 11 9 8 9 ；1 3 ( 6 ) ：13 9 5 - t 4 0 1 【3 0 T a d o k o r oH ，M i y a z a k iA ，S a t o m u r aKe ta 1 I n f a r c ts i z er e d u c t i o nw i t hc o r o n a r yV O I I O U Sr e t r o i n f u s i o no fd i l t i a z e mi nt h ea c u t eo c c l u s i o n m p e r f u s i o np o r c i n

321、eh e a r tm o d e l ，C a r d i o v a s cP h a r m z c o l1 9 9 6 ；2 8 ( 1 ) ：1 3 4 1 4 1 - 8 3 -浙江大学硕士学位论文【3 1 K l e i n H H ，S c h u b o t h e M ，N e b e n d a h l K K r e u z e r H T h ee f f e c to f t w o d i f f e r e n t d i l t i a z e mt r e a t m e n t so ni n f a r c ts i z ei ni s c h e m

322、 i e ，r e p e r f a s e dp o r c i n eh e a r t s C i r c u l a t i o n1 9 8 4 ；6 9 ( 5 ) ：1 0 0 0 1 0 0 5 3 2 M u l l e rC A ，O p i eL H ，M c C a r t h yJ ，H o f m a n nD ，P i n e d aC A ，P e i s a c hM E f f e c t so fm i b e f r a d i l ，an o v e lc a l c i u mc h a n n e lb l o c k i n ga g e n

323、tw i t hT - t y p ea c t i v i t y , i na c u t ee x p e r i m e n t a lm y o c a r d i a li s c h e m i a ：m a i n t e n a n c eo fv e n t r i c u l a tf i b r i l l a t i o nt h r e s h o l dw i t h o u t i n o t r o p i cc o m p r o m i s e J A m C o l l C a r d i o l l 9 9 8 ；3 2 ( 1 ) ：2 6 8 2

324、7 4 3 3 O p i eL H ，C o e t z e eW A ，D e n n i sS C ，T h a n d r o y e nF T Ap o t e n t i a lr o l eo fc a l c i u mi o n si I le a r l yi s c h e m i ca n dr e p e r f u s i o na r r h y t h m i a s A n nN YA c a dS c i1 9 8 8 ；5 2 2 ：4 6 4 - 4 7 7 3 4 】S m a r tS C ，S a g a rK B ，W a r l t i e r

325、D C D i f f e r e n t i a lr o l e so f m y o c a r d i a lC a 2 + c h a n n e l sa n dN a + c a 2 + e x c h a n g ei nm y o c a r d i a lr e p e r f u s i o ni n j u r yi no p e nc h e s td o g s ：r e l a t i v er o l e sd u r i n gi s c h e m i aa n dr e p e r f u s i o n C a r d i o v a s cR e s1

326、 9 9 7 ；3 6 ( 3 ) ：3 3 7 3 4 6 1 3 5 1J o r d a nJ E ，Z h a oZ Q ，V i n t e n - J o h a t m e nJ T h er o l eo fn e u t r o p h i l si nm y o c a r d i a li s e h e m i a - r e p e r f u s i o ni n j u r y C a r d i o v a s cR e s1 9 9 9 ；4 3 ( 4 ) ：8 6 0 - 8 7 8 3 6 】H a n s e nP R R o l eo fn e u

327、t r e p h i l si nm y o c a r d i a li s c h e m i aa n dr e p e r f o s i o n C i r c u l a t i o n1 9 9 5 ；9 1 ( 6 ) ：1 8 7 2 1 8 8 5 【3 7 】L i t tM R ，J e r e m yR W ，W e i s m a nH F ，W i n k e l s t e i nJ A ，B e c k e rL C N e u t r o p h i ld e p l e t i o nl i m i t e dt or e p e r f u s i o

328、 nr e d u c e sm y o c a r d i a li n f a r e ts i z ea f t e r9 0m i n u t e so fi s c h e m i a E v i d e n c ef o rn e u t r o p h i l m e d i a t e dr e p e r f u s i o ni n j u r y C i r c u l a t i o n1 9 8 9 ；8 0 ( 6 ) ：1 8 1 6 1 8 2 7 3 8 R o m s o nJ L , H o o kB G ，K a n k e lS L ，A b r a

329、m sG D ，S c h o r kM A ，L u c c h e s iB R R e d u c t i o no ft h ee x t e n to fi s c h e m i cm y o c a r d i a l 蛔u r yb yn e u t r o p h i ld e p l e t i o ni nt h ed o g C i r c u l a t i o n1 9 8 3 ；6 7 ( 5 ) ：1 0 1 6 1 0 2 3 3 9 S h a n d e l y aS M ，K u p p u s a m yP ，W e i s f e l d tM L

330、，Z w e i e rJ LE v a l u a t i o no ft h er o l eo fp o l y m o r p h o n u c l e a rl e u k o e y t e so nc o n t r a c t i l ef u n c t i o ni nm y o c a r d i a lr e p e f f u s i o ni n j u r y E v i d e n c ef o rp l a s m a - m e d i a t e dl e u k o c y t ea c t i v a t i o n C i r c u l a t

331、i o n1 9 9 3 ；8 7 f 2 ) ：5 3 6 5 4 6 4 0 】L e f e rA M R o l eo ft h eb e t a 2 - i n t e g r i 2 sa n di n t m u n o g l o b u l i ns a p e r f a m i l ym e m b e r si nm y o c a r d i a li s c h e m i a - r e p e f f u s i o n A n nT h o r a cS u r g1 9 9 9 ；6 8 ( 5 ) ：1 9 2 0 1 9 2 3 【4 1 】S i m

332、p s o nP J ，T o d dR F ，I I I ，F a n t o n eJ C ，M i c k e l s o nJ K , G r i f f i nJ D ，L u c c h e s iB R R e d u c t i o n o fe x p e r i m e n t a lc a n i n em y o c a r d i a lr e p e r f u s i o ni n j u r yb yam o n o c l o n a l8 4 浙江大学硕士学位论文a n t i b o d y ( a n t i M o l ，a n t i - C D l

333、l b ) t h a ti n h i b i t sl e u k o c y t ea d h e s i o n JC l i nI n v e s t1 9 8 88 1 ( 2 ) ：6 2 4 6 2 9 4 2 】S u n p s o nP J ，T o d dR F ，I I I ，M i c k e l s o nJ Ke ta lS u s t a i n e dl i m i t a t i o no fm y o c a r d i a lr e p e r f u s i o ni n j u r yb yam o n o c l o n a la n f i b

334、 o d yt h a ta l t e r sl e u k o c y t ef u n c t i o n C i r c u l a t i o n1 9 9 0 ；8 1 ( 1 ) ：2 2 6 - 2 3 7 【4 3 L i b e r s a nD ，Q u a nE ，M e r h iY ，U z a nA ，L a p e m e r eL ，L a t o u rJ G I n 仃a v e n o u sa s p i r i na tr e p e r f u s i o nd o e sn o tr e d u c ei n f a r c ts i z ei

335、nt h ed o gw i t har e s i d u a lc r i t i c a ls t e n o s i s JC a r d i o v a s cP h a r m a c o l1 9 9 9 ；3 4 ( 舢：5 7 5 5 8 3 ( 4 4 T o f u k u j iM ，M e t a l sC ，C o l l a r dC De ta 1 E f f e c to fs i a l y lL e w i s ( x ) o l i g o s a c c h a r l d eo nm y o c a r d i a la n dc e r e b r

336、 a li n j u r yi nt h ep i g A r mT h o r a cS u r g1 9 9 9 ；6 7 ( 1 ) ：11 2 - 1 1 9 4 5 B r i a n dS A ，D i n gZ M ，M i c h a e lL H ，E n t m a nM L ，D a n i e lS ，B a U a n t y n eC M L e u k o c y t et r a f f i c k i n ga n dm y o c a r d i a lr e p e r f u s i o ni n j u r yi nI C A M - 1 P - s

337、 e l e c t i n - k n o c k o u tm i c e A mJP h y s i o lH e a r tC i r eP h y s i o l2 0 0 1 ；2 8 0 ( 1 ) ：H 6 0 一H 6 7 1 4 6 O l a f s s o nB ，F o r m a nM B ，P u e t tD We ta 1 R e d u c t i o no f r e p e r f u s i o ni n j u r yi nt h ec a n i n ep r e p a r a t i o nb yi n t r a c o m n a r ya

338、 d e n o s i n e ：i m p o r t a n c eo ft h ee n d o t h e l i u ma n dt h en o - r e f l o w p h e n o m e n o n C i r c u l a t i o n1 9 8 7 ；7 6 ( 5 ) ：1 1 3 5 1 1 4 5 4 7 J o r d a nJ E ，T h o u r a n iV H ，A u c h a m p a c hJ A ，R o b i n s o nJ A ，W a n gN P ，V i n t e n - J o h a n s e nJ A

339、( 3 )a d e n o s i n er e c e p t o ra c t i v a t i o na t t e n u a t e sn e u t r o p h i lf u n c t i o na n dn e n t r o p h i l - m e d i a t e dr e p e r f u s i o nm j u r y ，A mJP h y s i o l1 9 9 9 ；2 7 7 ( 5P t2 ) ：H 1 8 9 5 - H 1 9 0 5 4 8 】N o a o nE D ，J a c k s o nE K ，T u r n e rM B

340、，V i r m a n iR ，F o r m a nM B T h ee f f e c t so fi n t r a v e n o u si n f u s i o n so fs e l e c t i v ea d e n o s i n eA l - r e c e p t o ra n dA 2 - r e c e p t o ra g o n i s t so nm y o c a r d i a lr e p e r f u s i o ni n j u r y A mH e a r tJ1 9 9 2 ；1 2 3 ( 2 ) ：3 3 2 - 3 3 8 4 9 】B

341、 l a c kS C I nv i v om o d e l so f m y o c a r d i a li s c h e m i aa n dr e p e r f u s i o n 屿u r y ：a p p l i c a t i o nt od r u gd i s c o v e r ya n de v a l u a t i o n JP h a n r m c o lT o x i e o lM e t h o d s2 0 0 0 ；4 3 ( 2 ) ：1 5 3 - 1 6 7 【5 0 】H o m e i s t e rJ W ，H o f f P T ，F

342、l e t c h e rD D ，L a n c h e s iB R C o m b m e da d e n o s i n ea n dl i d o c a i n ea d m i n i s t r a t i o nl i m i t sm y o c a r d i a lr e p e r f u s i o n 坷u r y C i r c u l a t i o n1 9 9 0 ；8 2 ( 2 ) ：5 9 5 6 0 8 【5 1 B u d d eJ M ，V e l e zD A ，z I I a oZe ta 1 C o m p a r a t i v es

343、 t u d yo fA M P 5 7 9a n da d e n o s i n ei ni n h i b i t i o no fn e u t r o p h i l m e d i a t e dv a s c u l a ra n dm y o c a r d i a li n j u r yd u r i n g2 4 ho fr e p e r f u s i o n C a r d i o v a s cR e s2 0 0 0 ；4 7 ( 2 ) ：2 9 4 - 3 0 5 8 5 浙江大学硕士学位论文 5 2 】B a x t e rG F ，H a l es L

344、，M i k iTe ta 1 A d e n o s i n eA 1a g o n i s ta tr e p e r f u s i o nt r i a l ( A A R T )r e s u l t so fat h r e e - c e n t e r , b l i n d e d ，r a n d o m i z e d ，c o n t r o l l e de x p e r i m e n t a li n f a r c ts t u d yC a r d i o v a s cD r u g sT h e r2 0 0 0 ；1 4 ( 6 ) ：6 0 7 -

345、6 1 4 5 3 G o t oM ，M i u r aT ，I l i o d o r o m i t i sE Ke ta 1 A d e n o s i n ei n f u s i o nd u r i n ge a r l yr e p e r f u s i o nf a i l e dt ol i m i tm y o c a r d i a li n f a r c ts i z ei nac o l l a t e r a ld e f i c i e n ts p e c i e s C a r d i o v a s cR e s1 9 9 1 ；2 5 ( 1 1 )

346、 ：9 4 3 9 4 9 5 4 F o r m a nM B ，V i t o l aJ V ，V e l a s c oC E ，M u r r a yJ J ，D u b e yR K ，J a c k s o nE K S u s t a i n e dr e d u c t i o ni nm y o c a r d i a lr e p e r f u s i o ni n j u r yw i t ha na d e n o s i n er e c e p t o ra n t a g o n i s t ：p o s s i b l er o l eo ft h en e

347、u t r o p h i lc h e m o a t t r a c t a n tr e s p o n s e JP h a r m a c o lE x pT h e r2 0 0 0 ；2 9 2 ( 3 ) ：9 2 9 - 9 3 8 5 5 B u e r k eM ，M u r o h a r aT ，L e f e rA M C a r d i o p m t e c t i v ee f f e c t so faC 1e s t e r a s ei n h i b i t o ri nm y o c a r d i a li s c h e m i aa n dr

348、e p e r f n s i o n C i r c u l a t i o n1 9 9 5 ；9 1 ( 2 ) ：3 9 3 - 4 0 2 5 6 A m s t e r d a mE A ，S t a h lG L , P a nH L ，R e n d i gS V ，F l e t c h e rM P ，L o n g h u r s tJ C L i m i t a t i o no fr e p e r f u s i o ni n j u r yb yam o n o c l o n a la n t i b o d yt oC 5 ad u r i n gm y o

349、c a r d i a li n f a r c t i o ni np i g s A mJP h y s i o l1 9 9 5 ；2 6 8 ( 1P t2 ) ：H 4 4 8 一H 4 5 7 5 7 R i l e yR D ，S a t oH ，Z h a oZ Qe ta 1 R e c o m b i n a n th u m a nc o m p l e m e n tC 5 ar e c e p t o ra n t a g o n i s tr e d u c e si n f a r c ts i z ea f t e rs u r g i c a lr e v a

350、 s c u l a r i z a t i o n JT h o r a cC a r d i o v a s cS u r g2 0 0 0 ；1 2 0 ( 2 ) ：3 5 0 3 5 8 5 8 】T s a oP S ，A o k iN ，L e f e rD J ，J o h n s o nG ，I I I ，L e f e rA M T i m ec o B r g eo fe n d o t h e l i a ld y s f u n c t i o na n dm y o c a r d i a li n j u r yd u r i n gm y o c a r d i

351、 a li s c h e m i aa n dr e p e r f u s i o ni nt h ec a t C i r c u l a t i o n1 9 9 0 ；8 2 ( 4 ) ：1 4 0 2 1 4 1 2 【5 9 】W a n gQ D ，M o r c o sE ，w i l d a n dP ，P e m o wJ L - a r g i n i n ee n h a n c e sf u n c t i o n a lr e c o v e r ya n dC a ( 2 + ) 一d e p e n d e n tn i t r i co x i d es

352、y n t h a s ea c t i v j t ya f t e ri s c h e m i aa n dr e p e r f u s i o ni nt h er a th e a r t JC a r d i o v a s cP h a r m a c o l1 9 9 7 ；2 9 ( 2 ) ：2 9 1 - 2 9 6 6 0 L e f e rD J ，N a k a n i s h iKJ o h n s t o nW E ，V i n t e n - J o h a n s e nJ A n t i n e u t r o p h i la n dm y o c a

353、 r d i a lp r o t e c t i n ga c t i o n so fan o v e ln i t r i co x i d ed o n o ra f t e ra c u t em y o c a r d i a li s c h e m i aa n dr e p e r f u s i o no f d o g s C i r c u l a t i o n1 9 9 3 ；8 8 ( 5P t1 ) ：2 3 3 7 - 2 3 5 0 6 1 】P e m o wJ ，U r i u d aY ，W a n gQ D ，L iX S ，N o r d l a

354、n d e rR ，R y d e e nL T h ep r o t e c t i v ee f f e c to fL - a r g i n i n eo nm y o c a r d i a li n j u r ya n de n d o t h e l i a lf u n c t i o nf o l l o w i n gi s c h a e r i n aa n dr e p e r f u s i o ni nt h ep i g E u r H e a r tJ1 9 9 4 ；1 5 ( 1 2 ) ：1 7 1 2 - 1 7 1 9 8 6 浙江尤学硕士学位论文

355、 6 2 】L iX S ，U r i u d aY ，W a n gQ D ，N o r l a n d e rR ，S j o q u i s tP O ，P e r n o wJ 。R o l eo f L a r g i n i n ei np r e v e n t i n gm y o c a r d i a la n de n d o t h e l i a li n j u r yf o l l o w i n gi s c h a e m i a J r e p e r f u s i o ni nt h er a ti s o l a t e dh e a r t A c

356、t aP h y s i o lS t a n d1 9 9 6 ；1 5 6 ( 1 ) ：3 7 - 4 4 【6 3 】N a k a n i s h i 琏V i n t e n - J o h a n s e nJ ，k 触D Je ta l ，L n t m e n r o n a r yL a r g m i n ed u r i n gr e p e r f u s i o ni m p r o v e se n d o t h e l i a lf u n c t i o na n dr e d u c e si n f a r c ts i z e A m ，P h y s

357、 i o l1 9 9 2 ；2 6 3 f 6P t2 ) ：H 1 6 5 0 - H 1 6 5 8 6 4 S u m e r a yM S ，R e e sD D ，Y e l l o nD M ，I n f a r c ts i z ea n dn i t r i co x i d es y n t h a s ei nm a r i n em y o c a r d i u m jM o lC e l lC a r d i o l2 0 0 0 ；3 2 ( 1 ) ：3 5 - 4 2 。【6 5 】H a a n a nR L ，J o h nM C ，K o u r e t

358、 a sP C ，H a c kB D ，M a t h e m eG P ，L a u b a c hV E D e l e t i o no fe n d o t h e l i a ln i t r i co x i d es y n t h a s ee x a c e r b a t e sm y o c a r d i a ls t u n n i n gi na ni s o l a t e dm o u s eh e a r t m o d e l JS u r g R e s2 0 0 0 ；9 3 ( 1 ) ：1 2 7 1 3 2 ，f 6 6 】J o n e sS

359、P ，G i r o dW G ，P a l a z z oA Je ta 1 M y o c a r d i a li s c h e m i a - r e p e r f u s i o ni n j u r yi se x a c e r b a t e di na b s e n c eo fe n d o t h e l i a lc e l ln i t r i co x i d es y n t h a s e A mJP h y s i o l1 9 9 9 ；2 7 6 ( 5P t2 ) ：H 1 5 6 7 一H 1 5 7 3 【6 7 1P a b l a 溉盘越，

360、F l y r mD M ，S a l z b e r gD B ，L e f e rD J 。I n t r a c o r o n a r ym t r i co x i d ei m p r o v e sp o s t i s c h e m i cc o r o n a r yb l o o df l o wa n dm y o c a r d i a lc o n t r a c t i l ef u n c t i o n A mJP h y s i o l1 9 9 5 ；2 6 9 ( 3 P t 2 ) ：H 1 1 13 - H 1 1 2 1 【6 8 P a b l

361、aR ，C u r t i sM J E n d o g e n o u sp r o t e c t i o na g a i n s tr e p e r f u s i o n - i n d u c e dv e n t n c u l a rf i b r i l l a t i o n ：r o l eo fn e u r o n a lv e r s H sn o n + n e u r o n a ls o u r e so fn i t r i co x i d ea n ds p e c i e sd e p e n d e n c ei nt h er a tv e r

362、s B 5r a b b i ti s o l a t e dh e a r t JM o lC e l lC a r d i o l1 9 9 6 ；2 8 ( 1o ) ：2 0 9 7 - 2 1 1 0 f 6 秘k 辩A M ，L e f e rD J T h er o l eo fn i t r i co x i d ea n dc e l la d h e s i o nm o l e c u l e sO Ht h em i c r o e i r c u l a t i o ni ni s c h a e m i a r e p e r f u s i o n C a r d

363、 i o v a s cR e s1 9 9 6 ；3 2 ( 4 ) ：7 4 3 - 7 5 1 ， 7 0 R o n s o nR S ，N a k m u u r aM ，V i n t e n J o h a n s e nJ T h ec a r d i o v a s c u l a re f f e c t sa n di m p l i c a t i o n so f p e r o x y n i t r i t e ，C a r d i o v a s cR e s1 9 9 9 ；4 4 ( 1 ) ：4 7 5 9 7 1 1P a b l a 心B u d aA

364、 J ，F l y r mD M ，S a l z b e r gD B ，L e f e rD J I n t r a c o r o n a r yn i t r i co x i d em n p r o v e sp o s t i s c h e m i cc o r o n a r yb l o o df l o wa n dm y o c a r d i a lc o n t r a c t i l ef u n c t i o n A mJP h y s i o l1 9 9 5 ；2 6 9 ( 3P t2 ) ：H 11 1 3 一H 1 1 2 1 7 2 1W i t

365、d h i r tS M ，W e i s m u e l l e rS ，S c h u l z eC ，C o n r a dN ，K o m b e r gA ，R e i c h a r tB I n d u c i b l en i t r i co x i d es y n t h a s ea c t i v a t i o na f t e ri s c h e m i a r e p e r f u s i n nc o n t r i b u t e st om y o c a r d i a l8 7 。浙江大学硕士学位论文d y s f u n c t i o na n

366、 de x t e n to fi n f a r c ts i z ei nr a b b i t s ：e v i d e n c ef o ral a t ep h a s eo fn i t r i co x i d e m e d i a t e dr e p e r f u s i o ni n j u r y C a r d i o v a s cR e s1 9 9 9 ；4 3 ( 3 ) ：6 9 8 _ 7 11 7 3 S c h u l zR ，W a m b o l t1 LI n h i b i t i o no f n i t r i co x i d es y

367、 n t h e s i sp r o t e c t st h ei s o l a t e dw o r k i n gr a b b i th e a r tf r o mi s c h a e m i a - r e p e r f u s i o ni n j u r y C a r d i o v a s cR e s1 9 9 5 ；3 0 ( 3 ) ：4 3 2 - 4 3 9 7 4 O h o iI ，T a k e nS I n v o l v e m e n to fs u p e r o x i d ea n dn i t r i co x i d ei nt h

368、eg e n e s i so fr e p e r f u s i o na r r h y t h m i a s i nr a t s E u r J P h a r m a c o l l 9 9 6 ；3 0 6 ( I 一3 ) ：1 2 3 _ 1 3 1 7 5 F l o g e lU ，D e c k i n gU K , G o d e c k eA ，S c h r a d e rJ ，C o n t r i b u t i o no fN Ot oi s c h e m i a - r e p e r f u s i o nm j u r yi nt h es a l

369、 i n e - p e r f u s e dh e a r t ：as t u d yi ne n d o t h e l i a lN Os y n t h a s ek n o c k o u t m i c e JM o lC e l lC a r d i o l1 9 9 9 ；3 1 ( 4 ) ：8 2 7 8 3 6 【7 6 】W a t a n a b eT ，S u z u k iN ，S h i m a r n o t oN ，F u j i n oM ，I m a d aA C o n t r i b u t i o no f e n d o g e n o u s

370、e n d o t h e l i nt ot h ee x t e n s i o no fm y o c a r d i a li n f a r c ts i z ei nr a t s C i r eR e s1 9 9 1 ；6 9 ( 2 ) ：3 7 0 3 7 7 7 7 G r o v e rG J ，D z w o n c z y kS ，P a r h a mC S T h ee n d o t h e l i n 一1r e c e p t o ra n t a g o n i s tB Q 一1 2 3r e d u c e si n f a r c ts i z e

371、i nac a n i n em o d e lo fc o r o n a r yo c c l u s i o na n dr e p e r f u s i o n C a r d i o v a s cR e s1 9 9 3 ；2 7 ( 9 ) 2 1 6 1 3 1 6 1 8 7 8 1W a n gQ D ，L iX S ，L u n d b e r gJ M ，P e m o wJ P r o t e c t i v ee f f e c t so f n o n - p e p t i d ee n d o t h e l i nr e c e p t o ra n t

372、a g o n i s tb o s e n t a no nm y o c a r d i a li s c h a e m i ca n dr e p e f f n s i o nm j u r yi nt h ep i g C a r d i o v a s cR e s1 9 9 5 ；2 9 ( 6 ) ：8 0 5 8 1 2 7 9 1G o n o nA T ，W a n gQ D ，S h i m i z uM ，P e m o wJ T h en o v e ln o n - p e p t i d es e l e c t i v ee n d o t h e l i

373、nAr e c e p t o ra n t a g o n i s tL U1 3 5 ，2 5 2p r o t e c t sa g a i n s tm y o c a r d i a li s c h a e m i ca n dr e p e f f u s i o n i n j u r y i n t h e p i gA c t a P h y s i o lS c a n d l 9 9 8 ；1 6 3 ( 2 ) ：1 3 1 1 3 7 8 0 G o n o nA T ，G o u r i n eA V ，P e m o wJ C a r d i o p r o t

374、 e c t i o nf r o mi s c h e m i aa n dr e p e r f u s i o ni n j u r yb ya i le n d o t h e l i nA - r e c e p t o ra n t a g o n i s ti nr e l a t i o nt on i t r i co x i d ep r o d u c t i o n JC a r d i o v a s cP h a r m a c o l2 0 0 0 ；3 6 ( 3 ) 2 4 0 5 - 4 1 2 8 1 1G o n o nA T ，W a n gQ D ，

375、P e m o wJ T h ee n d o t h e l mAr e c e p t o ra n t a g o n i s tL U1 3 5 2 5 2p r o t e c t st h em y o c a r d i u mf r o mn e u t r o p h i li n j u r yd u r i n gi s c h a e m i a & e p e r f u s i o n C a r d i o v a s cR e s1 9 9 8 ；3 9 ( 3 ) ：6 7 4 6 8 2 8 2 M a c z e w s k iM ，B e r e s e

376、 w i c zA T h er o l eo fe n d o t h e l i n ，p r o t e i nk i n a s eCa n df r e er a d i c a l si nt h em e c h a n i s mo ft h ep o s t i s c h e m i ce n d o t h e l i a ld y s f u n c t i o ni ng u i n e a 。p i gh e a r t s JM o lC e l lC a r d i o l2 0 0 0 ；3 2 ( 2 ) ：2 9 7 31 0 S 8 一一一塑要点堂婴主兰

377、垡笙塞疆3 】p e n l o w ，w a n gQ D E n d o t h e l i ni nm y o c a r d i a li s c h a e m i aa n dr e p e r f u s i o n C a r d i o v a s cR e s1 9 9 7 ；3 3 ( 3 ) ：5 1 8 - 5 2 6 8 4 G o u r i n eA V ，G o n o nA T ，P e r n o wJ I n v o l v e m e n to fn i t r i co x i d ei nc a r d i o p r o t e c t i v

378、ee f f e c to fe n d o t h e l i nr e c e p t o ra n t a g o n i s td u r i n gi s c h e m i a - r e p e r i n s i o n A m P h y s i o lH e a r t C i t e P h y s i o l 2 0 0 1 ；2 8 0 ( 3 ) ：H 1 1 0 5 一H 1 1 1 2 。 8 5 R a s c h a c kM ，J u c h e l k aF ，R o z e k - S c h a e f e rG T h eE n d o t h e

379、 l i n - Aa n t a g o n i s tL U1 3 52 5 2s u p r e s s e ai s c h e m i cv e n t r i c u l a re x t r a s y s t o l e sa n df i b r i l l a t i o ni np i g sa n dp r e v e n t sh y p o x i cc e l l u l a rd e c o u p l i n g ，JC a r d i o v a s cP h a r m a c o l1 9 9 8 ；3 1S u p p l1 ：S 1 4 5 - $

380、1 4 8 。【8 6 】G e s h iE ，N o m i z oA ，A m t aY ，N a k a t a n iM ，K a t a g i r iT E f f e c to fn o n - s e l e c t i v ee n d o t h e l i nb l o c k a d e ，T A K - 0 4 4 ，o nt h ei s c h e m cc e l l d a ri n j u wo fr a th e a r t B a s i cR e sC a r d i o l1 9 9 9 ；9 4 圆：9 4 - 1 0 1 ，C 8 7 S h

381、a r i ff ，K a n eK A ，W a i n w r i g h tC L 。E n d o t h e l i nm - r h y t h m i a s a n t i a r r h y t h m i eo ra r r h y t h m o g e n i c ? C a r d i o v a s cR e s1 9 9 8a n di s c h a e m i c3 9 ( 3 ) ：6 2 5 - 6 3 2 1 8 8 K r a u s eS M ，L y n c hJ J ，J r 。，S t a b i l i t o 珏，W o l t m a n

382、 nR F I n t r a v e n o u sa d m i n i s t r a t i o no ft h ee n d o t h e l i n 一1a n t a g o n i s tB Q - 1 2 3d o e sn o ta m e l i o r a t em y o c a r d i a li s c h a e m i c 蠲蝌f o l l o w i n ga c u t ec o r o n a r ya r t e r yo c c l u s i o nj nt h ed o g C a r d i o v a s cR e s1 9 9 4 ；

383、2 8 ( 11 ) ：1 6 7 2 1 6 7 8 f 8 9 jM c M u r d oL ，T h i e m e r m a n nc ，V a n eJ R , T h ee f f e c t so ft h ee n d o t h e l i nE T Ar e c e p t o ra n t a g o n i s t , F R1 3 9 3 1 7 ，o ni n f a r e ts i z ei nar a b b i tm o d e lo f a c u t em y o c a r d i a li s c h a e m i aa n dr e p e

384、r f u s i o n B rJP h a r m a c o l1 9 9 4 ；11 2 ( 1 ) ：7 5 8 0 9 0 】R i c h a r dV ，K a e f f e rN H o 西eM ，T r o nC ，B l a n cT ，T h u i l l c zC R o l eo fe n d o g e n o u se n d o t h e t i ni nm y o c a r d i a la n dc o r o n a r ye n d o t h e l i a l 蠲a r ya f t e ri s c h a e m i am a dr e

385、 p e f f u z i o ni nr a t s ：s t u d i e sw i t hb o s e n t a n ，am i x e dE T A - E T Ba n t a g o n i s t B rJP h a r m a c o l1 9 9 4 ；11 3 ( 3 ) ：8 6 9 8 7 6 p 1 】C h o p r aM ，B e s w i c kH ，C l a p p e r t o nM ，D a r g i e 掰，S m i t hW E ，M c M u r r a yJ 。A n t i o x i d a n te f f e c t

386、so fa n g i o t e n s i n - c o n v e r r i n ge n z y m e 溶C E ) i n h i b i t o r s ：f r e er a d i c a la n do x i d a n ts c a v e n g i n ga r es u l f h y d r y ld e p e n d e n t b u tl i p i dp e r o x i d a t i o ni si n h i b i t e db yb o t hs u l f i h y d r y l a n dn o n s u l t h y d

387、r y l - c o n t a i n i n gA C Ei n h i b i t o r s JC a r d i o v a s cP h a r m a c o l1 9 9 2 ；1 9 ( 3 ) ：3 3 0 - 3 4 0 ，一8 9 -浙江丈学硬士学键论文 9 2 H a r t m a nJ C ，W a l lT M ，H u l l i n g e rT G ，S h e b n s k iR J R e d u c t i o no fm y o c a r d i a li n f a r c ts i z ei nr a b b i t sb yr a m

388、i p r i l a t ：r e v e r s a lb yt h eb r a d y k i n i na n t a g o n i s tH O E1 4 0 JC a r d i o v a s cP h a r m a c o l1 9 9 3 ；2 h ：6 ) ：9 9 6 - 1 0 0 3 【9 3 】S h i m i z aM ，W a n gQ D ，S j o q u i s tP O ，R y d e nL A n g i o t e n s i nI It y p e1r e c e p t o rb l o c k a d ew i t hc a n d

389、 e s a r t a np r o t e c t st h ep o r c i n em y o c a r d i u mf r o mr e p e f f u s i o n i n d u c e di n j u r y JC a r d i o v a s eP h a r m a c o l1 9 9 8 ；3 2 ( 2 ) ：2 31 - 2 3 8 【9 4 】W e i d e n b a c h S c h u t zR ，G r e sP ，B e h r e n d sM ，P o s tH ，H e u s c hG E n h a n c e dr e

390、d u c t i o no f m y o c a r d i a li n f a r c ts i z eb yc o m b i n e dA C Ei n h i b i t i o na n dA T ( 1 ) - r e c e p t o ra n t a g o n i s m B rJP h a r m a c o l2 0 0 0 ；1 3 1 ( 1 ) ：13 8 1 4 4 9 5 】S c h w a r zE R ，M o n t i n oH ，F l e i s c h h a n e rJ , K l u e sH G ，v o mD J ，H a n

391、m t hP - A n g i o t e n s i nl Ir e c e p t o ra n t a g o n i s tE X P3 1 7 4r e d u c e si n f a r c ts i z ec o m p a r a b l ew i t he n a l a p r i l a ta n da u g m e n t sp r e c o n d i t i o n i n gi nt h ep i gh e a r t C a r d i o v a s cD r u g sT h e r1 9 9 7 ；11 ( 5 ) ：6 8 7 - 6 9 5 ，

392、f 9 6 】H a r a d a 墨K o m u r oI ，H a y a s h iD ，S u g a y aT ，M a r a k a m iK ，Y a z a k iY A n g i o t e n s i n t y p el ar e c e p t o ri sr e v o l v e di nt h eO c c U l T e n c eo fr e p e r f u s i o na r r h y t h m i a s C i r c u l a t i o n1 9 9 8 ；9 7 ( 4 ) ：3 1 5 - 3i 7 9 7 L i uY H

393、，Y a n gX P ，S h a r o vV Ge ta 1 E f f e c t so fa n g i o t e n s i n - c o n v e r t i n ge n z y m e缸m i b i t 。f sa n da n g i o t a n s i nI It y p e1r e c e p t o ra n t a g o n i s t si nr a t sw i t hh e a r tf a i l u r e R o l eo f k i n i n sa n da n g i o t e n s m1 It y p e2r e c e p t

394、 o r s 。JC l i nI n v e s t1 9 9 7 ；9 9 ( 8 ) ：1 9 2 6 - 1 9 3 5 9 8 L i n zW ，W o l l l f a r tP ，S c h o l k e n sB A , M a l i n s k iT ，W i e m e rG I n t e r a c t i o n sa m o n gA C E ，k i n i n sa n dN O C a r d i o v cR e s1 9 9 9 ；4 3 ( 3 ) ：5 4 9 - 5 6 1 【够】A v k i r a nM R a t i o n a lb

395、 a s i sf o ru s eo fs o d i u m - h y d r O g e ne x c h a n g ei n h i b i t o r si nm y o c a r d i a li s e h e m i a A mJC a r d i o l1 9 9 9 ；8 3 ( 1 0 A ) ：1 0 G 1 7 G 1 0 0 1K a r m a z y nM ，S o s t a r i cJ V ，C l a nX T T h em y o c a r d i a lN a + 似+ e x c h a n g e r ：ap o t e n t i a

396、lt h e r a p e u t i ct a r g e tf o rt h ep r e v e n t i o no f m y o c a r d i a li s e l m e m i ea n dr e p e r f u s i o n 蝎u r ya n da t t e n u a t i o no f p o s t i n f a r c t i o nh e a r tf a i l u r e 。D r u g s2 0 0 1 ；6 1 ( 3 ) ：3 7 5 * 3 8 9 1 0 1 1K l e i nH H ，P i e hS ，B o m eR M

397、 ，W o l l e n w e b e rJ ，N e b e n d a h lK M y o c a r d i a lp r o t e c t i o nb yN 十) 一H + e x c h a n g ei n h i b i t i o ni ni s c h e m i c ，r e p e r f u s e dp o r c i n eh e a r t s 。C i r c u l a t i o n1 9 9 5 ；9 2 f 4 ) ：9 1 2 - 9 1 7 9 0 濒疆大学硕士学位论文( 1 0 2 】R o h r n a m lS ，W e y g a

398、 n d tH ，M i n c kK O P r e i s c t m e m i ea sw e l la sp o s t i s c h a e m i ea p p l i c a t i o no f aN a + H + e x c h a n g ei n h i b i t o rr e d u c e si n f a r c ts i z ei np i g s C a r d i o v a s eR e s1 9 9 5 ；3 0 ( 6 ) ：9 4 5 - 9 5 1 1 0 3 】L i n zW ，A l b u sU ，C r a u s eP 。ta 1

399、 D o s e - d e p e n d e n tr e d u c t i o no f m y o c a r d i a li n f a r c t1 D a s si nr a b b i t sb yt h eN H E - 1i n h i b i t o rc a r i p o f i d e ( H O E6 4 2 ) C l i nE x pH y p e r t e n s1 9 9 8 ；2 0 ( 7 ) ：7 3 3 7 4 9 1 0 4 lG u m i n a ，M i z u m u r atB e i e rN ，S c h e l l i n

400、gP ，S c h u l t zJ J ，G r o s sG J 。An e ws o d i u m h y d r o g e ne x c h a n g ei n d b i t o r , E M D8 51 3 1 ，l i m i t si n f a r c ts i z ei nd o g sw h e na d m i n i s t e r e db e f o r eo ra f t e rc o r o n a r ya r t e r yo c c l u s i o n JP h a r m a c o lE x pT h e r1 9 9 8 ；2 8 6

401、( 1 ) ：17 5 1 8 3 【1 0 5 】K l e i nH H ，P i c hS ，B o h l ej 戳，W o l l e n w e b e rJ ，N 6 b e n d a h l M y o c a r d i a lp r o t e c t i o nb yN a ( + ) 一H + e x c h a n g ei n h i b i t i o ni ni s c h e m i c ，r e p e r f u s e dp o r c i n eh e a r t s C i r c u l a t i o n1 9 9 5 ；9 2 ( 4 ) ：

402、9 1 2 9 17 【1 0 6 】S h i m a d aY ，H e a r s eD J , A v k i r a nM 。I m p a c to fe x t r a c e l l u l a rb u f f e rc o m p o s i t i o nO nc a r d i o p r o t e c t i v ee f f i c a c yo f N a + H + e x c h a n g e ri r t h i b i t o r sA mJP h y s i o l1 9 9 6 ；2 7 0 ( 2P t2 ) ：H 6 9 2 - H 7 0 0

403、 1 0 7 】Y a s u t a k eM ，I b u k iC ，H e a r s eD J ，A v k i r a nM N a + 腱+ e x c h a n g ea n dr e p e r f u s i o na r r h y a u n i a s ：p r o t e c t i o nb yi n t r a c o r o n a r yi n f u s i o no fan o v e li n h i b i t o r ，A mJP h y s i o l1 9 9 4 ；2 6 7 ( 6P t 孙：H 2 4 3 0 一H 2 4 4 0 1

404、0 8 】A y eN N ，X u eY X ，H a s h m l o t okA n t i a r r h y t h m i ce f f e c t so f c a r i p o r i d e ，an o v e lN a 十* H +e x c h a n g ei n h i b i t o r , 0 1 1r e p e f f u s l o nv e n t f i c u l a ra r r h y t h m i a si nr a th e a r t s ，E u rJP h a r m a c o l1 9 9 7 ；3 3 9 ( 2 3 ) ：1

405、 2 1 1 2 7 ，【1 0 9 】X u e Y X , A y e N N ，H a s h i m o t o K A n t i a r r h y t h m i ee f f e c t so f H O E 6 4 2 ，a n o v e lN a p ) 川+e x c h a n g ei n h i b i t o r , o nv e n t r i e n l a ra r r h y t h m i a si na n i m a lh e a r t s E u rJP h a r m a c o l1 9 9 6 ；3 t 7 ( 2 - 3 ) ：3 0

406、9 - 3 1 6 ，【11 0 S a c kS ，M o h r iM ，S c h w a r zE Re ta 1 E f f e c t so fan e wN a + 珊+ a n t i p o r t e ri n h i b i t o ro np o s f i s c h e m i cr e p e r f u s i o ni np i gh e a r t JC a r d i o v a s cP h a r m a c o l1 9 9 4 ；2 3 ( 1 ) ：7 2 7 8 11 1 】M c L a u g h l i nP J ，W uY 。O p i

407、 o i dg e n ee x p r e s s i o ni nt h ed e v e l o p i n ga n da d u l tr a th e a r t D e vD y n1 9 9 8 ；2 1 1 ( 2 ) ：1 5 3 1 6 3 9 1 浙江大学硕士学键论文【11 2 M i U m g t o nW R ，R o s e n t h a lD W ，U n a lC B ，N y q u i s t - B a t t i eC ，L o c a l i z a t i o no fp r o o p i o m e l a n o c o r t mm R

408、 N AW a n s c i p t sa n dp e p t i d ei m m u n o r e a c t i v i t yi nm th e a r t C a r d i o v a s cR e s1 9 9 9 ；4 3 ( 1 ) ：1 0 7 - 116 【t1 3 】M c L a n g h l i nP J ，A l l a rM A 。P r e p r o e n k e p h a l i ng e n ee x p r e s s i o na n df M e t S - e n k e p h a l i nl e v e l s i n t h

409、e d e v e l o p i n gr a t h e a r t B r a i n R e s M o l B r a i n R e s1 9 9 8 ；6 0 ( 2 ) ：1 6 0 1 6 7 I1 4 】W e i lJ ，E s c h e r f l m g e nT ，F l e i g eG ，M i t t m a n nC ，O r t h e yE ，S c h o l zH L o c a l i z a t i o no fp r e p r o e n k e p h a l i nm R N Ai nr a th e a r t ：s e l e c

410、t i v eg e n ee x p r e s s i o ni nl e f tv e n t r i c u l a rm y o c a r d i u m ，A mJP h y s i o l1 9 9 8 ；2 7 5 ( 2P t2 ) ：H 3 7 8 - H 3 8 4 11 5 】M a s l o vL N ，L i s h m a n o vY B C h a n g ei no p i o i dp e p f i d el e v e li nt h eh e a r ta n db l o o dp l a s m ad u r i n ga c u t em

411、y o c a r d i a li s c h a e m i ac o m p l i c a t e db yv e n t r i c u l a rf i b r i l l a t i o n 。C l i nE x pP h a r m a c o lP h y s i o l1 9 9 5 ；2 2 ( i 1 ) ：8 1 2 8 1 6 。i n 6 E l i a s s o nT ，M a n n h e i m e rC ，W a a g s t e i nFe ta 1 M y o c a r d i a l 1 l n l o v e ro fe n d o g

412、e n o u so p i o i d sa n dc a l c i t o n i n - g e n e - r e l a t e dp e p t i d ei nt h eh u m a nh e a r ta n dt h ee f f e c t so fs p i n a lc o r ds t i m u l a t i o n o n p a c i n g - i n d u c e d a n g i n a p e c t o r i s C a r d i o l o g y1 9 9 8 ；8 9 ( 3 ) ：1 7 0 - 1 7 7 1 1 7 P a

413、r a d i sP ，D t m l o n tM ，B e l i c h a r dP ，R o u l e a u 儿，L e m a i r eS ，B r a k i e r - G i n g r a sL I n c r e a s e dp r e p r o e n k e p h a l i nAg e n ee x p r e s s i o ni nt h er a th e a r ta f t e ri n d u c t i o no fam y o c a r d i a li n f a r c t i o n ，B i o c h e mC e l lB

414、l o t1 9 9 2 ；7 0 ( 7 ) ：5 9 3 - 5 9 8 1 1 8 jS c h u l t zJ E ，R o s eE ，Y a oZ ，G r o s s 掰。E v i d e n c ef o ri n v o l v e m e n to f o p i o i dr e c e p t o r si ni s c h e m i cp r e c o n d i t i o n i n gm r a t h e a r t s A mJP h y s i o l1 9 9 5 ；2 6 8 ( 5P t2 ) ：H 2 1 5 7 - H 2 1 6 1 【

415、1 1 9 】M a r k i e w i c zw ，F i n b e r gJ P ，L i c h f i gC M o r p h i n ei n c r e a s e sm y o c a r d i a li n f a r c t i o ns i z ei nr a t s + A n e s t hA n a l g1 9 8 2 ；6 t ( 1 0 ) ：8 4 3 8 4 6 1 2 0 】L i a n gB T , G r o s sG J D i r e c tp r e c o n d i t i o n i n go fc a r d i a cm y

416、 o c y t e sv i ao p i o i dr e c e p t c x sa n dK A T Pc h a n n e l s C i r eR e s1 9 9 9 ；8 4 ( 1 2 ) ：1 3 9 6 * 1 4 0 0 【1 2 1 】C a l i g n a n oA ，P e r s i c oP ，M a n c n s oF ，S o r r e n t i n oL ，A d e n o s i n er e l e a s ei nm o r p h i n e i n d u c e dh y p o t e n s i o ni nr a t s

417、 G e nP h a r m a c o l1 9 9 2 ；2 3 ( 1 ) ：7 1 0 【1 2 2 S c h u l t zJ e ，H s uA RN a g a s eH ，G r o s sG J T A N w 6 7 ，ad e l t a1 - o p i o i dr e c e p t o ra g o n i s t ，r e d u c e si n f a r c ts i z e 娥aa c t i x ，a t i o no fG i op r o t e i n sa n dK A T Pc h a n n e l s A mJP h y s i o

418、l1 9 9 8 ；2 7 4 ( 3P t2 ) ：H 9 0 9 - H 9 1 4 9 2 浙江大学硕士学位论文【1 2 3 W uS ，L iH Y ，W a n gT M C a r d i o p m t e c t i o no f p r e c o n d i t i o n i n gb ym e t a b o l i ci n h i b i t i o ni nt h er a tv e n t r i c u l a rm y o c y t e I n v o l v e m e n to fk a p p a - o p i o i dr e c e p t o

419、 r C i r cR e s1 9 9 9 ；8 4 ( 1 2 ) ：1 3 8 8 - 1 3 9 5 1 2 4 F r y e rR M ，W a n gY ，H s uA K ，N a g a s eH ，G r o s sG J D e p e n d e n c eo fd e l t a l o p i o i dr e c e p t o r - i n d u c e dc a r d i o p r o t e c f i o no nat y r o s i n ek i n a s e - d e p e n d e n tb u tn o taS r e _ (

420、t e p e n d e n tp a t h w a y JP h a r m a c o lE x pT h e r2 0 0 1 ；2 9 9 ( 2 ) ：4 7 7 - 4 8 2 【1 2 5 T o m a iF ，C r e aF ，G a s p a r d o n eAe ta lE f f e c t so fn a l o x o n eo nm y o c a r d i Mi s c h e m i cp r e c o n d i t i o n i n gmh u m a n s JA mC o i lC a r d i o l1 9 9 9 ；3 3 ( 7

421、 ) ：1 8 6 3 1 8 6 9 【1 2 6 F l i s sH A c c e l e r a t e da p o p t o s i si nr e p e r f u s e dm y o c a r d i u m ：f i i e n do ff o e ? B a s i cR e sC a r d i o l1 9 9 8 ；9 3 ( 2 ) ：9 0 - 9 3 【1 2 7 M o c e n uM M ，B a x t e rG F ，Y e l l o nD M C a s p a s ei n h i b i t i o na n dl i m i t a

422、 t i o no fm y o c a r d i a li n f a r c ts i z e ：p r o t e c t i o na g a i n s tl e t h a lr e p e r f u s i o ni n j u r y B rJP h a r r n a c o l2 0 0 0 ；1 3 0 ( 2 ) ：1 9 7 - 2 0 0 1 2 8 G a l a n g N ，S a s a k iH ，M a u l i k N A p o p t o t i cc e l ld e a t hd u r i n gi s c h e m i a r e

423、p e r f u s i o na n di t sa t t e n u a t i o nb ya n t i o x i d a n tt h e m p y T o x i c o l o g y2 0 0 0 ；1 4 8 ( 2 - 3 ) ：1 1 1 - 1 1 8 【1 2 9 V a k e v aA P ，A g a hA ，R o l l i n sS A ，M a r l sL A ，L iL ，S t a h lG L M y o c a r d i a li n f a r c t i o na n da p o p t o s i sa f t e rm y

424、o c a r d i a li s c h e m i aa n dr e p e r f u s i o n ：r o l eo ft h et e r m i n a lc o m p l e m e n tc o m p o n e n t sa n di n h i b i t i o nb ya n t i - C 5t h e r a p y C i r c u l a t i o n1 9 9 8 ；9 7 f 2 2 ) ：2 2 5 9 2 2 6 7 13 0 】S h i m i z uM ，W a n gQ D ，s j o q u i s tP O ，R y d e

425、 nL C o m b i n a t i o no fac a l c i u ma n t a g o n i s t ，al i p i d - p e m x i d a t i o ni n h i b i t o r , a n da na n g i o t e n s i nA T l - r e c e p t o ra n t a g o n i s tp r o v i d e sa d d i t i v em y o c a r d i a li n f a r c ts i z e l i m i t i n ge f f e c ti np i g s JC a

426、r d i o v a s cP h a r m a c o l1 9 9 9 ；3 4 ( 4 ) ：51 2 5 17 13 1 】L e f e rA M ，C a m p b e l lB ，S h i nY K ，S c a l i aR ，H a y w a r dRL e f e rD J S i m v a s t a t i np r e s e r v e st h ei s c h e m i c - r e p e r f u s e dm y o c a r d i t t mi nn o r m o c h o l e s t e r o l e m i cr a

427、th e a r t s C i r c u l a t i o n1 9 9 9 ；1 0 0 ( 2 ) ：1 7 8 1 8 4 1 3 2 】S c a l i aR ，G o o s z e nM E ，J o n e sS Pe ta 1 S i m v a s t a t i ne x e c sb o t ha n t i - i n f l a m m a t o r ya n dc a r d i o p r o t e c t i v ee f f e c t si na p o l i p o p r o t e i nE - d e f i c i e n tm i

428、c e C i r c u l a t i o n2 0 0 1 ：1 0 3 ( 2 1 ) ：2 5 9 8 - 2 6 0 3 9 3 辑江大学硕士学位论文【1 3 3 jU e d aY ，K i t a k a z eM ，K o m a m u r aKe ta 1 P m v a s t a t i nr e s t o r e dt h ei n f a r c ts i z e l i m i t i n ge f f e c to fi s c h e m i Cp r e c o n d i t i oT l i n gb l u n t e db yh y p e r

429、c h o l e s t e r o l e m i ai nt h er a b b i tm o d e lo f m y o c a r d i a li n f a r c t i o n JA mc o nC a r d i o l1 9 9 9 ；3 4 ( 7 ) ：2 1 2 0 2 1 2 5 +【1 3 4 ) M aX L ，Y u eT L ，L o p e zB Le ta l 。C a r v e d i l o l ，an e wb e t aa d r e n o r e e e p t o rb l o c k e rm a df r e er a d i

430、c a ls c a v e n g e r ，a t t e n u a t e sm y o c a r d i a li s c h e m i a - r e p e r f u s i o n 坷u r yi nh y p e r c h o l e s t e r o l e t m cm b b i m JP h a m m c o lE x pT h e r1 9 9 6 ；2 7 7 ( 1 ) ：1 2 8 1 3 6 1 3 5 】J o n e sS P ，G i r o dW G ，G r a n g e rD N ，P a l a z z oA J ，h f e r

431、D J 。R e p e r f u s i o ni n j u r yi sn o ta t f e c t e db yb l o c k a d eo fP - s e l e c t i ni nt h ed i a b e t i cm o u s eh e a r t A mJP h y s i o l1 9 9 9 ；2 7 7 ( 2P t2 ) ：H 7 6 3 - H 7 6 9 1 3 6 】M a r z i l l iM ，O r s i n iE ，M a r r a c e i n iP ，a d e n o s i n ea sa l l 诵u n c t 抽

432、p r i m a r yC i r e u l a t i o n2 0 0 0 ；1 0 1 ( 1 8 ) ：2 1 5 4 - 2 1 5 9 T e s t aR 。B e n e f i c i a le f f e c t so fi n t r a c o r o r m r ya n g i o p l a s t yi na c u t em y o c a r d i a li n f a r c t i o n 1 3 7 】R u p p r e c h tH I ，v e t oD J ，T e r r e sWe ta 1 C a r d i o p m t e

433、c t i v ee f f e c t so ft h eN a ( + ) i l l ( + )e x c h a n g ei n h i b i t o rc a r i p o r i d ei np a t i e n t sw i t ha c u t ea n t e r i o rm y o c a r d i a li n f a r c t i o nu n d e r g o i n gd i r e c t P T C A 。C i r c u l a t i o n2 0 0 0 ；1 0 1 f 2 5 ) ：2 9 0 2 - 2 9 0 8 9 4 激蜢大学

434、硕士学位始文在学期间发表的论文1 博琛，曹春梅，疑强，杨俊，陵源。活性氧羊口线粒体A T P 敏感钾通道介导T N F - a对缺氧复氧心肌的保护作用。擞理学报，2 0 0 3 ( 印刷中)2 。蒋探，营吝毒，张晶，夏强。T N F - g 兹心鼹受瞧腿力佟周援露臻究。浙江丈学举掇( 医学版) ，2 0 0 3 ( 印刷中)3 傅琛曹春梅，爱强，杨俊，陆源。N O 介导r N T - a 对培养心肌细胞缺氧复氧损揍瓣舞护馋塌。中墓痪理生理絷恚( 已回掺)4曹春梅，夏强，傅琛，蒋惠娣叶治国，沈岳赵，陈君柱。自细胞介素一2 对大鼠心肌C a 2 + A T P a s e 和N a + K + A

435、 T P a s e 的影响。生理学报，2 0 0 3 ，5 5 ( 1 ) ，8 3 9 05 F uC h e a ( 薅臻) ，X i aQ i a n g , C a oC h u n - M e i 。S i g n a lt r a n s d u c d o no f I N F - a l p h ai n d u c e dc a r d i o p r o t e c t i o ni nh y p o x i e r e o x y g e n a t i o n A c t aP h a r m a c o lS i n ( 中国药理学报) 2 0 0 3 ，2 3 (

436、 4 ) ：3 4 26 f 翔( ：h e nf 薅漾) ，c 叠。C h u n - M e i ，Z b a n gJ i n g , X i aQ i a n g T u m o rN e c r o s i sF a c t o rI m p r o v e sM y o c a r d i a lR e c o v e r ya f t e rI s c h e m i a & e p e r f u s i o ni nr a t J o u r n a lo ft h eH o n gK o n g C o l l e g e o f C a r d i o l o g y 2

437、 0 0 1 ，9 ( 1 ) ，1 1 47 。F uC h e r t ( 薅零黔，C a oC h u n - M e i ，L uY u a n ，X i aQ i a n g ，R o l eo fR e a c t i v eO x y g e nS p e c i e sa n dM i t o c h o n d r i a lK A T PC h a r m e li nT N F - A l p h aI n d u c e dC a r d i o p m t e c f i o n J o u r n a lo f t h eH o n g g o n gC o l l

438、 e g eo f C a r d i o l o g y 2 0 0 2 ，l O ( 4 ) ，2 3 08 ，簿深，曹春梅，鞭晶，夏强。瓣瘸棼琵因子蔽警疑斑一复灌一0 瓿功能滚复。第二弱海峡两岸低氧学术研讨会论文专辑。2 0 0 2 ，3 ，2 89 傅琛，夏强，曹眷梅，张晶，蒋惠嫦，陆源。T N F - 旺对心肌细胞A T P 酶活胜的影响。中蠢生理学会第2 l 孺学末会谈论文专辑。2 0 0 2 ，2 11 0 傅琛，曹春梅。大荨麻水提取物对太鼠的急性刹尿、促尿钠排泄和降压作用。国外医药( 植物药分册) ，2 0 0 1 ，1 6 ( 5 ) ：2 1 39 5 -巍j 薹夫学壤士学

439、控稔宠ll 。3 i nH o n g - F e n g , Z h o aY t m - L i a r 6F nC h e a 蒋i 辫，S h a hQ i X i a n , X i aQ i a n g , o f f i c n a l趣聃疆黼雌s t e mi n d u c e dv a s o r e l 捌x a n te f f e c ti nv a ta e r i e 矗n g s 。J o u r n a lo ft h eH o n gK o w g C o H e g e o f C a r d i o l o g y 2 0 0 2 ，t 0 啦：2 3

440、29 6 鞭选失学硕士警拯论文致谢寝心惑嚣我懿导努爱强教授对举深鬈掰给予懿黪心撂霉，感谢饕j l 器曼年来潜零A 学习、工捧和生瓣上的哭臻和帮助，导蛹严谨豹科学杰发、广博的理论知谖及丰蛮的辩研经验健举生终童竣蕊。疑心感谢浙江大学嗽理教研燮沈薅良副教授、倪客立教授、髑苏娥剐教授，王会平裁教授瓣本天学习、王露、生活上躲指导秘关心。本磷究工嚣中大鼠心室瑰头瓿牧壤力潮定部分姻实验是与篷学院羲藤医攀七年裁张晶同学所共同完成，谯此表示诚挚感谢。感谢营毒梅媾士程心飘酶学妥藏灏论文霉律等方强碧予酶大量糖等嚣帮餮；黪谢药学院的蒋惠娣副教授程本澡题究成中的大力支持，她在心黼肌浆弼剥肌膜提取帮繇攀涮定方嚣撬供了大量

441、的帮瀚。饕瀣臻万甄爨兄，攮在赛睡心琏灌滤氍心瓿继熬蘧蓁实骏孛绘予静指导和零精。拣谢陈莹蒙老师、爨避冬师。冠，他们在心就细腾蝽养实骏中给予了大力支持和帮霸。感嫩叶治翻老I 霹瞧仪器各系燧鹣缎持方摇给予躺大量帮助。感 蠹 枧憝中心陵潦、臻菠蠼篷努程实验坟器设备穷嚣挺爨了缓大懿帮蘩，考馊褥窭验麓够麟弱完藏。找还要感谢王琳琳、单绮娴、柴华为、张雄、丁悦敏、朱立等本教研室教师柱实验完成过壤孛绘予静帮熟耧支骛，感谢燕蘧渡婿室硕麟究生攒育椿、攫洼、垒红燎，姨惠、郭烘等给予的热情帮助，感谢秘学院碳士研究生桶俊同学在实骏巾给予的台作和支持。蹙嚣衷心蒜遘辑宵帮麓奉豫莲究菇熬意癖、鲻喾帮鞠友。零潆戆受巍程省鸯然科学萋金毒掣A 才专矮资金( N o 9 9 0 3 8 ) 赘转。9 7 -