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1、虎杖中游离羟醛蒽醌虎杖中游离羟醛蒽醌虎杖蒽醌的提取分离方法摘要: 虎杖具有清热解毒,去风利湿,活血通经之功效,临床上用于治疗肝炎、高血脂症、烧伤、烫伤等多种疾病。人们利用现代药理实验技术进一步发现虎杖还有抗血小板凝聚，抗白细胞减少,调节 Ca2+通道等作用。对虎杖中有效成分的药理作用研究是目前中草药研究的热点。为获取虎杖有效成分蒽醌类衍生物，目前仅停留在水煮、醇提等传统粗糙工艺上。对不同提取溶剂进行选择和对不同提取方法进行优化。通过比较渗漉、冷浸、回流、索氏和超声提取方法对虎杖蒽醌提取速度、效率的影响，比较各种提取方法的优劣性,评价不同药材粒度、不同提取时间的提取率。关键词:虎杖、蒽醌、提取、
2、分离(一)实验原理：羟基醌类化合物及二苯乙烯类成分，均可溶于乙醇中，故可用乙醇将它们取出来。羟基蒽醌类易溶于乙醚等弱极性溶剂，白藜芦醇苷在乙醚中溶解度很小，利用它们对乙醚的溶解性差异使羟基蒽醌类与白藜芦醇苷分离，再利用各羟基蒽醌类结构上的不同所表现酸性不同，用 PH 梯度萃取法分离它们。 （二）实验仪器和试剂仪器: 722 光栅分光光度计，分析天平, ZF-1 型三用紫外分析仪, KQ-100 性超声波清洗器试剂: 石油醚(3060 摄氏度)，乙醚(AR)，氯仿(AR)，95%乙醇(CP)，甲醇（AR） ，乙酸乙酯(AR)，醋酸镁(AR)，虎杖，1,2,5,8-四羟基蒽醌( AR)（三） 实验
3、部分3.1 虎杖的提取分离方法：3.1.1 冷浸提取：称取适当切碎的虎杖 20g 于 500mL 烧瓶中，加入10 倍量乙醇溶剂浸提 24h，共提取两次，合并提取液，抽滤，测定体积和蒽醌含量。3.1.2 渗漉提取：称取适当切碎的虎杖 20g 装入玻璃柱中，用乙醇溶剂浸泡 24h 后开始渗漉，控制流速使其用 20 倍量的溶剂渗漉48h 为止。将提取液抽滤，测定体积和蒽醌含量。3.1.3 回流提取：称取适当切碎的虎杖 20g 于 250mL 烧瓶中，加入6 倍量乙醇溶剂，加热回流，回流时间分别为0.5h、1h、1.5h、2h，将提取液抽滤，分别测定不同提取时间提取液的体积和蒽醌含量。3.1.4 索
4、氏提取：称取适当切碎的虎杖 20g 于索氏提取器中，加入6 倍量乙醇溶剂，水浴加热提取，回流时间分别为0.5h、1h、1.5h、2h，将提取液抽滤，分别测定不同提取时间提取液的体积和蒽醌含量。3.1.5 超声提取：在上述回流提取过程中施加超声波提取。3.2 蒽醌类含量测定根据蒽醌类化合物在不同介质中吸收光谱的不同，采用差示分光光度法测定虎杖中蒽醌含量。精确称取 1 2 5 8-四羟基蒽醌 5.39mg 置于 50mL 容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取0.40、0.60、0.80、1.00、1.20、1.60mL 各两份于 10mL 容量瓶中，一份加 0.5%的醋酸镁甲醇溶液至刻
5、度，另一份用甲醇稀释至刻度，摇匀。分别用甲醇及 0.5%的醋酸镁甲醇溶液为参比液，于 400-550nm 区间作二者的吸收光谱图，确定在两种介质中的最大吸收波长，甲醇溶液最大吸收波长为 430nm， 加入醋酸镁后的最大吸收波长为 505nm。 因虎杖中非蒽醌类成分不与醋酸镁甲醇溶液显色，因此对于配制的标准系列分别以后者为参比在 505nm 波长处测定各溶液的吸光度 A 值。（四）结果与讨论：4.1 虎杖中蒽醌类物质含量测定根据醋酸镁的甲醇液与蒽醌类成分反应，可得到稳定的红色，而虎杖非蒽醌类成分不与醋酸镁甲醇液显色3。 实验表明醋酸镁法显色在 1.5h 内吸光度几乎不发生变化。加入醋酸镁后，蒽醌
6、成分的最大吸收波长从 430nm 移动到 505nm， 505nm 处没有加入醋酸镁显色时，蒽醌吸光度很低，并且与加入醋酸镁显色后的吸光度差异很大。因此以未显色的样品溶液作参比，显色后的样品具有较大的吸光度，其吸光度与蒽醌的浓度成正比，从而测出样品浓度，此测定方法相关系数可达到 0.9990， 浓度在 0.005-0.020mg/mL 范围有良好的线性关系，回归直线方程为：y=0.0377x - 0.0014.2 溶剂药材粒度对提取率的影响根据虎杖中各种成分的溶解性,我们选择五种极性梯度溶剂(极性比较:石油醚100 目） ，表面吸附增强，反而降低提取率。同时，用乙醇和水作溶剂时，粉末过细，大量
7、糖类、鞣质、蛋白质、树胶等被提取出来，使提取液变得粘稠而给后处理带来困难。综上可知，在进行提取溶剂选择时，对未水解的虎杖直接提取时，选用 70%的乙醇提取效果最佳。而对于水解之后的提取则选用氯仿为溶剂。4.3 几种提取方法比较选用 70%乙醇溶剂作为提取剂时，各种提取方法都达到较高的提取率。对于回流提取、索氏提取和超声提取，提取率大体相当，且都高于冷浸和渗漉。在回流和超声提取法中，提取液粘度大，所含鞣质、树胶等杂质较多，给进一步分离提纯带来困难。回流提取所用时间较长，且一次提取又不完全（一般提取 2-3 次）药液受热时间也长，致使其中的化学成分易改变。超声提取法虽然可以提高提取速率，但是对药材
8、的粒度的大小和形状有一定要求，否则提取液的后处理困难。冷浸法虽然避免了加热，对热不稳定性药材有一定的安全性，但此法提取时间长，浸提 48h，提取仍不完全尤其对于坚硬较粗的药材，溶剂难以浸入组织内部，所以提取效率不高，同时溶剂消耗量大。渗漉法与冷浸法相比渗漉法保持了相当的浓度差，所以提取效率高，浸提液杂质较少，但提取时间很长溶剂消耗量特别大，操作麻烦。使用索氏提取法，由于每一次提取都为新鲜纯溶剂，保持了比较大的浓度差，使得提取率提高，提取液杂质少，是我们实验中主要采用的提取方法。（五）鉴定1.化学检识：分别取大黄素、大黄酚等少许，用乙醚溶解，做如下反应：A：碱液试验：取试液 1ml，加 20%N
9、aOH 数滴，观察颜色。B醋酸镁反应：取试样 1ml，加醋酸镁试剂数滴，观察现袋。2薄层鉴定：吸附剂：硅胶CMC展开剂：C6H6EtoAc(3:2 或 97：9)。显色剂：（1）氨蒸气熏。 （2）5%KOH 喷雾。（六）实验说明及注意事项1.用各缓冲液进行萃取时，采用一次性加入的方法，实验证明，如将缓冲液分次萃取，分离效果不理想。2.在装柱时要预先加入溶剂。（七）参考文献：1 张喜云虎杖的化学成分药理作用与提取分离J 天津药学2 张继天.天然药物化学M.北京:人民卫生出版社3 王素贤华会民吴立军,等.茜草中蒽醌类成分研究J.药学学报 4杨燕军舒惠一闵知大.巴戟天和恩施巴戟的蒽醌化合物J.药学学报5现代中草药成分化学 吴寿金，赵泰等 中国医药科技出版社6中草药有效成分提取与分离徐任生，陈仲良 上海科技出版社综合化学实验虎杖中羟基蒽醌的提取、分离与鉴定08 级化学教育殷利科2084010015
