《复方银黄微型灌肠剂对发热大鼠下丘脑PGE2及其受体的影响》由会员分享，可在线阅读，更多相关《复方银黄微型灌肠剂对发热大鼠下丘脑PGE2及其受体的影响（86页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、广西医科大学硕士学位论文复方银黄微型灌肠剂对发热大鼠下丘脑PGE及其受体的影响姓名：何惠申请学位级别：硕士专业：药理学指导教师：刘华钢200605012 0 0 3 辘乓士研恕生牛土论文主要英文缩略词2 0 0 3 衄项士研究生牛业论文复方银黄微型灌肠剂对发热大鼠下丘脑P G E 2 及其受体的影响摘要目的：用酵母混悬液复制大鼠发热模型，运用酶联接免疫吸附剂测定法( E L I S A ) 测定发热大鼠下丘脑组织中P G F , 2 含量的变化，并运用实时荧光定量P C R 技术来检测Y H C E 对发热大鼠下丘脑组织中E P l 、E P 4 受体m R N A表达的影响，以探讨Y H C
2、 E 的解热作用机制，为其临床应用提供实验依据和理论基础。方法：1 Y H C E 对发热大鼠下丘脑P G E 2 含量的影响：健康雄性W i s t a r大鼠，体重2 3 0 - a ：1 0 9 ，适应实验环境3 天后，选取体温合格大鼠，随机分组。以实验前测得的两次体温的平均值为大鼠的基础体温。除正常对照组外，每组大鼠均背部皮下注射2 0 酵母混悬液( 1 0 m l k g ) ，致热后1 h 各组分别灌肠给药，于给药后2 h 、4 h 、6 h 测肛温，并断头处死大鼠，取下丘脑组织，一8 0 保存各用。按E L I S A 试剂盒说明测定P O E 2 含量。2 Y I - I C
3、E 对发热大鼠下丘脑P G F a 受体m R N A 的影响：动物处理同前。给药后4 h 断头处死大鼠，取脑组织，一8 0 保存备用。设计合成引物。R e a l t i m eP C R 按试剂盒说明操作。结果l1 Y H C E 对发热大鼠下丘脑P G F a 含量的影响：从给药后2 h 至6 h ，发热组P G F a 的含量是逐渐增高的，并与体温变化的趋势相符；Y H ：C E在给药后2 h 至4 h 能明显抑制P G F a 含量的增高，与发热组相比有显著性差异( P 洗涤。倒空9 6 热叛，臻冲洗缓冲滚反复漂洗5 次，( 6 ) 显色。每孑L 中加入2 0 0 v iE l l
4、m a n s 反应物，盖好板，避光放置禚摇床上室温反应约6 0 分钟；( 7 ) 比色。将9 6 孔板放入酶标仪，读取备孔在波长为4 0 5 - 4 2 0 之闻的吸光度( A 值) 。o 0 5 ) 。大鼠背部皮下注射2 0 酵母悬液( 新鲜配制，1 0 m l k g ) 致热后，发热组有明显的发热趋势，随着时间地推移，体温逐渐上升，与正常对照组比较，两者之间有显著性差异( 均P 0 0 5 ) 。从图1 的体温变化趋势看，Y H C E 在给药后2 h 解热效果最好，随后逐渐减弱；而阳性药在给药后4 h 解热效果最好。表4Y I - I C E 对发热大鼠体温的影响( x 签，n -
5、- - 8 )v 8 正常组：P ( 0 0 5n n P O 0 5 ) 。说明发热后大鼠下丘脑中E P 4 受体m R N A 的表达也增多，而Y H C E 及阳性药同样也能抑制E P 4 受体表达的增多，两者的抑制伽彻渤如聊抛啪瑚o锄m-L卫、3L比v卫2 0 0 3i t 嘎士研究生牛业砖文效果无差异。结果见表8 和图1 7 。表8Y H C E 对发热大鼠下丘脑E P t 、E P , R N A 表达的影响( i s ，- 8 )v s 发热组：P B W A 8 6 8 C ，B W 2 4 5 C S T A 2 它们的髓值分别是2 1 、2 2 0 、2 5 0 及1 6
6、0 0 n M 。这个亲和力顺序与所报道的人的克隆D P 受体不一样，人D P 受体表现出来的与P G D ：、B W A 8 6 8 C 和B W 2 4 5 C 的亲和力几乎相等，它们的豇值分别是1 1 、0 9 及1 7n M ( 4 1 ) 0 受体与P G D 2 和B W 2 4 5 C 这两种配体的亲和力存在有差异，但它们在人和小鼠上表现出的激动剂效能几乎是一样的，它们都能作为D P 受体的完全激动剂。它们作用于小鼠D P 受体使c A M P 上升的E C 5 0 值分别是0 5 4 和6 8n M ，而作用于人的D P 受体则是0 7 和6n M 。B w 久8 6 8 C
7、是一个假设的D P 受体拮抗剂，它只能引起有限的反应，说明它是一个局部激动剂，与在人D P 受体上的硒值一致的是，B W A 8 6 8 C 对由B W 2 4 5 C 诱导的颈静脉平滑肌舒张显示出8 7 的p K B 值( 4 2 ) o D P 受体只在与其公认的配体结合时，才表现出高的亲和力，其它的前列腺素及其拟似剂的亲和力与之相比，至少低两个数量级。另外，P G D 2 与小鼠的F P 受体结合的亲和力和与D P 受体结合的亲和力比较，F P 受体的面值为4 7n M ，提示P G D 2 有可能也作用于F P 受体。2 、E P l 受体及其配体能和小鼠E P 。受体结合的配体，其亲
8、和力排列的顺序是：1 7 一苯基一P G E 2 、P G F _ 垃、前列黄酮、伊落前列素( i l o p r o s t ) 前列素地耳( m i s o p r o s t 0 1 ) 、M B 一2 8 7 6 7 1 1 一脱氧P G E l P G F 2 a ，它们的磁值分别是1 4 、2 0 ：2 1 、2 1 、3 6 、1 2 0 、1 2 0 、6 0 0 及1 3 0 0n M 。一些E P 受体激动剂，比如：1 6 ，1 6 一二甲基一P O F _ a 、G R 一6 3 7 9 9 X 、布他前列素( b u t a p r o s t ) 、1 - O H -
9、 P G E l 及A H l 3 2 0 5等，并不能与E P l 受体进行任何有意义的结合。S C 1 9 2 2 0 和A H 一6 8 0 9 是已知的E P l 受体拮抗剂( 4 3 ) ，但对小鼠的E P l 受体却没有亲和力。人的E P l 受体与P ( 玎五结合的解离常数值( 黝值是1n M ，与其它P G 结合的排列顺序是：2 0 0 3 衄曩士研竞生牛生论文P G E 2 P G E I P G F 2 0 P G D 2 ( 6 3 ) 。人的E P l 受体也能与A H 6 8 0 9 结合并算出厢值为3 3 3n M ，同时也被注意到与S C 1 9 2 2 0 和布
10、他前列素有弱的亲和力，它们的厢值分别是4 5 和3 3 t t M 。对于这些被经常用来测定P G E 的某一个作用是否由E P l 受体介导的化合物而言，上述的种属差异是非常重要的。值得注意的是，被认为是E P 。受体的特异性激动剂的1 7 一苯基一P G E 2 ，能与E P 3 受体结合并有极高的亲和力，这亲和力甚至超过了E P l 受体。3 、E P 2 受体及其配体E P 受体的配体中，能和小鼠E P 2 受体结合的，其亲和力排列的顺序是：P G E l 、P G E 2 1 6 ，1 6 一二甲基一P G E 2 1 1 脱氧一P G E l 布他前列素A H l 3 2 0 5
11、、前列素地耳 A H - - 6 8 0 9 ，它们的髓值分别是：1 0 、1 2 、1 7 、4 5 、1 1 0 、2 4 0 、2 5 0 及3 5 0 。此外，E P 2 受体能与T P 的两个配体：I - B O P 和S T A 2结合但亲和力较低，它们的厢值都是2 2 0n l V l 。1 9 R ( O H ) 一P G E 2 被报道出来，是作为E P 2 受体的特异性激动剂，然而，它与小鼠的E P 2 受体却没有亲和力，与F P 受体仅仅有较的弱亲和力。布他前列素只与E P 2 受体有亲和力，并针对E P 2 受体显示了极高的选择性。其它的E P 的激动剂，比如：1 7
12、一苯基一P G 喝、前列黄酮、M B 一2 8 7 6 7 、G R - 6 3 7 9 9 X 或、1 - O H - P G E l 都没有被观察到有意义的结合。人的E P 2 受体与P G E 2 和P G E 拟似剂结合的情况，与小鼠的非常类似，它们的排列顺序为：P G F - , 2 P G E l 1 6 ，1 6 二甲基- P G E 2 1 1 一脱氧P G E l 布他前列素 A H l 3 2 0 5 、1 9 R ( O H ) P G E 2 1 - O H - P G E l 、M & B 一2 8 7 6 7 前列黄酮( h a 值- - o ) 。前列素F - ,
13、 2 、1 - O H P G E l 、A H l 3 2 0 5 及布他前列素对于人E P 2 受体而言是完全激动剂，它们的E C 5 0 值分别是：4 3 、2 0 0 0 、3 1 0 0 和5 8 0 0 n M 。4 、E P 3 受体及其配体大多数的E P 3 受体都能与大多数的E P 配体结合，它们的亲和力排列的顺序是：前列黄酮、M B 一2 8 7 6 7 、P G E 2 、P G E l 、1 1 脱氧P G E l 、O R 6 3 7 9 9 X 、1 6 ，1 6 一二甲基- P G E 2 、1 7 一苯基一P G F _ a 前列素地耳、A H l 3 2 0
14、5 1 0 H P G E l ，它们的硒值分别是：0 6 0 、0 6 8 、0 8 5 、1 1 、1 5 、1 9 、1 9 、2 0 0 3 峨项士研竞生牛业论文3 7 、6 7 、8 2 和3 3 0 n M ( 表1 ) 。此外，小鼠的E P s 受体能与口的三种配体：伊落前列素、卡巴环素( c a r b a c y c l i n ) 和异卡巴环素( i s o c a r b a c y c l i n ) 结合；并能与T P 配体S T A 2 结合，它们与E P 3 受体结合的硒值比得上它们与各自受体结合时的丽值。E P s 受体还能与P 的其它两种配体布他前列素和西卡前
15、列素( c i c a p r o s t ) 结合，蔚值分别是：1 l O 和1 7 0n M 。还有，E P 3 受体能与P G F 2 a 、I - B O P 和P G D 2 结合，髓值分别是：7 5 、1 0 0 和2 8 0n M 。尽管前列黄酮、M B 一2 8 7 6 7 、1 6 ，1 6 一二甲基P G F _ 砼和1 1 一脱氧一P G E l 也能与其它受体结合，但它们与E P 3 受体的结合显示出了极高的亲和力。前列黄酮与E P 。和F P 都有亲和力；作为E P l 和E P 3 受体激动剂的M B 2 8 7 6 7 ，也能与F P结合且厢值为1 2 4n M
16、；在所有P G E 拟似剂中，1 6 ，1 6 二甲基P G F a 与E P 2 和E P 4 受体结合的亲和力是最高的；1 1 一脱氧- P G E l 则与E P 2 、E P 4 和F P 受体都有亲和力；前列素地耳，E P 2 和E P 3 受体的激动剂，与E P l 、E P 2 、E P 3和E P 4 受体结合的髓值分别是：1 1 8 、2 5 4 、6 6 8 和6 6 8n M 。A H l 3 2 0 5 是E P 2 受体激动剂，与E P 3 受体结合也显示出了极高的亲和力。另一方面，G R 一6 3 7 9 9 X 仅仅对E P 3 受体显示出极高的亲和力，说明其对E P 3 受体的高度选择性。人的E P a 受体与P G E 2 和M B 2 8 7 6 7 结合的局和硒值分别是：0 7 和0 2n M 。奇怪的是，人的E P
