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1、R P H P L C 法测定白芷提取分离物中欧前胡素的含量胡大强1 ，侯丽娜2 ，孟德胜1 ，陈亮1 ，傅若秋1 ，徐靖1( 1 第三军医大学第三附属医院药剂科，重庆市4 0 0 0 4 2 ；2 蚌埠医学院药学系。蚌埠市2 3 3 0 3 0 )I 要目的：建立测定自芷提取分离物中欧前胡素含量的高效液相色谱方法。方法：色谱柱为Z o r b a xE c l i p s eX D B - G *柱，流动相O 6 m i n 甲醇一水( 6 5 ：3 5 ) ，6 ：1 0 1 5 ：O O m i n 甲醇一水( 5 5 ：4 5 ) ，1 5 ：1 0 2 5 ：0 0 m i n 甲醇
2、一水( 6 5 ：3 5 ) ，流速l m l m i n ，检测波长3 0 2r l l n ，柱温为室温。结果：欧前胡索在6 6 3 3 0 l g l m l 范围内线性关系良好( r = 0 9 9 9 8 ) ，线性方程为Y = O 0 1 4 2 X + 0 0 0 6 ( n = 5 ，r = O 9 9 9 8 ) ，平均回收率为9 8 6 8 ( R S D = 0 6 7 ，n = 5 ) 。结论；本方法操作简便，结果可靠，可用于大孔吸附树脂提取欧前胡素的含量测定。关键词高效液相色谱法：欧前胡素；含量测定白芷( R a d i xA n g e l i c ad a h u
3、 r i c a ) 为伞形科植物的干燥根，味辛，性温，归肺、胃、大肠经。芳香升散，有祛病除湿、排脓生肌、活血止痛、抗炎、抑制病原微生物、抗肿瘤、保肝等多种药理活性，近年来发现其清除自由基、增自及治疗白癜风的作用。白芷的主要有效成分为香豆素类化合物，欧前胡素为其中之一。通常采用薄层色谱法测定欧前胡素的含量。本研究采用高效液相色谱方法测定白芷提取分离物中欧前胡素含量，为其制剂研究打下基础。l 仪器与试药1 1 仪器A g i l e n t1 2 0 0 L C 高效液相色谱仪，包括G 1 3 2 9 A 标准自动进样器、G 1 3 1 4 BV W D 检测器( 美国安捷伦科技有限公司) 。1
4、 2 试药欧前胡素对照品( 中国药品生物制品鉴定所，批号l 1 0 8 2 6 2 0 0 7 1 2 ) ：自芷( 购自太极集团重庆中药饮片厂有限公司，批号0 9 0 2 1 2 ，) ；甲醇( 分析纯，重庆川东化工有限公司，批号0 0 8 1 1 0 4 ) ：甲醇( 色谱纯，S e h a r l a u C h e m i e ) ；药用乙醇( 四川金鹰实业有限公司，批号0 9 0 2 0 9 ) 。2 方法与结果2 1 色谱条件【1 , 2 】色谱柱：Z o r b a xE c l i p s eX D B C 1 8 ( 4 6 x 1 5 0 r a m ，7 “m ) ；流动
5、相：0 ：0 0 - - 6 ：0 0 m i n 甲醇水( 6 5 ：3 5 ) ，“1 5m i n 甲醇水( 5 5 ：4 5 ) ，1 5 2 5r a i n 甲醇水( 6 5 ：3 0 ) ：流速：1 m l m i n ；检测波长：3 0 2n n l ；柱温：室温；进样量：2 0 肛l ；理论塔板数为3 6 0 0 。色谱图见图l 。1 3 8高效液相色蠢1 欧前胡索BA 欧前胡素对照品；B 供试品溶液F i glH P L C1 I m p e r a t o r i nA I m p e r a t o r i nc o n t r o ls u b s t a n c e
6、 ；B s a m p l eo f A n g e l i c ad a h u r i c a2 2 供试品溶液的制备【孓4 】乙醇I 口l 流提取F j 芷总香豆素后，经大孔吸附树脂柱分离得到欧前胡素含量较高的供试品溶液，按上述方法制备供试品溶液3 批。2 3 对照品储备液的制备精密称取欧前胡素对照品0 0 3 3 0 9 ，置于1 0 m l 容量瓶中。加甲醇定容至刻度，摇匀。取上述液1 0 m l 至5 0l l l l 容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀得浓度为6 6 0 9 9 m l 对照品储备液。2 4 线性关系考察分别精密吸取2 。3 ”项下对照品储备液1 0 、2 0 、3
7、 0 、4 。0 、5 0 m l ，分别置于1 0 m l 容量瓶中，甲醇定容至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤后，按“2 1 ”项下测定。以峰面积积分值( Y ) 对欧前胡素浓度( X )进行线性回归，得回归方程为Y = 0 0 1 4 2X + 0 0 0 6 0 ( n _ 5 ，间9 9 9 8 ) 。结果表明欧前胡素在6 6 - 3 3 0 t t g m l范围内的线性关系良好。2 5 精密度试验取“2 5 ”项下的浓度为1 9 8 p g m l 溶液，分别于0 、O 5 、1 0 、2 0 、4 0h 按“2 1 ”项下测定，R S D 为0 5 9 。2 6 加样回收率试验在已知含
8、量的欧前胡素供试品溶液l m l 的3 个1 0 m l 容量瓶中，分别精密加入欧前胡素储备液1 0 、2 0 、4 0 m l ，甲醇定容至刻度，摇匀，即配成低、中、高浓度欧前胡素溶液，按“2 1 ”项下测定，结果见表l 。1 3 9表1 加样回收率试验结果( n = 5 )T a b iR e s u l t so f r e c o v e r yt e s t s ( I 产5 )低中高6 66 6 6 71 0 1 o6 66 66 66 61 3 21 3 21 3 21 3 21 3 22 “2 “2 “2 6 42 6 46 7 0 46 6 6 66 6 7 56 6 9 2
9、1 3 1 2 91 3 0 6 91 2 9 。1 21 3 0 7 31 2 9 6 22 6 0 6 72 5 9 9 12 6 0 72 6 0 0 12 5 9 5 01 0 1 61 0 1 01 0 1 21 0 1 49 9 59 9 09 7 89 9 09 8 29 8 79 8 49 8 79 8 59 8 31 0 1 2 0O 2 09 8 6 80 ，6 79 8 5 2O 1 82 7 供试品溶液中欧前胡素含量测定取“2 。2 ”项下制备的3 批供试品溶液，2 5m l 容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，摇匀，微孔滤膜过滤后按“2 1 ”项下测定， 3 讨论( 略) 参考文献( 略)分别精密吸取1 0m l ，水浴蒸干后，加甲醇溶解后转移置再精密吸取2 0m l 至1 0m l 容量瓶中，甲醇定容至刻度，供试品溶液的浓度分别为1 0 1 、0 9 8 、0 9 2 m g m l 。1 4 0
