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1、实验教学内容:血清蛋白质的分离与纯化实验教学内容:血清蛋白质的分离与纯化实验教学时间:实验教学时间:(本实验需本实验需 12 学时,分学时,分 3 次实验完成次实验完成)教学对象:教学对象:临床医学、护理学、影像各专业实验目的:实验目的:1、分离血清得到高纯度的白蛋白2、掌握蛋白质盐析原理与实验操作技术、葡聚糖凝胶 G-25 脱盐原理与实验操作技术、DEAE-纤维素离子交换原理与实验操作技术、考马斯亮蓝 G250 染色法定量检测蛋白质的原理和操作方法、SDS-PAGE 电泳的原理和操作技术3、掌握紫外检测仪、自动部分收集器、记录仪、恒压高位槽的原理与使用方法教学重点:教学重点: 1、熟悉蛋白质
2、分离纯化的思路和一般方法; 2、掌握蛋白质盐析原理、葡聚糖凝胶 G-25 脱盐原理、DEAE-纤维素离子原理、考马斯亮蓝 G250 染色法定量检测蛋白质的原理和 SDS-PAGE 电泳的原理; 3、掌握凝胶层析、离子交换层析法、考马斯亮蓝 G250 染色法和 SDS-PAGE 电 泳的实验操作技术 4、掌握紫外检测仪、自动部分收集器、记录仪、恒压高位槽的原理与使用方法教学难点:教学难点: 1、DEAE-纤维素离子原理; 2、SDS-PAGE 电泳的原理; 3、凝胶层析、离子交换层析法和 SDS-PAGE 电泳的实验操作技术; 4、紫外检测仪、自动部分收集器、记录仪的使用方法教学方法:教学方法:
3、幻灯片结合黑板板书,并有教师演示操作教学内容及时间分配:教学内容及时间分配: 第一次实验(4 小时): 1、讲解实验目的、思路和安排(10 分) 2、盐析的原理(5 分) 3、脱盐的原理和方法比较(10 分) 4、盐析和凝胶层析的操作步骤(10 分) 5、紫外检测仪、自动部分收集器、记录仪、恒压高位槽的原理与使用(30 分)6、学生开始调试仪器、测定流速、设置实验条件(10 分) 7、学生进行盐析(15 分) 8、教师演示上样操作(5 分) 9、学生脱盐处理、收集样品并保存(2 小时) 10、学生平衡层析柱,处理图形并记录(20 分)第二次实验(4 小时):1、分析上次实验结果和总结经验(10
4、 分) 2、讲解离子交换的原理(15 分) 3、离子交换的操作步骤(10 分) 4、复习紫外检测仪、自动部分收集器、记录仪、恒压高位槽的使用(5 分) 5、学生开始调试仪器、测定流速、设置实验条件(10 分) 6、学生把上次样品进行处理、收集样品并保存(3 小时) 7、学生再次平衡离子交换柱,处理图形并记录(20 分)第三次实验(4 小时): 1、分析上次实验结果和总结经验(5 分) 2、讲解蛋白质定量方法的原理和各个方法的比较(10 分) 3、考马斯亮蓝 G250 染色法的操作步骤(5 分) 4、讲解 SDS-PAGE 电泳的原理和操作技术(20 分) 5、学生用考马斯亮蓝 G250 染色法检测并计算样品中蛋白质浓度(10 分) 6、学生制胶、并对上次保存样品进行处理(2 小时) 7、学生上样、电泳(2 小时) 8、教师指导学生剥胶(30 分) 9、教师对凝胶进行染色、漂洗(课下操作,在下次实验时观察实验结果)