实验教学内容：血清蛋白质的分离与纯化

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1、实验教学内容：血清蛋白质的分离与纯化实验教学内容：血清蛋白质的分离与纯化实验教学时间：实验教学时间：(本实验需本实验需 12 学时，分学时，分 3 次实验完成次实验完成)教学对象：教学对象：临床医学、护理学、影像各专业实验目的：实验目的：1、分离血清得到高纯度的白蛋白2、掌握蛋白质盐析原理与实验操作技术、葡聚糖凝胶 G-25 脱盐原理与实验操作技术、DEAE-纤维素离子交换原理与实验操作技术、考马斯亮蓝 G250 染色法定量检测蛋白质的原理和操作方法、SDS-PAGE 电泳的原理和操作技术3、掌握紫外检测仪、自动部分收集器、记录仪、恒压高位槽的原理与使用方法教学重点：教学重点： 1、熟悉蛋白质

2、分离纯化的思路和一般方法； 2、掌握蛋白质盐析原理、葡聚糖凝胶 G-25 脱盐原理、DEAE-纤维素离子原理、考马斯亮蓝 G250 染色法定量检测蛋白质的原理和 SDS-PAGE 电泳的原理； 3、掌握凝胶层析、离子交换层析法、考马斯亮蓝 G250 染色法和 SDS-PAGE 电 泳的实验操作技术 4、掌握紫外检测仪、自动部分收集器、记录仪、恒压高位槽的原理与使用方法教学难点：教学难点： 1、DEAE-纤维素离子原理； 2、SDS-PAGE 电泳的原理； 3、凝胶层析、离子交换层析法和 SDS-PAGE 电泳的实验操作技术； 4、紫外检测仪、自动部分收集器、记录仪的使用方法教学方法：教学方法：

3、幻灯片结合黑板板书，并有教师演示操作教学内容及时间分配：教学内容及时间分配： 第一次实验（4 小时）： 1、讲解实验目的、思路和安排（10 分） 2、盐析的原理（5 分） 3、脱盐的原理和方法比较（10 分） 4、盐析和凝胶层析的操作步骤（10 分） 5、紫外检测仪、自动部分收集器、记录仪、恒压高位槽的原理与使用（30 分）6、学生开始调试仪器、测定流速、设置实验条件（10 分） 7、学生进行盐析（15 分） 8、教师演示上样操作（5 分） 9、学生脱盐处理、收集样品并保存（2 小时） 10、学生平衡层析柱，处理图形并记录（20 分）第二次实验（4 小时）：1、分析上次实验结果和总结经验（10

4、 分） 2、讲解离子交换的原理（15 分） 3、离子交换的操作步骤（10 分） 4、复习紫外检测仪、自动部分收集器、记录仪、恒压高位槽的使用（5 分） 5、学生开始调试仪器、测定流速、设置实验条件（10 分） 6、学生把上次样品进行处理、收集样品并保存（3 小时） 7、学生再次平衡离子交换柱，处理图形并记录（20 分）第三次实验（4 小时）： 1、分析上次实验结果和总结经验（5 分） 2、讲解蛋白质定量方法的原理和各个方法的比较（10 分） 3、考马斯亮蓝 G250 染色法的操作步骤（5 分） 4、讲解 SDS-PAGE 电泳的原理和操作技术（20 分） 5、学生用考马斯亮蓝 G250 染色法检测并计算样品中蛋白质浓度（10 分） 6、学生制胶、并对上次保存样品进行处理（2 小时） 7、学生上样、电泳（2 小时） 8、教师指导学生剥胶（30 分） 9、教师对凝胶进行染色、漂洗（课下操作，在下次实验时观察实验结果）