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1、实验四实验四 玉米须中黄酮和多糖的提取玉米须中黄酮和多糖的提取 、鉴别与含量测定、鉴别与含量测定（设计性实验）一、目的与要求一、目的与要求通过对玉米须中黄酮和多糖的分步提取、鉴别和含量测定，掌握天然产物 的提取、鉴别和含量测定的方法。二、基本原理二、基本原理黄酮类化合物多为结晶性固体，少数(如黄酮苷类)为无定形粉末。黄酮类 化合物多为黄色，其颜色的深浅与其是否具有交叉共扼体系、助色团的多少有 关，一般具有交叉共轭体系的黄酮类化合物(如黄酮、黄酮醇、查耳酮)多呈黄 色或颜色较深，而不含有交叉共轭体系的黄酮类化合物(如二氢黄酮、二氢查耳 酮、异黄酮)多为无色或颜色较浅。黄酮类化合物在紫外光下一般具
2、有荧光，荧 光的颜色与分子的结构有关。黄酮类化合物的溶解度因其结构及存在的状态(苷 或苷元、单糖苷、双糖苷或三糖苷)不同而有很大的差异。一般的游离黄酮苷元 难溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙腈等有机溶剂及稀碱中。 黄酮类化合物糖苷化后，水溶性增加，脂溶性降低，一般易溶于热水、甲醇、 乙醇及稀碱溶液，而难溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚等亲脂性有机溶剂。游离 黄酮和黄酮苷一般都含酚羟基，故都可溶于碱中，加酸后又沉淀出来，可利用 此性质提取、分离黄酮类化合物。 玉米须中含黄酮类物质，能清除羟基和 DPPH 自由基，有调节小鼠脂质代 谢、抗衰老和抗疲劳作用。研究结果表明低浓度的玉米须提取物也有
3、很好的抗 氧化能力。 多糖又称多聚糖(polysaccharide)，由单糖聚合成聚合度大于 10 的极性大分 子，分子量为数万至数百万，是构成生命活动的 4 大基本物质之一，与生命的 多种生理功能密切相关。多糖是自然界含量最丰富的生物聚合物，几乎存在于 所有生物体中。多糖的种类繁多，传统水提法是研究和应用的最多的一种方法。 水提法可用水煎煮提取，也可用冷水浸提。 玉米须多糖在玉米须中含量 14%，是玉米须最主要的水溶性成分之一。 大量试验证明多糖具有抗病毒、增强免疫力、抗肿瘤、延缓衰老、降血糖、抗 凝血等多种功效。三、仪器和试剂三、仪器和试剂1.仪器仪器 圆底烧瓶、冷凝管 烧杯 2 只，10
4、mL、50mL 量筒各 1 个，滤布，滴管， 蒸发皿，pH 试纸，玻璃棒，恒温槽，减压装置一套。紫外分光光度计，容量瓶。2.试剂试剂 玉米须 10.0g（干燥至恒重，过 40 目筛，精密称取）乙醇、蒸馏水、浓盐 酸、浓硫酸、苯酚、三氯化铝、锌粉、萘酚四、实验步骤四、实验步骤1g 玉米须放入 150ml 的圆底烧瓶中，以 30 倍水量、恒温水浴锅加热至90，开始计时，反应 1h，离心 3min（3500 转/min） ，上清液抽滤， 1.提取提取 （1）黄酮苷 取玉米须柱头 2.0g 放入圆底烧瓶中，以 120 为料液比，用 60%乙醇于80水浴内提取 1h；倒出，加入 10mL 溶剂提取 30
5、min，共提取 2 次，合并两次提取液过滤后，置 50mL 容量瓶中定容。 （2）多糖 取玉米须柱头 2.0g 放入圆底烧瓶中，以 120 为料液比，用蒸馏水于 90 水浴内提取 1h，倒出，加入 10mL 溶剂提取 30min，共提取 2 次，合并两次提 取液过滤后，置 50mL 容量瓶中定容。 2.鉴别鉴别 （1） 萘酚试验（Molisch 紫环反应） 取检品的水溶液 1ml，加 5萘酚试液数滴振摇后，沿管壁滴入 56 滴浓 硫酸，使成两液层，待 23 分钟后，两层液面出现紫红色环（糖、多糖或甙类） 。 多糖类遇浓硫酸被水解成单糖，单糖被浓硫酸脱水闭环，形成糠醛类化合物， 在浓硫酸存在下与
6、 萘酚发生酚醛缩合反应，生成紫红色缩合物。 （2）盐酸一镁（或锌）粉试验 取检品的乙醇溶液 1ml，加放少量镁粉（或锌粉） ，然后加浓盐酸 45 滴， 置沸水浴中加热 23 分钟，如出现红色示有游离黄酮类或黄酮甙（以同法不加 镁或粉做一对照，如两管都显红色则有花色素存在。如继续加碳酸试液使成碱 笥即变成紫色双转变为蓝色，即证明含花色素） 。 黄酮类的乙醇溶液，在盐酸存在的情况下，能被镁粉还原，生成花色甙元 而呈现红色或紫色反应（个别为淡黄色、橙色、紫色或蓝色） 。这是由于酮类化 合物分子中含有一个碱性氧原子，致能溶于稀酸中被还原成带四价的氧原子即 锌盐。本法是鉴别黄酮类的一个反应。但花色素本身
7、在酸性下（不需加镁粉） 呈红色，应加以区别。 3.含量测定方法含量测定方法 （1）黄酮含量测定 2g 玉米须 40mL 乙醇，提取出来的提取液浓缩至接近 50mL（小于 50mL） ， 然后用 60%乙醇定容至 50mL，摇匀，过滤， 精密移取续滤液 4mL 于 10mL 容 量瓶中，精密加入 0.1mol/L 三氯化铝甲醇显色剂溶液 4ml，摇匀，定容，放置 10 分钟。以 60%乙醇为空白，测定吸光度，代入上述回归方程中，计算出百分 含量。Y=29.302X+0.0213 相关系数：r=0.9999。黄酮在 4ug-20ug/mL 范围内,吸 收度和糖含量呈良好的线性关系。 （2）多糖含量
8、测定 取玉米须柱头 2.0g 放入圆底烧瓶中，以 120 为料液比，用蒸馏水于 90 水浴内提取 1h，倒出，加入 10mL 溶剂提取 30min，共提取 2 次，合并两次提 取液过滤后，置 50mL 容量瓶中定容。取滤液 5mL，定容于 25ml 容量瓶，摇匀。 从 25ml 容量瓶中移液 0.5ml 至 10mL 具塞试管，加 1ml5%苯酚，3.5ml 浓硫酸， 40恒温水浴 30min，自然冷却 15min 至室温，在 490nm 处测吸光度，在标准 曲线上计算出浓度，最后计算出得率。同时精密吸取蒸馏水 0.5ml, 于 10ml 试 具塞试管中，加入 5%苯酚溶液 1 mL,迅速加入
9、 3.5ml 浓硫酸，迅速摇匀，同法做空白在 490 nm 波长处测定吸收度(A)值如下： y=0.0038+5.91x,相关系数,r=0.9999,在糖含量 60140g/mL 范围内,吸收度和 糖含量呈良好的线性关系。模块二模块二实验五实验五 高锰酸钾法测定蛋壳中高锰酸钾法测定蛋壳中 CaO 的含量的含量（设计性实验）一、实验目的一、实验目的1.学习间接氧化还原测定 CaO 的含量。 2.巩固沉淀分离、过滤洗涤与滴定分析基本操作。 3.培养学生理论联系实际，独立进行实验的能力二、实验原理二、实验原理 鸡蛋壳的主要成分为 CaCO3,其次为 MgCO3、蛋白质、色素以及少量的 Fe、Al。利
10、用蛋壳中的 Ca2+与草酸盐形成难溶的草酸盐沉淀，将沉淀经过滤洗涤分离后溶解，用高锰酸钾法测定含量，换算出 CaO 的含量，反应如下：2 24C O22 2424CaC OCaC O24244224CaC OH SOCaSOH C O2 2244225H C O2MnO6H2Mn+10CO8H O 某些金属离子（Ba2+，Sr2+，Mg2+，Pb2+，Cd2+ 等）与2 24C O能形成沉淀对测定 Ca2+有干扰。三、实验步骤三、实验步骤1.蛋壳的处理。 2.CAO 含量的测定。四、思考题四、思考题1.用高锰酸钾滴定草酸根时，应注意哪些事项？2.用沉淀 Ca2+，为什么要先在酸性溶液中加入沉淀
11、剂，然后在4224()NHC O7080时滴加氨水至甲基橙变黄，使沉淀？224Ca C O3.为什么沉淀要洗至无Cl离子为止？4.如果将带有沉淀的滤纸一起投入烧杯，以硫酸处理后再用224Ca C O滴定，这样操作对结果有什么影响？4KMnO实验十一实验十一 三草酸根合铁（三草酸根合铁（III）酸钾的制备、性质和组成分析）酸钾的制备、性质和组成分析（综合性实验）一、实验目的一、实验目的1.掌握三草酸根合铁（III）酸钾的制备方法。 2.熟悉化学分析、热分析、电导率测定等方法在化合物组成分析中的应用。3.了解三草酸根合铁（III）酸钾的光化学性质。二、实验原理二、实验原理三草酸根合铁（III）酸合
12、成工艺有多种，例如，可采用氢氧化铁和草酸氢 钾反应；也可用硫酸亚铁铵与草酸反应得到草酸亚铁，再在过量草酸根存在下 用过氧化（）本实验采用三氯化铁和草酸钾直接反应制备。K3Fe(C2O4)33H2O 为亮绿色晶体，溶于水（0时 4.7g/100g 水，100时 117.7g/100g 水） ，难溶于乙醇、丙酮等有机溶剂。110失去结晶水，230 分解。该配合物对光敏感；可进行下列光反应： 2 K3Fe(C2O4)3 2FeC2O4+3K2C2O4+2CO2 因此，在实验室中可用碱草酸根含铁（III）酸钾作成感光纸；进行感光实 验。另外，由于它具有光的化学性质，能定量进行化学反应，常用作化学光量
13、计材料。用稀 H2SO4可使三草酸根合铁III酸钾分解产生 Fe3+和 C2O 用高锰2 -4酸钾标准溶液滴定试样中的 C2O 此时 Fe3+不干扰测定滴定后的溶液用锌粉2 -4还原 为 。 过滤除去过量的锌粉，使用高锰酸钾标准溶液滴定 Fe2+通过消耗高锰酸钾 标准溶液的体积及浓液计算得到 C2o和 Fe3+的含量。2 -4用电导体测定配合物的摩尔电导体 Km 可确定阴，阳离子数目之比，从而 确定配合物离子的电荷数，进一步确定化学式和原子结合的方式三、主要仪器和试剂三、主要仪器和试剂天平，台秤，电导率仪，抽滤瓶 , 布氏漏斗循环水泵 , 棕色容量瓶 ,烧杯 ,量 筒 蒸发皿。 草酸钾(k2c
14、2o4 H2O,化学纯)三绿化铁(FeCl3 6H2O,化学纯 ),K3Fe(cn)6 (化学纯), NaoH(2mol/L),H2SO4 (2mol/L,0.2mol/L), kMno4 标准溶液 (0.0200mol/L) 锌粉(分析纯),丙酮。 四、实验内容与步骤四、实验内容与步骤1. 三草酸根合铁(III)酸钾的制备称取 12g 草酸钾放入 100mL 烧杯中,加 20mL 水,加热使全部溶解.在溶液近 沸时边搅拌加入 8mL,三氯化铁 溶液（0.4g/mL）,将此溶液在冷水中冷却既有绿 色晶体析出，析出完全后减压过滤得粗产品。 将粗产品溶解在约 20mL 热水中，趁热过滤。将滤液在冰
15、水中冷却，待结 晶完全 后抽滤晶体产物先用少量冰水和丙酮洗涤，晾干，称重，计算，产率 2.配合物的组成分析C2O 的测定 准确称取约 1g 合成的三草酸合铁（III）酸钾绿色晶体2 -4于烧杯中，加入 25mL 3mol/L 的硫酸使之溶解再转移至 250mL 容器瓶中，稀释 至刻度，摇均。移取 25mL 试液于锥形瓶中加入 20mL3mol/L 硫酸，在 7080水浴中加热 5min 后，趁热用 高锰酸钾标准溶液滴定到溶液呈浅粉色，且 30s 不褪色即为终点，计下读 数。平行测定 三次，每次滴定完后溶液保留。Fe3+的测定 往上述滴定后的每份溶液中加入 1g 锌粉、5mL3moL/L 硫酸振
16、荡 8 10min 后，过滤除去过量的锌粉，滤纸用另一个锥行瓶承接。用 40mL0.2mol/L 的硫酸溶液洗涤原锥行瓶和沉淀，然后用高锰酸钾标准溶液滴定 到溶液呈浅粉色，30s 不褪色即为终点计下读数平行测定三次。 配离子电荷的确定，称取产品 0.1g，配成 100mL 溶液。在电导率仪上测 其电导 然后求出摩尔电导率 km 值 根据上述结果分析配合物的组成 3.光化学性质 将少量产品放在表面皿或点滴板上，在日光下放置一段时间，观察晶体 颜色的化 与放在暗处的晶体比较。 称取 0.5g 产物和 0.4K3Fe(cn)6,加 5mL 水配成溶液，用玻璃棒或毛笔 取 在纸上涂画，在日光直照下，观察变化。或者将此混合液均匀涂在纸上， 放暗处晾干后，附上图案，在强光下照射，观察变化。五、注意事项五、注意事项制备三草酸根合铁（III）酸钾时，可以往溶液中加入少量丙酮或乙醇，
