《APPL1在结直肠癌中的表达及临床意义》由会员分享，可在线阅读，更多相关《APPL1在结直肠癌中的表达及临床意义（74页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、At h e s i ss u b m i t t e dt oZ h e n g z h o uU n i v e r s i t yf o r t h ed e g r e eo fM a s t e rE x p r e s s i o no fA d a p t o rp r o t e i nc o n t a i n i n gP Hd o m a i n ，P T Bd o m a i na n dl e u c i n ez i p p e rm o t i f1 ( A P P L1 ) i nc o l o r e c t a lc a r c i n o g e n e
2、s i sB y Y a nZ h a n gS u p e r v i s o r ：M i nS o n gO n c o l o g yF i r s tA f f i l i a t e dH o s p i t a lo fZ h e n g z h o uU n i v e r s i t yA p r i l2 0 1 2I I I I II II III II II III I III| Y 210 4 0 2 6学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或
3、撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：张嫣日期：2 。f 2 年5J 弓2 DH学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学
4、。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：季K $ 焉日期：Z 0 1 2 年箩月2 石日摘要A P P L l 在结直肠癌中的表达及临床意义研究生张嫣导师宋敏郑州大学第一附属医院肿瘤科河南郑州4 5 0 0 5 2摘要目的与背景结直肠癌( c o l o r e e t a lc a n c e r , C R C ) ，是最常见的恶性肿瘤之一2 0 11 年美国临床医师癌症杂志公布癌症统计数据显示，2 0 0 8 年预计美国新发结直肠癌1 4 1 ，1 2 0 例，死亡4 9 ，3 8 0 例，其发病率和死亡率均居恶性肿瘤第三位，占消化系统肿瘤首位【l 】。在我国，结直肠癌发病率呈逐年
5、上升趋势，发病率和死亡率分别位列癌症第4 位和第5 位；在北京上海等城市，结直肠癌的发病率已跃居第2 或3 位。目前临床上治疗结直肠癌手段包括手术切除、放化疗、辅助放化疗、分子靶向治疗等，但多数患者就医时已为晚期，5 年生存率较低，疗效不佳。已知结直肠癌的发生发展涉及多基因改变和多阶段致癌的复杂过程，信号转导异常在此过程中占主要地位，因此针对胞内信号转导蛋白进行靶向治疗已经成为抗癌治疗的一个研究热点。A P P L l ( a d a p t o rp r o t e i nc o n t a i n i n gP Hd o m a i n ，P T Bd o m a i na n dl e
6、u c i n ez i p p e rm o t i f ) 又称D I P l 3 a ，是9 9 年由Y a s u h i r oM i t s u u c h 2 】等人利用酵母双杂交技术发现与A K T 2 相互作用的一种胞内衔接蛋白，包括B A R 、P H 和P T B 三个多功能结构域。A P P L I 利用不同结构域与多种膜受体和胞内信号分子相互作用，参与胞内多条信号通路的传导，在细胞存活、生长、增殖以及凋亡等过程中发挥重要作用。研究发现，A P P L l 在结肠癌【3 1 、前列腺癌【4 1 、卵巢癌【5 】等细胞株中均有表达，但发挥的作用并不相同，是促癌基因还是抑癌
7、基因尚无定论，作用机制也并不清楚。目前尚无实验证实A P P L l 在人结肠癌组织中的表达情况，因此本摘要研究通过检测A P P L l 蛋白在结直肠癌及正常组织中的表达情况，分析A P P L I与结直肠癌临床病理参数的关系，初步探讨A P P L l 蛋白在结直肠癌发生发展中潜在作用以及可能作用机制。材料与方法1 资料收集郑州大学第一附属医院2 0 1 1 0 3 1 2 期间手术切除并经病理证实为结直肠癌组织标本3 5 例，其中结肠癌1 8 例，直肠癌1 7 例；男2 5 例，女1 0 例，平均年龄5 7 8 岁1 1 9 岁( 3 9 岁8 2 岁) ；按组织学类型划分：管状腺癌2
8、7 例、乳头状腺癌3 例、黏液腺癌3 例、印戒细胞癌2 例，按分化程度划分：高分化4 例、中分化2 3 例、低分化8 例；按照2 0 0 2 年U I C C 第六版T N M 的分期标准划分：I 期8 例、I I 期2 2 例、I 期5 例、期0 例；淋巴结转移7 例，无淋巴结转移2 8 例，同时选取2 7 例痔疮患者的正常直肠黏膜组织标本作为正常对照组，平均年龄4 2 0 岁8 7 岁( 2 6 5 7 岁) 。所有标本一分为二，一组经4 甲醛液固定、石蜡包埋，4 pm 连续切片后用于免疫组化，另一组于术后3 0 分钟内取出投入液氮中用于R T - P C R 检测。所有患者术前均未接受放
9、疗、化疗及靶向治疗。2 主要试剂：兔抗人A P P L l 多克隆抗体购自B B I 公司，s P 免疫组化试剂盒购于i n v i t r o g e n 公司，D A B 显色试剂盒购自北京中衫公司，R N A 柱式抽提试剂盒购自B B I 公司，逆转录试剂盒来自F e r m e n t a s 公司。3 引物A P P L l 基因引物( 3 5 0 b p ) “上游5 - C A T C C A G A A A G A A A C A A C A C C A 3 ；下游5 - C A r I I AA G G T A T C C A G C C T 丌C G 3 ；1 3 a c
10、t i n 基因引物( 2 0 5 b p ) ：上游5 。T G A C G T G G A C A T C C G C A AA G ；下游5 C T G G A A G G T G G A C A G C G A G G 3 。引物均由上海生工生物工程有限公司设计合成。4 方法4 1 免疫组织化学染色：采用S P 法，A P P L l 抗体与原液按照1 ：1 0 0 比例稀释。阴性对照采用磷酸盐缓冲液( P B S ) 代替一抗。4 2 逆转录聚合酶链式反应R T - P C R ：首先，采用R N A 动物组织柱式一步提取法，提取结直肠癌组织及正常直肠黏膜组织的总R N A ；其次，
11、按照F e r m e n t a s 逆转n摘要录试剂盒说明书进行逆转录反应以及聚合酶链反应。5 统计处理：采用S P S S l 7 0 统计软件进行数据处理，以秩和检验以及独立样本t 检验进行数据分析，检验水准o = 0 0 5 。多士电二口7 Kl 免疫组化结果显示：A P P L l 蛋白在结直肠癌组织和正常组织中均有表达，主要定位于细胞质中，呈淡黄色、棕黄色、棕褐色颗粒状。A P P L l 蛋白在结直肠癌组和正常组织中的阳性表达率( 包括阳性和强阳性) 分别是8 8 7 ( 3 0 3 5 ) 和5 1 8 ( 1 4 2 7 ) ，A P P L l 蛋白在两组问的表达差异具有
12、统计学意义( P 5 0 强阳性，3 分；染色强度：无色，阴性0 分；淡黄色，弱阳性1 分；棕黄色，阳性2 分；棕褐色，强阳性3分；2 种计分相乘，0 分阴性，1 “ - 3 分弱阳性，4 - - 6 阳性，7 “ - 9 强阳性。1 2 8 统计学处理所有数据均采用S P S S l 7 0 统计软件包完成，两组及三组等级定性资料的分析，用秩和检验，若不符合方差齐性或正态性，则按照非参数检验( K r u s k a l W a l l i st e s t ) 。P O 0 5 ) 。因此，A P P L l 表达上调可能与结直肠癌的恶性程度以及浸润转移能力密切相关，有望成为结直肠癌的治疗
13、新的治疗靶点。附图附图ABC2D3图1A ：结肠癌组织中可见棕色染色，为阳性染色( 4 0 0 ) ，1 为弱阳性，2 为阳性，3 为强阳性，B ：正常组织中可见棕色染色，为阳性染色( 4 0 0 ) ，1 为弱阳性，2 为阳性，3 为强阳性；C ：结直肠癌组织阴性对照( 2 0 0 ) ；D ：正常组织阴性对照，未见棕色染色( 2 0 0 )附图1 098765432l卜4 0 D卜一2 0 0 b p图2R T - P C R 法检测结直肠癌组织及正常组织中A P P L Im R N A 的表达注：1 ，3 ，5 ，7 ，9 为癌组织；2 ，4 ，6 ，8 ，1 0 为正常组织肇 审甲T
14、图3R T - P C R 法检测结直肠癌组织及正常组织中A P P L l m R N A 的表达2 7【2 】【3 】【4 】【5 】【6 】6 7 】 8 】【9 】 1o 】 1 2 】【1 3 】【1 4 】f 1 5 】参考文献A h m e d i nJ e m a l ，D V M ，F r e d d i eB r a y , M e l i s s aM C e n t e re ta 1 G l o b a lC a n c e rS t a t i s t i c s J C A ：ac a n c e r j o u r n a lf o rc l i n i c i
15、 a n s ，2 0 1 1 ，6 1 ：6 9 - 9 0Y a s u h i r oM i t s u u c h i 。S t e v e nWJ o h n s o n ，G o n o s u k eS o n o d a ，e ta 1 I d e n t i f i c a t i o no fac h r o m o s o m e3 p 1 4 3 2 1 1g e n e ，A P P L ，e n c o d i n g 锄a d a p t o rm o l e c u l et h a ti n t e r a c t sw i t ht h eo n c o p
16、 r o t e i n s e r i n e t h r e o n i n ek i n a s eA K T 2 J O n c o g e n e ，1 9 9 9 ，1 8 ，4 8 9 1 - 4 8 9 8J i a y o uL i u ，F a y iY a o ，R u p i n gW u ，e ta 1 M e d i a t i o no ft h eD C CA p o p t o t i cS i g n a lb yD I P l 3 J B i o l o g i c a lC h e m i s t r y , 2 0 0 2 ，2 9 ：2 6 2 8 1 2 6 2 8 5L i nY a n g ，H u i - K u a nL i n ，S a l e hA l t u w a i j r i ，e ta 1 A P P LS u p p r e s s e
