猪附红细胞体体外培养及有效药物筛选研究

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1、华中农业大学硕士学位论文猪附红细胞体体外培养及有效药物筛选研究姓名：郑海红申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：姚宝安20050601猪附虹细胞体体外培养及有效药物的筛选研究猪附红细胞体体外培养及有效药物的筛选研究捅要猪附红细胞体病的存在，不仅给畜牧业带来了巨大经济损失，还严重威胁着人类身体健康。猪附红细胞体的体外培养方法不成熟，阻碍了人们对本病的研究。而且，目前由于对附红细胞体病了解甚少，已严重造成临床上滥用抗猪附红细胞体药物。本研究采用三种方法研究了猪附红细胞体的体外培养：方法一，用人和猪等8种动物的阴性红细胞来培养猪附红细胞体；方法二。根据培养霉形体的方法，在霉形体固体培养基和液体

2、培养基上来培养猪附红细胞体；方法三，根据V c r o E 6 细胞培养病毒方法，在完全培养基3 中来培养猪附红细胞体，在扫描电镜下观察猪附红细胞体在V e r o E 6 上附着情况，用P C R 法鉴定培养物的沉淀物中是否含有猪附红细胞体。同时，并在方法一的体外培养系统中，对市场上报道的几种有效药物进行了筛选。在方法一的体外培养系统中，猪附红细胞体在人和猪等8 种动物红细胞上皆能生长繁殖。猪红细胞对猪附红细胞体最为易感，且感染率最高，可达9 9 。而鸡红细胞对猪附红细胞体最不易感，且感染率一直低于5 。传代培养时，猪红细胞传代可达3 6 代以上( 每1 2 小时传一代) ：人、兔、小白鼠、

3、山羊、绵羊、狗的红细胞传代可达1 8 代以上( 每2 4 小时传一代) ：牛红细胞传代可达2 4 代以上( 每1 2 小时传一代) 。在方法二的体外培养系统中，在固体和液体培养基上均没有附红细胞体生长与繁殖。在方法三的体外培养系统中，在扫描电镜下可观察到附红细胞体在V e r o E - 6 上附着，但能否大量增值及能否传代没有研究。在药物筛选试验中，筛选出由华中农业大学动物医学院寄生虫研究室研发的附红净不仅药效快，而且效果好，与其它几种药相比，副作用也小。土霉素，红霉素，贝尼尔，恩诺沙星，磺胺对甲嘧啶对附红细胞体都有一定的作用，而硫酸庆大霉素对附红细胞体无效。总之，猪体外培养方法的健全，使得

4、深入研究猪附红细胞体病成为可能；在体外培养系统中，通过对抗附红细胞体病药物筛选为宿主们选择合适的药物提供了一定的理论依据；同时，本研究也为附红细胞体的分类提供了一定的理论依据。关键词：猪附红细胞体；体外培养；有效药物；筛选华中农业犬学2 0 0 5 届硕士毕业论文T h eC u l t i v a t i o no f E p e r y t h r o z o o ns u i si nV i t r oa n dT h eS e l e c t i o no fI t sE f f e c t i v eD r u g sA b s t r a c tE p e r y t h r o

5、z o o ns u i sh a sn o tm e r e l yb r o u g h tt h ee n o r m o u se c o n o m i cl o s s e st oa n i m a l ，a n di ts t i l lt h r e a t st h em a n k i n ds e r i o u s l y T h em e t h o dt oc u l t i v a t eE p e r y t h r o z o o ns u i si su n r i p ei nv i t r o ，w h i c hh a sh i n d e r e

6、dp e o p l ef r o ms t u d y i n gt h i sd i s e a s e A n dt h ep e o p l ek n o wl i t t l ea b o u tt h i sd i s e a s ea tp r e s e n t ，w h i c hh a sc a u s e dt oa b u s et h ed r u g st or e s i s tE p e r y t h r o z o o ns u i sc l i n i c a l l ys e r i o u s l ya l r e a d y T h er e s e

7、 a r c ha d o p t e dt h r e em e t h o d st os t u d yh o wt oc u l t i v a t eE p e r y t h r o z o o ns u i si nv i t r o ：M e t h o do n e ，c u l t i v a t eE p e r y t h r o z o o ns u i si nv i t r oo nt h en o r m a lr e db l o o dc e l lo fe i g h tk i n d so fa n i m a la n dt h en o r m a

8、lr e db l o o dc e l lo fp e 捂o n M e t h o dt w o ，c u l t i v a t eE p e r y t h r o z o o ns u i so nt h eS o l i dt r a i n i n gb a s eo ro nt h el i q u i dt r a i n i n gb a s eo fM y c o p l a s m aa c c o r d i n gt ot h em e t h o do ft h ec u l t i v a t i o no fM y c o p l a s m a M e t

9、h o dt h r e e c u l t i v a t eE p e r y t h r o z o o n5 “括i nt h et o t a lt r a i n i n gb a s e3i nv i t r oa c c o r d i n gt ot h em e t h o do ft h ec u l t i v a t i o no fv i r u so nV e r o E - 6c e l lO b s e r v eE p e r y t h r o z o o ns u i su n d e rs c a n n i n ge l e c t r i c a

10、lm i r r o r T r a i nt h es e d i m e n t so ft h i n gw i t hP C Rt os i g nw h e t h e rt oc o n t a i nE p e r y t h r o z o o n $ u i s A tt h es a m et i m e ，s e l e c te f f e c t i v ed r u g si nt r a i n i n gs y s t e mo fm e t h o do n ei nv i t r o E p e r y t h r o z o o ns u i sc a n

11、g r o wa n db r e e do nr e db l o o dc e l lo ft h ep e r s o na n do fe i g h tk i n d so fa n i m a li nt r a i n i n gs y s t e mo fm e t h o do n ei nv i t r o T h er e db l o o dc e l lo ft h ep i gi st h em o s ts u i t a b l ef o rE p e r y t h r o z o o ns u i st og r o wo n ，a n di t si n

12、f e c t i o nr a t ei st h eh i g h e s t ，m a yr e a c h9 9 T h er e db l o o dc e i lo fC h i c k e ni sn o ts u i t a b l ef o rE p e r y t h r o z o o ns u i st og r o wo n ，a n di t si n f e c t i o nr a t ei sa l w a y sl o w e rt h a n5 G od o w nt ot h ef u t u r eg e n e r a t i o no nt h e

13、r e dc e l l m a yr e a c hm o r et h a n3 6g e n e r a t i o n so nt h er e dc e l lo fp i g ( g e n e r a t i o n 1 2h o u r s ) ；m a yr e a c hm o r et h a n1 8g e n e r a t i o n so nt h er e dc e l lo fP e r s o n ，r a b b i t ，l i t t l ew h i t em o u s e ，g o a t ，s h e e pa n dd o g( g e n

14、e r a t i o n 2 4h o u r s ) ；m a yr e a c hm o r et h a n2 4g e n e r a t i o n so nt h er e dc e l lo fc o w E p e r y t h r o z o o ns u i sd o e sn o tg r o wo ns o l i da n dl i q u i dt r a i n i n gb a s eo rb r e e di nt r a i n i n gs y s t e mo fm e t h o dt w oi nv i t r o U n d e rs c a

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16、g e n e r a t i o nd on o ts t u d y I nd r u g ss e l e c t i n gt e s t ，t h ee f f e c to fF o n g h o n g j i n gi sn o to n l yr a p i d ，b u ta l s og o o d C o m p a r i n gw i t ho t h e rs o m ek i n d so fd r u g s ，s i d ee f f e c ti sa l s ol i t t l e S u l p h u r i ca c i di si n v a l i df o rE p e r y t h r o z o o ns u i s O t h e rd r u g ss e l e c t e dh a v ec e r t a i nr o l ei nE p e r y t h r o z o o ns u i s I naw o r d ，t h et r a i n i n