唾液分泌型免疫球蛋白A对口腔白假丝酵母菌黏附的影响

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1、KKME-专业医学搜索引擎 http:/ A 对口腔白假丝酵母菌黏附对口腔白假丝酵母菌黏附的影响的影响作者:陈昌荣,陈建钢 作者单位:1.赣南医学院第一附属医院口腔科 江西 南昌 341000;2.武汉大学中南医院口腔科 湖北 武汉 430071【摘要】 目的 从唾液分泌型免疫球蛋白 A(sIgA)的质量浓度和白假丝酵母菌黏附率变化的角度探讨人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者易感染口腔假丝酵母菌病的原因。方法 检测唾液sIgA 的质量浓度,并通过体外黏附试验观察白假丝酵母菌标准株(SCAL)和临床分离株(CCAL)在含和不含 sIgA 环境中与颊上皮细胞的黏附率,比较 HIV 感染组与健康对照组

2、口腔内白假丝酵母菌的黏附率。结果 HIV 感染组 sIgA 的质量浓度低于健康对照组(P0.05) ;在含 sIgA 环境中,SCAL 和 CCAL 的黏附率总体均值低于不含 sIgA 环境中 SCAL 和 CCAL 的黏附率总体均值,两组间差异有统计学意义(P=0.001) ;在含 sIgA 环境中,HIV 感染组口腔中的白假丝酵母菌的黏附率明显高于健康对照组(P0.05) 。结论 HIV 感染组易感染口腔假丝酵母菌病与唾液 sIgA 的质量浓度变化和白假丝酵母菌黏附力改变密切相关。【关键词】 分泌型免疫球蛋白 A; 白假丝酵母菌; 黏附; 人类免疫缺陷病毒; 获得性免疫缺陷综合征In vi

3、tro study of oral Saccharomyces albicans in adhesion from KKME-专业医学搜索引擎 http:/ immunodeficiency virus/acquired immunodeficiency syndrome individuals CHEN Chang-rong1, CHEN Jian-gang2. (1. Dept. of Stomatology, TheFirst Affiliated Hospital of Gannan Medical School, Nanchang 341000, China; 2. Dept. of

4、 Stomatology, Zhongnan Hospital, Wuhan University, Wuhan 430071, China)Abstract Objective To discuss the reason from which oral cavity Saccharomyces albicans get sick for beinginfected from the angle of looking at the human immunodeficiency virus(HIV)-infected persons and analyzingthe saliva secrete

5、d immunoglobulin A(sIgA) content and the Saccharomyces albicans adherency change rates.Methods To exam saliva sIgA content, to observe the Saccharomyces albicans standard and clinical separation in content of sIgA that is not contained in the sIgA environment and the buccal mucosa epithelial cell ad

6、herency rate by the sticky experiment, and to compare the differences of oral cavity Saccharomyces albicans adherency rate between HIV/acquired immunodeficiency syndrome(AIDS) group and healthy control group. Results ThesIgA content in HIV/AIDS group is lower than that of the healthy group(P0.05). I

7、n the environment of sIgAcontent, the ensemble average of Saccharomyces albicans stick rate(standard and clinical separation) is lower than that of the non-sIgA environment, and therefore the differences between the two groups do have the statistics sig-nificance(P=0.001). In the environment of sIgA

8、 content, KKME-专业医学搜索引擎 http:/ albicans adherency rate in the oral cavityof the HIV/AIDS group is higher than that of the healthy control group(P0.005). Conclusion The saliva sIgAcontent change and the Saccharomyces albicans adherency change in the HIV/AIDS group easily infected by the oral candidia

9、sis are interdependent and their relationship is rather close.Key words secreted immunoglobulin A; Saccharomyces albicans; adherency; human immunodeficiency virus; acquired immunodeficiency syndrome白假丝酵母菌(Saccharomyces albicans)曾称白色念珠菌,是人体正常菌群,主要寄生在人体的体表和口咽喉等部位,通常不致病,但在人体免疫系统受到抑制或损害时可引起严重的口腔白假丝酵母菌病。

10、分泌型免疫球蛋白 A(secreted im-munoglobulin A,sIgA)在防止白假丝酵母菌及其毒性产物通过黏膜进入机体等方面起着重要的作用。有学者对携带有口腔白假丝酵母菌的健康者的血清、唾液或排泄物中 sIgA 或白假丝酵母菌黏附等进行了大量的研究1-2,但是迄今未见对伴发口腔白假丝酵母菌感染的人类免疫缺陷病毒(hu-man immunodeficiency virus,HIV)感染者进行 sIgA的质量浓度变化与白假丝酵母菌黏附率间关系的研究报道。为了了解唾液 sIgA 的质量浓度变化与白假丝酵母菌黏附率间的关系,本研究对 10 例 HIV 感染者和 8 例健康者的唾液 sIg

11、A 的质量浓度及其在含和不含 sIgA 环境中的白假丝酵母菌标准株(SCAL)和白假丝酵KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 材料和方法1.1 研究对象HIV 感染组,10 例均来自湖北省蕲春县疾病控制中心,经抗 HIV 抗体检测确诊阳性,其中经临床和真菌学检查诊断为口腔白假丝酵母菌病者 1 例,无症状口腔白假丝酵母菌带菌者 3 例,CD4+ T 细胞数量(6396)106 个/L。健康对照组,8 例均来自武汉大学中南医院口腔科健康人群,其中经真菌学检查为健康无症状口腔白假丝酵母菌带菌者 2 例。所有受试者近 1 个月内均未使用过抗真菌药物、抗生素和免疫抑制剂等。1.2 标本采集采集所有受

12、试者舌下混合唾液装于消毒瓶内,2 h 内冰块冷冻下运到实验室,70 保存备用。用无菌棉拭子在宿主两颊部黏膜表面反复轻擦,将获取口腔分泌物的棉拭子置于消毒瓶中,2 h 内冰块冷冻下运至实验室行直接镜检。1.3 标本检测1.3.1 唾液 sIgA 的质量浓度测定 sIgA 的质量浓度测定采用放射免疫法。sIgA 放射免疫分析试剂盒由上海放射免疫分析技术研究所提供,测定按说明书进行操作,结果用 xs 表示,免疫计数器测定。1.3.2 直接镜检 用生理盐水作为口腔分泌物标本的载液,KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 黏附试验1.4.1 SCAL 和 CCAL 的来源 SCAL 由武汉大学医学院微

13、生物教研室提供。CCAL 来自获得性免疫缺陷综合征患者口腔分泌物的分离培养:将患者口腔分泌物标本接种于沙堡葡萄糖琼脂,35 孵育 24 h;再将可疑菌落转种于科玛嘉假丝酵母菌显色培养基,35 孵育 24 h;根据菌落的形态、颜色、凹陷程度初步判断为白假丝酵母菌,必要时用 API20C 准确鉴定。1.4.2 SCAL 和 CCAL 悬液的制备 将 SCAL 和 CCAL 置于沙堡葡萄糖琼脂上 37 生长过夜,在分光光度计上用无菌的浓度为 0.01 mol/L、pH7.2 的磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer solution,PBS)调配菌悬液至 11010 个/L 细胞。1.4.

14、3 颊上皮细胞(buccal epithelial cell,BEC)悬液的制备 试验当日无菌棉拭子擦拭健康者口腔两侧颊黏膜,将拭物用浓度为 0.01 mol/L、pH7.2 的 PBS 液 1 500 g 离心 3 min,洗涤 3 次,调整 BEC 密度至 1109 个/L 细胞。1.4.4 制备含和不含 sIgA 的唾液上清液 将收集的所有受试者的唾液各取 2 mL 于 4 、4 800 g 离心 30 min,得唾液上清液。不含 sIgA 的唾液上清液加入兔抗人 sIgA 血清 0.1 mL,于 37 、摇床 180 r/min 作用 2 h,3 000 g 离心 3 min 后取上清

15、液。1.4.5 黏附试验 分别将含 sIgA 的唾液上清液 0.1 mL(AKKME-专业医学搜索引擎 http:/ sIgA 的唾液上清液 0.2 mL(由 0.1 mL 唾液上清液和 0.1 mL 兔抗人 sIgA 血清组成,B 组)与密度为 11010 个/L 细胞的SCAL 和CCAL 于 37 、摇床 180 r/min 作用 2 h,用无菌的浓度为0.01 mol/L、pH7.2 的 PBS 于 1 500 g 离心 3 min,洗涤 3 次,重悬至0.1 mL;再分别加入 BEC 悬液 0.1 mL,于 37 、摇床 180 r/min 作用 2 h,用无菌的浓度为 0.01 mol/L、pH7.2 的 PBS 于 1 500 g 离心 3 min,洗涤 3 次弃去上清液;取沉淀物涂片,待干后用无水乙醇固定,革兰染色,镜下随机计数 200 个 BEC 中吸附 3 个白假丝酵母菌以上的 BEC 数,计算黏附率。1.5 统计学处理应用 SPSS 11.5 统计软件对计量资料进行统计分析。计量资料两组间比较用 t 检验,检验水平为 =0.05。2 结果2.1 唾液 sIgA 的质量浓度测定在健康对照组中,sIgA 的质量浓度明

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