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1、实验实验十一十一 DNA 的粗提取与的粗提取与鉴鉴定定 教学目的教学目的 1 初步掌握 DNA 粗提取和鉴定的方法。 2 观察提取出来的 DNA 物质。 实验实验原理原理 1 DNA 在 NaCl 溶液中的溶解度是随 NaCl 的浓度变化而改变的。DNA 在 014mol/L 的 NaCl 溶液中的溶解度最低，据此可使溶解于 NaCl 溶液中的 DNA 析出。 2 DNA 不溶于酒精溶液，但细胞中某些物质可以溶于酒精溶液，据此可提取杂质较少的 DNA。 3 DNA二苯胺蓝色（用于 DNA 的鉴定） 沸水浴 实验实验步步骤骤 1材料制备 0.1G/ml 柠檬酸钠 100ml 500ml 烧杯玻璃
2、棒搅拌1000r/min 离心 2min吸去上清液 活鸡血 180ml 即得鸡血细胞液（也可将上述烧杯置于冰箱中，静置一天使鸡血 细胞自行沉淀） 2方法步骤取血细胞液 5-10ml20ml 蒸馏水，玻璃棒沿一个方向快速搅拌 （1）提取血细胞核物质 纱布过滤，滤液中含 DNA 和其他核物质，如蛋白质原理：血细胞的细胞膜、核膜吸水胀破，玻璃棒快速搅拌机械加速 血细胞破裂 （2）溶解核内 DNA：滤液2mol/LNaCl 溶液 40ml，玻璃棒沿一个方向搅拌（3）析出含 DNA 的粘稠物：向上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并轻轻地沿一个方向搅拌，出现丝 状物，当丝状物不再增加时，停止加水（此时 NaCl
3、溶液相 当于稀释到 014mol/L） （4）滤取含 DNA 的粘稠物：用多层纱布过滤，含 DNA 的粘稠物留在纱布上（5）DNA 粘稠物再溶解： 20ml2mol/LNaCl 溶液 50ml 烧杯，上述粘稠物 缓慢搅拌 3 min （6）过滤含 DNA 的 2mol/LNaCl 溶液：用 2 层纱布过滤，滤液中含 DNA（7）提取含杂质较少的 DNA：上述溶液95%酒精，缓慢搅拌，出现乳白色丝状物，用玻璃棒将 丝装物卷起。 （8）DNA 鉴定：实验实验关关键键： ：本实验成功的关键是获取较纯净的 DNA，因此应注意： 1充分搅拌鸡血细胞液。DNA 存在于鸡血细胞核中。将鸡血细胞与蒸馏水混合以
4、后，应用 玻璃棒沿一个方向快速搅拌，使血细胞加速破裂，并释放出 DNA 2沉淀 DNA 必须用冷酒精。实验前必须准备好大量 95%的酒精，并在冰箱中（5以下）至 少存放 24 小时。 3正确搅拌含有悬浮物的溶液。在第（3）、 （5）步骤，玻璃棒不要直插烧杯底部，且搅拌要轻缓， 以便获得较完整的 DNA 分子。在步骤（7），要将玻璃棒插入烧杯 溶液中间，用手缓慢转动 5-10min。【同类题库】在“DNA 的粗提取与鉴定”的实验中分别使用 2molL、014molL、2molL、0015molL 的氯化钠溶液，其作用分别是（A） A溶解、析出、溶解、溶解 C溶解、溶解、析出、溶解 B析出、溶解、
5、析出、溶解 D溶解、析出、溶解、析出 下列图示中能反映 DNA 溶解度与 NaCI 溶液浓度之间关系的是（C）DNA 在下列哪种浓度的 NaCl 溶液中溶解度最低（B）A200mol/L B014 mol/L C0015 mol/L D010 mol/L 在 DNA 的粗提取过程中，初步析出 DNA 和提取较纯净的 DNA 所用的药品的浓度和名称 分别是（B） 01 g/ml 的柠檬酸钠溶液 200mol/L 的 NaCl 溶液 014 mol/L 的 NaCl 溶液 体积分数为 95%的酒精溶液 0015 mol/L 的 NaCl 溶液 004 mol/L 的 NaCl 溶液 A B C D
6、 与析出 DNA 粘稠物有关的叙述，不正确的是（C） A操作时缓缓滴加蒸馏水，降低 DNA 的溶解度 B在操作 A 时，用玻璃棒轻缓搅拌，以保证 DNA 分子完整 C加蒸馏水可同时降低 DNA 和蛋白质的溶解度，两者均可析出 D当丝状粘稠物不再增加时，此时 NaCl 的浓度约为 0.14mol/L. （多选）下列有关“DNA 粗提取”的操作中，正确的是（ABCD） A在鸡血细胞液中加入蒸馏水 B在“析出 DNA 粘稠物”时，要缓缓加入蒸馏水，直至溶液中粘稠物不再增多 C在用酒精凝集 DNA 时，要使用冷酒精 D用玻璃棒搅拌时要沿一个方向 “DNA 的粗提取与鉴定实验”中有三次过滤： （1）过滤
7、用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液。 （2）过滤含粘稠物的 0.14mol/L NaCl . （3）过滤溶解有 DNA 的 2mol/L NaCl. 以上三次过滤分别为了获得（A） A含核物质的滤液、纱布上的粘稠物、含 DNA 的滤液 B含核物质的滤液、滤液中 DNA 粘稠物、含 DNA 的滤液 C含核物质的滤液、滤液中 DNA 粘稠物、纱布中 DNA D含较纯的 DNA 滤液、纱布上粘稠物、含 DNA 的滤液 为获取较纯净的 DNA，采集来的血样可用蛋白酶处理，然后用有机溶剂除去蛋白质。下列有关叙述，正确的是（D） A除去血浆中的蛋白质 B除去染色体上的蛋白质C除去血细胞表面的蛋白质 D除去血细胞中
8、所有的蛋白质 在“DNA 的粗提取与鉴定实验”中，和“使用蛋白酶从染色体中提取 DNA”中的蛋白酶具有 相似作用的物质是（D） ANaCl 溶液 B蒸馏水 C柠檬酸钠 D冷却的酒精DNA 不溶于下列何种溶液（D） ANaCl 溶液 BKCl 溶液 CMgCl 溶液 D酒精溶液 下列不同浓度的 NaCl 溶液中，使 DNA 析出最彻底和溶解度最高的是（A）0.14mol/L 2mol/L 0.25mol/L 0.015 mol/L A和 B和 C和 D和 下列操作中，对 DNA 的提取量影响较小的是（B） A使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂，放出 DNA 等核物质 B搅拌时，要用玻璃棒沿一个方向轻缓
9、搅动 C在析出 DNA 粘稠物时，要缓缓加入蒸馏水，直至溶液中粘稠物不再增多 D在用酒精沉淀 DNA 时，要使用冷酒精，甚至再将混合液放入冰箱中冷却 E在 DNA 的溶解和再溶解时，要充分搅拌 在“DNA 的粗提取与鉴定实验”中： （1）实验中两次使用蒸馏水，第一次目的是 ，第二次目的是 。 （2）说明不同浓度的 NaCl 溶液的作用：2mol/L NaCl 的作用 ； 0.14mol/L NaCl 的作用 ； 0.015 mol/L NaCl 的作用 ； （3）提纯 DNA 的原理是 ，所用试剂为 。 搅拌要 ，目的 。 （4）能否用哺乳动物血液代替？简述理由。（1）使血细胞吸水破裂，溶解细
10、胞核内的 DNA；降低 NaCl 溶液的浓度，降低 DNA 分子在 NaCl 溶液中的溶解度析出 DNA 分子（2）溶解含 DNA 的核物质；使含 DNA 的丝状粘稠物析 出 DNA 分子；进行 DNA 鉴定（3）DNA 不溶于酒精溶液，但细胞中某些盐类蛋白质可溶于酒 精溶液；95%的冷却酒精；轻缓、同方向；保持 DNA 分子的完整性（4）不能，成熟的哺乳动物 红细胞没有细胞核 此实验中有几次用玻璃棒搅拌，每次搅拌的方向是一致的；但每次搅拌的强度不同，请就此 予以说明。 （1）提取鸡血细胞核内物质时，应 搅拌，目的是 。 （2）向含核物质的 2mol/L NaCl 溶液滴加蒸馏水析出 DNA
11、粘稠物时，应 搅拌，目的是 。 （3）DNA 粘稠物再溶解于 2mol/L NaCl 溶液时，应 搅拌，目的是 。 （4）用 95%的冷却酒精提取含杂质较少的 DNA 时，应 搅拌，目的是 。 （1）快速；加速血细胞破裂（2）轻缓；尽量保持 DNA 分子的完整性（3）轻缓；尽量保持 DNA 分子 的完整性（4）轻缓；保持 DNA 分子的完整性 以下是有关 DNA 的粗提取实验的阅读材料： a核酸极不稳定，在较为剧烈的化学、物理因素和酶的作用下很容易降解。在制备 DNA 时 要加入 DNA 酶（水解 DNA 的酶）的抑制剂柠檬酸钠，以除去 Mg，防止 DNA 酶的激活。 b核酸中的 DNA 和
12、RNA 在生物体内均以核蛋白（由核酸和蛋白质组成）的形式存在，DNA核蛋白在 1 mol/L NaCl 溶液中溶解度很大，但在 0.14mol/L NaCl 溶液中溶解度很低；而 RNA 核蛋白溶于 0.14mol/L NaCl 溶液。 c用苯酚处理，可使蛋白质变性，且留在苯酚层内；在 DNA 溶液中加入 25 倍体积，浓度 为 95%的酒精，可将 DNA 分离出来。此时 DNA 十分粘稠，可用玻璃棒搅成团取出。 dDNA 在强酸性环境下，水解产生脱氧核糖等小分子物质，它与二苯胺酸性溶液反应，能 生成蓝色化合物。 e实验材料与器械：柠檬酸钠溶液、石英砂、0.14mol/L NaCl 溶液、1
13、mol/L NaCl 溶液、苯酚、 95%的酒精、二苯胺试剂、浓硫酸、花椰菜、研钵、烧杯、漏斗、玻璃棒、量筒、石棉网、酒精灯、 吸管、试管等。 以下是 DNA 粗提取实验的步骤，请根据以上阅读材料回答有关问题： （1）研磨：取 10 克花椰菜加适量的 、 和石英砂，研磨成匀浆。 （2）过滤。 （3）将滤液稀释 6 倍，其目的是： 。 （4）离心处理，产生沉淀。（5）取沉淀物，置于 2 毫升 1 mol/L NaCl 溶液中，使 DNA 核蛋白再次溶解，再加 2 毫升苯酚 充分震荡后静止，待其分层后弃其上层苯酚。这一步的目的是除去 。（6）如何将剩余溶液中的 DNA 提取出来？ 。 （7）如何证明提取物质确实是 DNA 分子？ 。 其实验过程的要点是向放有 DNA 的试管中加入适量该试剂，混合均匀后，将试管置于 中 5min，待试管 后，观察试管中的颜色变化。这个实验也说明 DNA 耐 温，前 次温度有利于
