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1、KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 作者单位：新乡医学院第一附属医院泌尿外科, 河南 卫辉 453100【摘要】目的 检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)在膀胱肿瘤中的定量表达，探讨 hTERT 与膀胱肿瘤预后复发的关系。方法 采用免疫组织化学法和高清晰彩色医学图文分析系统，对 45 例膀胱移行细胞癌(BTCC)组织标本中的 hTERT 的表达情况进行定量检测，并用 13 例正常膀胱组织标本作为对照。结果 BTCC 组织标本中均可见有 hTERT 的表达，正常膀胱组织中无表达。hTERT 的表达强度与患者的性别、年龄、肿瘤的大小、部位以及肿瘤的单多发等情况无关(P0.05)，而与肿瘤复发有
2、关(P0.05),but it was correlated with recurrence of BTCC(P12 月复发者为 7 例)。另取 13 例正常膀胱粘膜组织为对照。1.2 实验方法1.2.1 标本处理手术切除的病变组织，取材后经体积分数 10%甲醛固定，常规石蜡包埋。连续 4 m 切片，HE 染色复核。1.2.2 免疫组织化学染色一抗 hTERT 为浓缩液，其浓度稀释至 1100 再行滴加，用 PBS 替代一抗作阴性对照。全部病例均采用 Envision 法。1.3 结果判定(1)hTERT 染色以细胞核或细胞浆染色为棕黄色为阳性，每例标本选取 10 个不相重叠的具有代表性的高倍
3、视野(1040)，并将图像输入高清晰彩色医学图文分析系统，进行图像定量分析，测定平均灰度值(average gray value，AG)和面数密度值(numerical density on area，NA，个/100 m2);(2) 根据每个视野的平均灰度值计算出每例的平均灰度值，以平均灰度值反映 hTERT 的表达强度，平均灰度与细胞内物质含量、免疫组织化学的染色强度成反比;(3) 以相同的方法得出 NA 值，NA 值与细胞内物质含量、免疫组织化学表达强度成正比。KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 统计学处理实验数据计数资料采用均数标准差(s)表达，应用 t 检验和单因素方差分析进行
4、统计学处理，以 =0.05(双侧)为检验水准，P0.05)，见表 2。表 2 hTERT 的表达与膀胱肿瘤临床特征的关系(略)2.3 hTERT 的表达与膀胱肿瘤复发的关系32 例原发性和 13 例复发性膀胱移行细胞癌的平均灰度值和面数密度相比较均具有显著差异(P12 月的 7 例 BTCC 的平均灰度和面数密度相比较均具有显著差异(P 分别0.001 和0.05)，见表 3。表 3 hTERT 的表达与KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 讨论膀胱肿瘤是泌尿外科最常见的肿瘤，占全部恶性肿瘤的 3.2%，其中尿路上皮肿瘤占 95%以上3。膀胱肿瘤多数为移行上皮细胞癌，浅表性癌复发率较高，且
5、 10%30%4的复发性癌随着复发次数的增多，其恶性程度也逐渐增高，且可转变为浸润性和(或)转移性癌，一旦癌肿侵及深肌层，大部分患者预后不佳，早期发现和严密随访是成功治疗膀胱肿瘤的重要条件。为此，寻求一种可预测复发和预后的标记物是治疗膀胱肿瘤的关键。目前膀胱镜检查及可疑病变处活检仍是膀胱肿瘤诊断和随访的金标准5。然而，活检区域的局限性导致难以发现微小及隐匿性病变，降低了它的灵敏度，并且膀胱镜检查属侵入性检查，患者有一定痛苦，还可能会导致尿路感染，不适宜用于肿瘤的筛选和普查，这使膀胱镜检查在膀胱肿瘤的早期诊断及临床应用受到一定的限制。尿细胞学检查是非侵入性检查，能直接识别尿中脱落的肿瘤细胞，它对
6、诊断膀胱肿瘤的特异性很高，但早期肿瘤的假阴性率较高，敏感性较低，尤其对低分化肿瘤的敏感性仅为 20%40%，容易发生漏诊6。理想的早期诊断和检测膀胱癌的方法应该是客观的、非侵入性的、具有高敏感性和特异性，尤其应该能识别低级别的肿瘤7。自从 1978 年 Blackburn8首次从嗜热四膜虫中分离出 DNA末端的一段富含 G 的重复序列并命名为端粒后，对端粒、端粒酶以KKME-专业医学搜索引擎 http:/ hTERT 进行了研究，均得出肿瘤组织中端粒酶和 hTERT 高表达的结论。同样在泌尿系统中，国内外的报道表明，膀胱肿瘤组织中存在有 hTERT 的高表达。正常人的体细胞内无 hTERT 的
7、表达，90%以上的恶性肿瘤细胞存在 hTERT的高表达，hTERT 为端粒酶的重要组成成分之一9，hTERT 表达上调催化激活端粒酶是肿瘤形成的关键步骤1,1011。如果hTERT 的表达下调或受到抑制，将会导致端粒缩短，染色体不稳定，抑制细胞增殖，加速细胞凋亡以及改变癌细胞的表型12。因此，检测 hTERT 活性具有较高的特异性和灵敏度13。且目前国内外对hTERT 的研究都是在定性上进行，未能从定量的角度来加以说明。本研究所采用的平均灰度和面数密度均属于图像分析中的灰度参数，用来表示被测细胞或细胞核颜色的深浅程度(浓度信息)。利用这种分析可将被测目标数字化，具有定量的意义，为图像的观察、对
8、比、统计提供了客观数据。利用测量细胞或细胞某一部分的平均灰度可定量得到组织内某种成分的含量。平均灰度值与免疫组织化学染色的强弱、组织细胞内被测物质的含量或活性成反比关系，平均灰度值越高，说明其免疫组织化学染色越浅，被测物质的含量或活性越低，反之越高。而面数密度是指参照系截面的单位面积内含某种颗粒截面的数目，与组织细胞内被测物质的含量或活性成正比关系，面数密度值越高表明阳性目标面积越大，单位面积内相应的阳性细胞数越多，被测物质的含量或活性越高，反之越低。KKME-专业医学搜索引擎 http:/ 72 例膀胱肿瘤组织中 hTERT 的表达情况，研究表明 hTERT 表达强度与肿瘤的预后密切相关，h
9、TERT 的表达强度越高则膀胱肿瘤的复发率也越高，二者呈正相关。结合本研究结果可推断有复发倾向病例的 hTERT 表达比没有复发倾向的病例高，hTERT 的表达强度随着肿瘤的复发而增高，且 hTERT 的表达越强，肿瘤越容易复发且复发周期越短，反之复发周期较长，说明 hTERT 的异常表达及其表达的强弱可作为判断膀胱肿瘤是否易复发的指标。【参考文献】1Soldateschi D,Bravaccini S,Berti B,et al.Development and characterization of a monoclonal antibody directed against human t
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