抗菌海洋微生物的分离鉴定及海洋真菌Z16次生代谢产物的研究

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1、抗菌海洋微生物的分离鉴定及海洋真菌Z 1 6 次生代谢产物的研究南京大学研究生毕业论文中文摘要首页用纸毕业论文题目 : 杭菌海洋微生物的分离 鉴定及海洋真菌Z 1 6 次生代谢产物的 研究植物学专业 2 0 0 0级硕士生姓名:黄露露指导教师 ( 姓名、职称 ) :谭仁祥教授海洋微生物是海洋生物的重 要组成部分, 它们不 仅种类繁多, 而且生存环境独特,因此能够产生结构新颖、 功能特殊的次生代谢产物. 海洋微生物的次生代谢产物作为新的医药资源正受到广泛的关注,将成为2 1 世纪研究的热点。海洋微生物研究的难题之一是海洋微生物的鉴定,尤其是一些海洋真菌脱离 原生境后, 不再产生有性繁殖结构, 无

2、法用传统方法进行鉴定, 因此在海洋真菌鉴定中引入分子分类鉴定方法就显得尤为重要.本文对黄海海洋微生物及其次生代谢产物进行了初步研究, 发现包 括海洋细菌、 放线菌及真菌在内的海洋微生物能够产生具有显著的抗人类病源菌活性的次生代谢产物. 本文还就海洋微生物中海洋真菌鉴定难的问 题进行了方法学方面的探索, 采用分子指纹法和形态学 观察相结合, 可以 对真菌进行快速检索分类, 节省时间和人力。对于一些在现有条件下无法获得产袍结构的真菌也可以进行分类,然后结合形态学特征确定其种属。本文通过对两种黄海鱼类白 姑鱼 ( A r g y r o s o m u s a r g e n ta t u s )

3、、带鱼 ( T r i c h i u r u sh a u m e la ) 及一种软体动物8A * ( S in o n o v a c u la c o n s t r ic t a ) 的 体表及体内 微生物的分离、培养, 获得真菌2 7 株、 放线菌1 1 株、 细菌1 0 9 株, 其中8 5 %的微生物是在使用人工海水的培养基上获得的. 在细菌中, 革兰氏阳性菌占了6 8 %。 微生物拮杭实验表明,1 2 株细菌, 8 株放线菌和1 3 株真菌 对一种或多种人类病源菌具有抑菌活性. 进一步研究表明, 5 株细菌, 5 株放线菌以及1 7 株真菌的发酵液的乙 酸乙醋提取物具有抑制人

4、类病原菌的活性. 对其中一株活性较强且杭菌谱较广的真菌Z 1 6 进行了大规模的发酵, 该发酵液的乙 酸乙 醋部位不仅对人类病源真菌及细菌具 有杭性, 并 且还能 导致实 验人员 皮肤过 敏. 利用 硅 胶、 S e p e n d e x L H - 2 0 O D S柱层析以及H P L C , 共分离 得到化合物8 个, 鉴定了6 个化合物的结构, 其中1南京大学研究生毕业论文 ( 申请硕士学位)个 ( 6 ) 为新化合物,化合物1 , 2 , 3均为单端袍霉烯类化合物,对枯草芽袍杆菌( B a c il l u s s u b t i li s ) ,白色 念 珠菌( C a n d

5、id a a l b ic a n s ) , 黑曲 霉 ( A s p e r g il l u s n ig e r ) ,红 发毛癣菌( T r ic h o p 句 to n r u b r u m ) 具有显著的生长 抑制作用, 应该是该菌发酵液乙 酸乙 醋粗提物具有较强的杭菌活性的物质基础, 同时 也可能该粗提物导致皮肤过敏的原因所在。本文采用D N A指纹法和传统形态学 观察相结合, 确定分离自 白 姑鱼精巢的活性菌株Z 1 6 为黑粘座袍霉属真菌, 并鉴定另一株不产生繁殖结构, 因而无法用传统的形态学方法进行鉴定的海洋真菌Y S 4 1 0 8 为K e is s l e r

6、i e l l a s p .属真菌.关健词: 海洋 微生物, 抗菌, D N A指纹法, 黑粘 座 袍霉属, 单端 袍霉烯抗菌海洋微生物的分离鉴定及海洋真菌Z 1 6 次生代谢产物的研究T HE S I S : I s o l a t i o n a n d i d e n t i f i c a t i o n o f a n t i mi c r o b i a lm ar i nem i c r o o r g a n i s m s a n d t h e b i o a c t i v e m e t a b o l i t e s f r o m a m a r i n e f

7、u n g u s Z 1 6S P E C I A L I Z A T I O N: B o t a n yP O S T G R A D U A T E : L u l u H u a n gME N T O R : P r o f . R e n x i a n g T a nMa r i n e m i c r o o r g a n i s m s a r e i m p o rt a n t m e m b e r s o f m a r i n e o r g a n i s m s w i t h a w i d ed i v e r s i t yr e v i e we d

8、i n t e r m s o f s p e c i e s a n d s p e c i a l l i v i n g s u r r o u n d i n g s , w h i c h h a v e b e e ns t r u c t u r e s .a s a n i m p o rt a n t p o t e n t ia l r e s o u r c e o f b i o a c t i v e m e t a b o l i t e s w i t h n o v e lA s a n e w r e s o u r c e o f d r u g s , m

9、a r i n e mi c r o b i a l m e t a b o l i t e s h a v e r e c e i v e dmo r e a n d mo r e a t t e n t i o n a n d wi l l b e t h e f o c u s o f n a t u r a l me d i c i n e r e s e a r c h i n t h e 2 1C e n t u ry . O n e o f t h e d i ff i c u l t i e s in t h e s t u d y o f m a r i n e m i c

10、r o o r g a n i s m s i s t h a t t h ei d e n t i f i c a t i o n o f m i c r o o r g a n is m s , e s p e c i a l l y i n i d e n t i f i c a t i o n o f m a r i n e f u n g i t h a t c o u l dn o t p r o d u c e r e p r o d u c t i v e s t r u c t u r e s o u t o f t h e i r o r i g i n a l l i v

11、 i n g s u r r o u n d i n g sI n t h i s p a p e r , w e s t u d i e d o n t h e ma r i n e mi c r o o r g a n i s m s i n t h e Y e l l o w s e a a n dt h e ir m e t a b o l i t e s . T h e r e s u l t s s u g g e s t e d t h a t m a r i n e m i c r o o r g a n i s m s i n c l u d i n g b a c t e

12、r i a ,a c t o n o m y c e t e s a n d f u n g i c o u l d p r o d u c e s o m e m e t a b o l i t e s t h a t w e r e i n h i b i t o ry t oh u m a n p a t h o g e n s . W e u s e d c o m b i n e d m e t h o d s o f D N A f i n g e r - t y p i n g a n dm o r p h o l o g i c a l o b s e r v a t i o

13、n t o i d e n t i f y m a r i n e f u n g i , w h i c h r e s o lv e d t h e d i ff i c u lt y o fi d e n t i f y i n g m a r i n e f u n g i .1 0 9 b a c t e r i a l s t r a i n s , 1 1 a c t o n o m y c e t e s a n d 2 7 f u n g a l s t r a i n s w e r e i s o l a t e d fr o me x t e rn a l a n d

14、i n t e rna l m i c r o o r g a n i s m s o f A r g y r o s o m u s a r g e n ta t u s , T r i c h i u r u s h a u m e l a a n dS in o n o v a c u l a c o n s tr i c ta g a i n e d fr o m t h e Y e l l o w S e a . A m o n g t h e m 8 5 % p e r c e n t s w e r eo b t a i n e d b y a rt i f ic i a l s

15、 e a w a t e r m e d i a . A n t i m i c r o b i a l t e s t s s h o w e d t h a t 1 2 b a c t e r i a , 8a c t o n o m y c e t e s a n d 1 3 f u n g a l s t r a i n s c o u ld i n h i b i t t h e g r o w t h o f h u m a n p a t h o g e n s .F u rt h e r t e x p e r i m e n t a l r e s u l t s i n d

16、 i c a t e d t h a t t h e E t O A c e x t r a c t s o f t h e c u l t u r e o f 5b a c t e r i a , 5 a c t o n o m y c e t e s a n d 1 7 fu n g a l s t r a i n s h a v e a n t i - p a t h o g e n s a c t iv i t i e s . W e南京大学研究生毕业论文 ( 申请硕士学位)h a v e f o c u s e d o n t h e m o s t a c t i v e fu n g u s Z 1 6 t h a t w a s o b t a i n e d f r o m t h e s p e r m a r y o fA r g y ro s o m u s a rg e n ta t u s . T h e E t O A c e x t r a c t o f t h e c u lt u r e

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