《乌鸡白凤丸有效成份与雌激素对脑内多巴胺能神经元的保护作用及其机制探讨》由会员分享，可在线阅读，更多相关《乌鸡白凤丸有效成份与雌激素对脑内多巴胺能神经元的保护作用及其机制探讨（117页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、青岛大学博士学位论文乌鸡白凤丸有效成份与雌激素对脑内多巴胺能神经元的保护作 用及其机制探讨姓名：刘彬申请学位级别：博士专业：生理学指导教师：谢俊霞20040301缩略词表A DA l z h e i m e r Sd i s e a s eB A SB o v i n es e r u ma l b u m i n缩略词表阿尔茨海默病牛血清白蛋白B D N FB r a i nd e r i v e dn e u r o t r o p i cf a c t o r脑源性神经营养因子B F PB a kF o o n gP i l l sC A NC e n t r a la m y g d
2、a l o i dn u c l e u s乌鸡白凤丸中央杏仁核C R E Bc A M Pr e s p o n s ee l e m e n t b i n d i n gp r o t e i nc A M P 应答元件结合蛋白D AD o p a m i n eD A TD o p a m i n et r a n s p o r t e rE BE RE s t r a d i o lb e n z o a t eE s t r o g e nr e c e p t o rE R EE s t r o g e nr e s p o n s ee l e m e n tE R TE s
3、 t r o g e nr e p l a c e m e n tt h e r a p yF C VF a s tc y c l i cv o l t a m m e t r y5 - H T5 - h y d r o x y t r y p t a m i n eL ，r PL o n g t e r mp o t e n t i a t i o nM A GM y e l i n - a s s o c i a t e dg l y c o p r o t e i nI l l多巴胺多巴胺转运蛋白苯甲酸雌二醇雌激素受体雌激素反应元件雌激素替代疗法快速周期伏安法5 羟色胺长时程效应髓磷脂相
4、关糖蛋自缩略词表M A OM o n o a m i n eo x i d a s eM F BM e d i a lf o r e b r a i nb u n d l e单胺氧化酶内侧前脑束M P T P1 - M e t h y l - 4 一p h e n y l 一1 ，2 ，3 ，6 - t e t r a h y d r o p y r i d i n e1 - 甲基4 苯基1 ，2 ，3 ，6 一四氢吡M P P + l - M e t h y l 一4 - p h e n y l p y r i d i n eN S D An i g r o s t r i a t a ld
5、 o p a m i n e r g i c6 - O H D A6 - h y d r o x y d o p a m i n eO V XO v a r i e c t o m yP C RP o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o nP DP RR TP a r k i n s o n Sd i s e a s eP r o g e s t e r o n er e c e p t o rR e v e r s et r a n s c r i p t i o nS N p cS u b s t a n t i an i g r ap a r sc
6、 o m p a c t aT HT y r o s i n eh y d r o x y l a s eV T AV e n t r a lt e g r n e n t a la r e a1 - 甲基4 苯基吡啶黑质纹状体多巴胺能6 一羟基多巴卵巢切除术多聚酶联免疫反应帕金森病孕激素受体反转录黑质致密带酪氨酸羟化酶腹侧背盖区中文摘要乌鸡白凤丸有效成份与雌激素对脑内多巴胺能神经元的保护作用及其机制探讨青岛大学医学院生理学专业二0 0 一级博士研究生刘彬导师谢俊霞教授中文摘要大量研究业已揭示，性腺类固醇激素尤其是雌激素在神经系统退行变性性疾病如帕金森病( P D ) 中具有神经保护作用。雌激
7、素可以抵抗神经毒性药物如1 甲基一4 苯基- l ，2 ，3 ，6 一四氢吡啶( M P T P ) 的作用，而雄激素无此作用。此外，有研究表明植物性雌激素、中药以及针灸均有神经保护作用。乌鸡白凤丸( B F P ) 是一种传统的中药复方，广泛应用于妇产科疾病的预防与治疗，被认为具有雌激素样作用，并对中枢神经系统有保护作用。为探讨雌激素及B F P 有效成份对中枢神经系统尤其是多巴胺( D A ) f 新O 经元功能的影响，本研究应用聚合酶链免疫技术( R T - P C R ) 检测了内源性雌激素对M P T P 诱发的P D 模型小鼠的酪氨酸羟化酶( T H ) 表达的影响，并观察了B F
8、 P 有效成份与1 71 3 雌二醇预处理的去卵巢P D 模型小鼠多个脑区如纹状体、中脑、皮层及小脑的T H 和多巴胺转运蛋白( D A T ) 表达；比较了B F P 有效成份对雌性与雄性P D 模型小鼠的T H 和D A T 表达的作用；实验还应用点阵列技术观察B F P 有效成份以及雌激素预处理的P D 模型小鼠的中脑与下丘脑内1 1 7 6 种基因的表达特性。此外，本实验观察了M P T P 对体外培养的P C I 2 细胞的作用，并应用R T P c R 技术，以促凋亡基因B a x 为实验指标，观察B F P 有效成份与M P T P 对B a xm R N A 水平的影响；并应用
9、流式细胞技术观察细胞经M P T P 与B F P 有效成份处理后的细胞凋亡状况。另外，实验应用快速周期伏安法( F C V ) 在体观察了B F P 有效成份对电刺激诱发雌、雄鼠中央杏仁核D A 释放的影响。实验结果表明：! 壅塑里一】雌性P D 模型鼠的中脑T H 基因表达明显高于去卵巢雌鼠，而且经B F P ( 3 9 k g ，2w ，p 0 ) 预处理的P D 模型雌鼠的中脑T H 表达水平也明显高于去卵巢P D 模型雌鼠。2 M P T P 明显减少去卵巢P D 模型小鼠中脑、纹状体和小脑的T 与D A T 基因表达( p 2 0 0 个细胞，并分别重复3 次以计算细胞生存能力。P
10、 C I 2 细胞的凋亡状况是由p r o p i d i u mi o d i d e ( P I ) 染色经流式细胞仪检测【1 3 】的。凋亡细胞的特征表现在D N A 碎裂，核浓缩和断裂。实验中细胞经过相应处理后，经消化、离心提取，在含1 胎牛血清的冰冷P B S 中清洗。之后细胞在8 0 乙醇溶液中固定，检测前保存于_ 2 0 。经P I 染色前将固定的细胞再次离心并在P I R n a s e溶液( 含4 0I x g m lP I 和4 0g g m lR n a s e 的T r i s - E D T A 缓冲液) 中重新悬浮。经P I 染色后由流式细胞仪( E P I C S
11、A L T R AC e l lS o r t e r , B e c k m a n ) 检测细胞凋亡状况。每次计数1 0 ，0 0 0 个细胞，凋亡数目以调亡细胞占总细胞数的比率表示。第二章乌鸡白风丸有效成份对多巴胺能神经元的保护作用与抗凋亡机制D A TB a xG A P D HS e n s e ：A A AA T CC A C C A C1 1 AG A GA C CN oA n t i s e n s e ：T A GC C AC A G1 1 A CC G T T C C3 3 3 7 9 9S e n s e ：A A G A T CT G CCC T G T CC T G
12、A A AGN oA n f i s e n s e ：C A TC G AT C CA C AC A GA T GC C T C4 0 2 9 4 2S e n s e ：T A CA G GG T T T C AT C CA G GA n t i s e n s e ：C A GC C CA T C T T C1 1 C A GS e n s e ：G A CC A C A G TC C A T G CC A TC A C4 6 7b p5 4 0b DN M0 0 9 3 7 7A F1 0 9 0 7 2N o N M4 9 9b p8 0 - 5 7 80 1 7 0 5 9NoXM
13、A n t i s e n s e ：G C TG T TG A AG T CG C AG G AG A C5 6 5 9 0 43 4 0b D1 3 2 8 9 72 8 统计学分析数据采用均数士标准误表示，应用方差分析( A N O V A ) 与S t u d e n t N e w m a n K e u l s检验进行统计学数据处理。P 1 5 倍的为表达有显著差异。在1 1 7 6 种小鼠c D N A s 中，B F P 处理的P D 模型鼠中脑与下丘脑有4 0 种基因表达发生改变，1 7B 雌二醇处理的P D 模型小鼠中脑与下丘脑有9 3 种基因的表达发生明显改变。B F P
14、 处理组与1 71 3 雌二醇处理组结果相比较，有3 5 种基因相同( 表3 1 ) ，这些基因涉及到动物生长发育等方面，具体表述如下。点阵列结果表明，B F P 和雌激素可以调节激素相关基因，尤其是上调生长激素和下调催产素基因的表达。生长激素是一种调节合成与代谢的激素，能刺激细胞生长与分化。虽然它的主要作用是促进骨骼肌肉和身体长骨的生长，生长激素受体在脑内也存在【l6 1 ，激素可通过受体调节机制透过血脑屏障。研究表明，生长激素对中枢神经系统具有重要的作用，如生长激素缺乏可引起认知损害，临床研究表明生长激素替代疗法可改善一定的功能如记忆等。此外，生长激素治疗儿童缺乏症可明显第三章乌鸡白凤丸有
15、效成份与雌激素对P D 模型小鼠的中脑与下丘脑的基因表达影响改善行为表现。下丘脑参与调控生长发育及老化过程中的多种功能，与神经内分泌、神经及精神性疾病相关【1 7 J 。视上核与室旁核的加压素( 抗利尿激素) 和催产素细胞在妊娠中期即为成年数量。研究表明P r a d e r - W i l l i 综合征，艾滋病和帕金森病均表现出催产素神经元数目较低。催产素除了作为一种肽类激素，也作为神经递质或神经调质发挥作用。催产素可通过开放非特异性的钙通道或关闭钾通道直接影响神经元的兴奋性。这些神经肽类也可通过作用于突触后或突触前神经元或轴突末梢影响突触的传导【Is 】催产素在中枢功能的表达中起了重要的
16、作用，如性行为，学习与记忆，摄食，心血管调节和体温调节等【1 9 】。髓磷腊相关糖蛋白( M y e l i n a s s o c i a t e dg l y c o p r o t e i n ，M A G ) 是一种l O O k D a 跨膜糖蛋白，并大量发现于中枢神经系统的脊髓，是脊髓抑制神经再生和轴突生长的一种重要物质【2 q 2 ”。M A G 功能的丢失在中枢神经系统神经损伤位点可促进明显的轴突生长，然而其在再生中的作用并未达成共识【2 2 , 2 3 。本实验结果显示，M A G 的基因表达在B F P 处理的P D 小鼠的中脑与下丘脑明显减少，而雌激素可以上调其表达。C o m p l e x i n s 是一组突触前蛋白，有c o m p l e x i n sI 和I I 两种亚型，在突触传导过程中起重要作用，然而作用机制不清。C o m p l e x i n 蛋白的表达与神经元功能如兴奋和抑制功能有关，尤其是中枢神经系统神经元的突触前功能 2 4 1 。本
