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1、 1含笑花挥发油化学成分的含笑花挥发油化学成分的 GC-MS 分析分析李先文,冯亚非 (广东海洋大学理学院,广东湛江,524088) 摘摘 要要 含笑花具有祛瘀生新，活血止痛之功效。为了更好地利用含笑资源,扩大其药用部位源, 本实验采用挥发油提取器提取和溶剂提取二种不同方法分别提取含笑花挥发油,运用固相微 萃取和毛细管气相色谱-质谱联用法结合计算机检索对其挥发油进行了化学成分分析，同时 也采用一种鲜花直接固相微萃取的对照测定试验。结果显示,从挥发油提取器提取所得挥发 油中鉴定出了 31 种化合物,从乙醚提取所得挥发油中分别鉴定出了 31 种化合物, 直接从鲜 花室温固相微萃取的组分中鉴定出了
2、14 种化合物。面积归一法测定了 3 种方法所鉴定出成 分的相对质量分数,各占总峰面积的 97.58%，97.69%和 100.00%。3 种挥发油化学组成各有 异同,前两种方法提取的主要成分为萜类化合物：-榄香烯、-石竹烯、-石竹烯、-榄香 烯、大根香叶烯 D。第三种方法提取的主要成分为脂类：异丁酸乙酯、乙酸异丁酯、丁酸 乙酯、异丁酸异丁酯、己酸乙酯、己酸-2-甲基丙酯。 关键词：关键词：含笑；挥发油；气相色谱-质谱联用；固相微萃取 论文分类：论文分类：中药和天然药物Analysis of the Essential Oils from the Flower Of Michelia Figo
3、 by GasChromatography-Mass SpectrometryLi Xianwen, Feng Yafei (Science School, Guangdong Ocean University, Zhanjiang 524088, P.R. China)【Abstract】 Objective The flower of Michelia figocould eliminate stasis, engender the new, quicken the blood andrelieve pain. In order to enlarge the medication part
4、s, make better use of resources of Michelia figo. Methods The experiment extract volatile oils of the flower of Mich- elia figo in two very interesting ways ,analyzed by techniques of GC-MS-computer. Simultanei- ty ,check test Michelia figo in solid-phase microextraction. Results Result ,31compounds
5、 were identified from the oil of the Extractor,31compounds were identified from the oil of the Aether and 14compounds were identified from the Michelia figo.The identified relative contents of essential oils were 97.58%, 97.69%, and 100.00%, respectively. Conclusion There were differences among some
6、 chemical constituents of threekindsofessentialoils. beta.Caryophyllen, alpha. Caryophyl- ene, .gamma.Elemene,Germacrene D.The Mechelia figo untransacting main constituents were Ethyl isobutyrate,Isobutyl acetate,Butyricether, Isobutyl isbutyrate,Ethyl caproate,Isobutyl caperoate.【Key words】 Micheli
7、a figo; volatile oil; microwave extraction; gas chromatography-mass spectrometry 1.引言李先文，男，1955 年生，陕西三原人，博士，教授。主要从事天然药物、海洋药物研究。 2含笑是木兰科，含笑属植物，约 50 余种，分布于亚洲热带、亚热带及温带的中国、印 度、斯里兰卡、中南半岛、马来群岛、日本南部。我国约有 41 种，主产西南部至东部，以 西南部较多1，2。 ，大部供观赏用，其中最常栽培的有白兰（M. alba DC.） 、黄兰（M. champaca L. ）和含笑花（M. figo（Lour. ）Spren
8、g. ） （其中括号里是拉丁名）三种。为灌 木或乔木，和木兰属 Magnolia 不同之处为花腋生，雌蕊群有明显的柄，胚珠在每一子房室 内通常为两颗以上。 本实验所使用的原料是含笑花(M. figo（Lour. ）Spreng.)。采摘于广东海洋大学校园内。含笑花蕾味苦涩，性平，有去淤生新，活血止痛的药用功能。临床上主要用于治月经 不调，痛经，胸胁间作痛等。含笑挥发油成分的研究始于 1986 年3,国内学者陆续对不同 品种的含笑成分进行了分析研究，这些研究所采用的均为传统的挥发油提取方法,而使用固 相微萃取与色谱-质谱联用分析其化学成分的方法，鲜见报道。 60 年代初，自 Doskotch 等
9、4从木兰科(Magnoliaceae)鹅掌楸属北美鹅掌楸 (Liriodendron tulipi-fera L.)中分离到吉马烷型倍半萜以来，从木兰科植物中分离到越来越多 的倍半萜内酯，其中许多化合物被证明有抗菌、抗癌等生理活性57。在对吉马内酯结构 的活性研究中，发现凡 -内酯环 C11C13 上具双键的，对人体鼻咽癌细胞(KB 细胞)都有 细胞毒活性8。 有关学者对深山含笑叶挥发油进行体外抑菌实验和抗肿瘤实验，发现其化学成分对金 黄色葡萄球菌有较强的抑制作用；对大肠杆菌、红酵母无明显作用。在浓度为 100 ug/mL 对肺癌细胞有较强的抑制作用9。 说明木兰科植物体的化学成分有一定的生物
10、活性，经过前人的试验表明：这种生物活 性物质主要是单萜和倍半萜以及它们的含氧衍生物。 萜类化合物无论是从它们在植物界分布的广泛程度、含量、结构多样性，还是从它们 对人类生活的作用来看，都是一种重要的植物成分。凡由甲戊二羟酸衍生、且分子式符合 (C5H8)n 通式的衍生物统称为萜类化合物。萜类化合物的结构多种多样，从最简单的直链 碳氢化合物到最复杂的环状结构，按组成分子的异戊二烯结构单元将萜类化合物分为单萜、 倍半萜、二萜、二倍半萜、三萜、四萜和多萜，每种萜类化合物又可分为直链、单环、双 环、三环、四环和多环，其含氧衍生物还可分为醇、醛、酮、酯、酸、醚等，其中很多化 合物具有明显的生物活性10，
11、11。 通过对样品的前处理（粉碎，粗提） ，再使用固相微萃取和气相色谱-质谱联机分析仪 测定含笑花挥发油中化学成分的组成和含量。 本课题用挥发油提取器和乙醚浸渍法来提取含笑花中化学成分，得到粗提液，通过运 用固相微萃取和 GM-SM 联用对其中的化学成分进行分析鉴定，从而也了解含笑花中更多 具体的化学成分, 对木兰科植物的研究也具有重大的意义。2.实验部分2.1 试剂和仪器 试剂 试材： 新鲜含笑花 采于广东海洋大学校园内 试剂： 无水硫酸钠 分析纯 国药集团化学试剂有限公司无水乙醚 分析纯 国药集团化学试剂有限公司实验用水为二次蒸馏水 仪器 挥发油提取器3AUY102 型电子天平 日本岛津（
12、SHIMADZU）公司 DS-1 高速组织捣碎机 上海标本模型厂 DF101S 集热式恒温加热磁力搅拌器 巩义市莫峪予华仪器厂 RE52-99 旋转蒸发仪 上海亚荣生化仪器厂 DZF-6020 真空干燥箱 上海博讯实验有限公司医疗设备厂 GZX9070MBE 电热恒温鼓风干燥箱 上海博迅实业有限公司医疗设备厂 SHZD（）循环水热真空泵 巩义市莫峪予华仪器厂 GC-MS 型气相色谱-质谱联用仪 美国 Finnigan Voyager 2.2 实验步骤 2.2.1 含笑花中挥发油的提取及保存 （1） 原料准备：将所采集的新鲜含笑花用清水反复洗干净，自然晾干，粉碎后备用。 （2） 提取一：称取上述
13、碎料 300g，置于挥发油提取器（自制）加水蒸馏 6H，收集挥 发油无水硫酸钠干燥，称重。取一定体积的挥发油（样品 1） ，在 0环境保存备用。 （3） 提取二：称取上述碎料 300g，充分研磨后，加入无水乙醚 500ml 充分萃取 2H， 将萃取液置于挥发油蒸发器中在 40下蒸发乙醚，收集挥发油用无水硫酸钠干燥，称重。 取一定体积挥发油（样品 2） ，在 05环境保存备用。表 1 含笑花挥发油出油率编号原料量/g挥发油量/g出油率/%样品 13000.6000.200 样品 23000.5300.176（4） 提取三：称取上述碎料 100g（样品 3） ，使用保鲜膜密封，在 05环境保存 备
14、用。 （5） 将 2.2.1（3） （4） （5）中 3 种备用样品各取适量进行固相微萃取处理。样品 1 萃 取温度为 80，萃取时间 30min；样品 2 萃取温度为 80，萃取时间 30min；样品 3 萃取 温度为室温（20） ，萃取时间 1h。 表 2 样品固相微萃取的条件 序号样品萃取温度/萃取时间/min1样品 18030 2样品 280303样品 3室温（20）602.2.2 GC/MS 分析测定将 2.2.1（5）中 3 种经固相微处理后的样品进行 GC/MS 分析测定。GC-MS 测试采用美国 Finnigan Voyager GC-MS 仪器,石英弹性毛细管柱,色谱柱 BP
15、X5(250.220.25m),升温程序：柱起始温度 60，保持 3min,以 3/ 升温至170，再以每分钟 25升温至 250，载气 He，流量 1mL/min,分流进样，分流比 20：1，进样口温度 220，接口温度 230， 质谱条件：电离方式 EI，离子源温度 200，电离能 70eV，倍增电压 400V，扫描质 量范围 35-450amu 。3.结果与讨论 43.1 总离子流图 按照上述实验测试条件，对含笑花提取液中挥发油化学成分进行分离测定。化合物的 相对百分含量按峰面积归一化法计算。成分鉴定根据 GC/MS 联用所得的质谱信息，应用 NIST62. LIB 和 NIST12.L IB 数据库检索与 EPA/NIH 质谱标准谱图对照、分析，确认了大 部分化学成分（表 1）总离子流图如图 1 所示。图 1 含笑花挥发油样品 1 80固相微萃取 30min 的气质联用总离子流图图 2 含笑花挥发油样品 2 80固相微萃取 30min 的气质联用总离子流图RT: 0.00 - 22.200246810121416182022
