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1、植物组织中可溶性糖含量的测定植物组织中可溶性糖含量的测定在作物的碳素营养中， 作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为 NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。 蒽酮法测定可溶性糖蒽酮法测定可溶性糖一、原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色
2、糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽
3、酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm ，故在此波长下进行比色。二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料任何植物鲜样或干样。（二）试剂1. 80 乙醇。2. 葡萄糖标准溶液（ 100 g/mL ）：准确称取 100 mg 分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至 100 mL ，使用时再稀释 10 倍（ 100 g/mL ）。3 蒽酮试剂：称取 1.0 g 蒽酮，溶于 80% 浓硫酸（将 98% 浓硫酸
4、稀释，把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中） 1000 mL 中，冷却至室温，贮于具塞棕色瓶内，冰箱保存，可使用 2 3 周。（三） 仪器设备分光光度计，分析天平，离心管，离心机，恒温水浴，试管，三角瓶，移液管（ 5 、 1 、 0.5 mL ），剪刀，瓷盘，玻棒，水浴锅，电炉，漏斗，滤纸。三、实验步骤1. 样品中可溶性糖的提取 称取剪碎混匀的新鲜样品 0.5 1.0 g （或干样粉末 5 100 mg ），放入大试管中，加入 15 mL 蒸馏水，在沸水浴中煮沸 20 min ，取出冷却，过滤入 100 mL 容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。2. 标准曲线制作 取 6 支大试管，从 0 5
5、分别编号，按表 24-1 加入各试剂。表 24-1 蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量管 号试 剂 012345 100 g/mL 葡萄糖溶液（ mL ）00.20.40.60.81.0 蒸馏水（ mL ）1.00.80.60.40.20 蒽酮试剂（ mL ）5.05.05.05.05.05.0 葡萄糖量（ g ）020406080100 将各管快速摇动混匀后，在沸水浴中煮 10 min ，取出冷却，在 620 nm 波长下，用空白调零测定光密度，以光密度为纵坐标，含葡萄糖量（ g ）为横坐标绘制标准曲线。3 样品测定 取待测样品提取液 1.0 mL 加蒽酮试剂 5 mL ，同以上操作显色测
6、定光密度。重复 3 次。四、结果计算 溶性糖含量（）从标准曲线查得糖的量（g）提取液体积（ml）稀 释倍数/测定用样品液的体积(ml)样品重量(g)106100 式中： C 从标准曲线查得葡萄糖量， g 。V T 样品提取液总体积 , mL 。V 1 显色时取样品液量， mL 。W 样品重（ g ）。 苯酚法测定可溶性糖苯酚法测定可溶性糖一、原理植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在 10 100mg 范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在 485 nm 波长下有最大吸收
7、峰，故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定 160 min 以上。二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料新鲜的植物叶片。（二）试剂1. 90 苯酚溶液：称取 90 g 苯酚（ AR ），加蒸馏水溶解并定容至 100 mL ，在室温下可保存数月。2. 9 苯酚溶液：取 3 mL 90 苯酚溶液，加蒸馏水至 30 mL ，现配现用。3. 浓硫酸（比重 1.84 ）。4. 1 蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在 80 下烘至恒重，精确称取 1.000 g ，加少量水溶解，移入 100 mL 容量瓶中，
8、加入 0.5 mL 浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。5. 100 g/L 蔗糖标准液：精确吸取 1 蔗糖标准液 l mL 加入 100 mL 容量瓶中，加蒸馏水定容。（三）仪器设备分光光度计，电炉，铝锅， 20 mL 刻度试管，刻度吸管 5 mL 1 支、 l mL 2 支，记号笔，吸水纸适量。三、实验步骤1 标准曲线的制作 取 20 mL 刻度试管 11 支，从 0 10 分别编号，按表 24 2 加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入 1mL 9 苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以 5 20 s 时间加入 5 mL 浓硫酸，摇匀。比色液总体积为 8 mL ，在室温下放置 30 min ，显色。然后以
9、空白为参比，在 485 nm 波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。表 24-2 苯酚法测可溶性糖绘制标准曲线的试剂量管 号试 剂 01 、 23 、 45 、 67 、 89 、 10100g/L 蔗糖标准液（ mL ）00.20.40.60.81.0蒸馏水（ mL ）2.01.81.61.41.21.0 蔗糖量（ g ）0204060801002 可溶性糖的提取 取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取 0.1 0.3 g, 共 3 份，分别放入 3 支刻度试管中，加入 5 10 mL 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取 30 min （提取 2 次），提取液过滤入 25 mL 容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。3 测定 吸取 0.5 mL 样品液于试管中（重复 2 次），加蒸馏水 1.5 mL ，同制作标准曲线的步骤，按顺序分别加入苯酚、浓硫酸溶液，显色并测定光密度。由标准线性方程求出糖的量，计算测试样品中糖含量。四、结果计算可溶性糖含量（）从标准曲线查得糖的量（g）提取液体积（ml）稀释倍数/测定用样品液的体积(ml)样品重量(g)106100 式中： C 标准方程求得糖量， g 。V T 提取液体积， mL 。V 1 吸取样品液体积， mL 。W 组织重量， g 。
