《新型液相微萃取结合高效液相色谱法测定尿样中的利多卡因》由会员分享，可在线阅读，更多相关《新型液相微萃取结合高效液相色谱法测定尿样中的利多卡因（4页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、新型液相微萃取结合高效液相色谱法测定尿样中的利多卡因新型液相微萃取结合高效液相色谱法测定尿样中的利多卡因任贻军，张红琳，高逢喜（华中科技大学同济医学院附属荆州医院药剂科,湖北荆州）摘摘 要要 应用新型液相微萃取与高效液相色谱联用技术快速分析尿样中的利多卡因。考察了萃取剂、体积、萃取时间、pH 值及盐效应对液相微萃取的影响,建立了液相微萃取与高效液相色谱联用技术分析尿样中利多卡因的方法。在优化条件下,对浓度从0.02到2.0mg/L的利多卡因标准溶液系列萃取后进样分析。结果表明,利多卡因的色谱峰面积在所测浓度范围内与浓度呈良好的线性关系,回归方程为y = 365.2x + 4.962,相关系数为
2、0.999，检出限为0.01mg/L，RSD小于4.4%(n=5)。样品回收率为106.1%。通过液相微萃取后,能有效地去除尿样中的干扰物质,获得了较高的选择性。该方法简单、方便、灵敏、消耗有机溶剂少,是尿样中利多卡因检测的一种有效方法。关键词关键词 利多卡因,液相微萃取,试剂管，高效液相色谱1 1 引引 言言高效液相色谱（HPLC）常用于生物样品中药物有效浓度的检测，但生物样品组分复杂，内源性干扰物质多，样品不适应直接进样分析。需要对样品进行适当的前处理。常用的前处理方法主要有液液萃取、固相萃取、固相微萃取等。1996 年Cantwell 等提出了液相微萃取(L PME) 技术1 ,因其萃取
3、效率高、消耗有机溶剂少,且具有快速、灵敏等优点,近几年发展迅速,主要用于环境监测，食品分析，生物样品中的药物检测等。利多卡因(lidocaine)是临床应用较广的酰胺类局部麻醉药物之一,其有效浓度范围为15 mg/L 。当血药浓度超过5 mg/L 时可发生惊厥等毒性反应,低于约用量的10 %以原形随尿排出。因此,监测尿液中利多卡因的含量对指导临床合理用药和减少毒副反应有重要意义。对生物样品中利多卡因浓度检测常用的前处理方法有液液萃取2、固相萃取3、液相微萃取4等。液液萃取、固相萃取有操作繁琐，时间长，大量消耗有机溶剂等缺点。传统的液相微萃取液滴不稳定，在萃取过程中容易从针尖上掉落。本文用试剂管
4、做支撑，建立了一种新的液相微萃取技术结合HPLC方法直接检测尿样中利多卡因，利用该技术处理尿样后不仅可以消除干扰,同时对利多卡因进行了富集,该方法具有操作简单，方便，灵敏度高，稳定性好以及消耗有机溶剂少等优点。2 2 实验部分实验部分2 2. 1 1 仪器与试剂仪器与试剂安捷伦高效液相色谱系统 ,由G1379A在线脱气机、G1311A四元泵、G1314AVWD检测器、G1316A柱温箱、7725手动进样阀、25L微量进样器组成。盐酸利多卡因注射液(泗水希尔康制药有限公司),乙腈为色谱纯,其它试剂均为分析纯。实验用水为去离子水。2 2. 2 2 色谱条件色谱条件色谱柱: Venusil,XBP-
5、C18 柱(5m ,250 mm 4. 6 mm i. d. ),检测波长210 nm,进样量20L。流动相:乙腈：0. 01 mol/ L磷酸二氢钾（以磷酸调pH为3.5）（27.3：72.7）。2 2. 3 3 萃取方法萃取方法在抗生素药瓶中加入搅拌磁子和8mL 、pH为11.0的样品溶液,用25L微量进样器抽取20L有机溶剂放入试剂管,再将试剂管用样品溶液封盖，放入药瓶中，密封。溶液搅拌速度为800转/分,萃取50min后,用进样器吸取有机溶剂直接进样分析。3 3 结果与讨论结果与讨论3 3. 1 1 萃取溶剂的选择萃取溶剂的选择本试验考察了9种有机溶剂,从水溶性和液滴的稳定性两方面考虑
6、选取萃取剂。结果发现N,N二甲酰胺,正辛醇，正庚烷的密度比水小不易操作；邻苯二甲酸二丁酯的粘度大，用进样器吸取不方便。通过考察二氯甲烷，环氧氯丙烷，四氯化碳，甲苯，氯仿的萃取效果,发现四氯化碳萃取后的峰面积最大。因此,四氯化碳被选为萃取溶剂。3 3. 2 2 溶剂体积对萃取效果的影响溶剂体积对萃取效果的影响不同体积的四氯化碳萃取20分钟后进样分析,结果显示,萃取后利多卡因的峰面积随液滴体积的增大而增大。由于受20uL定量环的限制，本试验萃取剂体积选用20uL.3 3. 3 3 萃取时间对萃取效果的影响萃取时间对萃取效果的影响LPME是一个样品的富集平衡过程,萃取时间是非常重要的影响因素。本实验
7、研究了萃取时间对利多卡因萃取的影响,结果显示,萃取后利多卡因的峰面积随萃取时间开始迅速增大,随后增大趋势减缓，80分钟后实验发现,峰面积还在上升。考虑到萃取时间的选择既要保证较高的灵敏度又要节约时间,本实验的萃取时间选择为50分钟。3 3. 4 4 pHpH值对萃取效果的影响值对萃取效果的影响利多卡因是碱性药物,pa 值为7. 9 。在溶液pH 值高于pKa 值时,利多卡因会以中性分子的形式被萃取到有机液滴中。本实验研究了溶液pH 值对萃取效果的影响,结果表明,随着料液pH 值的升高,利多卡因的萃取效率先增加后减少,当pH 值为11. 0时萃取效率最大。3 3. 5 5 方法的线性范围、检出限
8、和精密度方法的线性范围、检出限和精密度在优化条件下,对浓度从0.02到2.0mg/L的利多卡因标准溶液系列萃取后进样分析。结果表明,利多卡因的色谱峰面积在所测浓度范围内与浓度呈良好的线性关系,回归方程为y = 365.2x + 4.962,相关系数为0.999, 检出限为0.01mg/L , RSD小于4.4%(n = 5) 。3 3. 6 6 实际尿样的检测实际尿样的检测取病人使用利多卡因5小时后的尿样4mL，用4mL去离子水稀释，1mol/L的氢氧化钠调节PH值为11，用四氯化碳萃取。结果发现该LPME 技术可以选择性地、高效地富集尿样中的利多卡因。测得样品的回收率为106.1%。参考文献
9、：1 M.A.Jeannot,F.Cantwell. Anal.Chem. 68(1996)2236.2 A.S.Gross,A.Nicolay,A.Eschalier. J.Chromatogr.B 728(1999)107.3 L. Kang, H.W. Jun, J.W. McCall. J.Pharm.Biomed.Anal.19(1999)737.4 M.Ma,S.Y.Kang,Q.Zhao,B.Chen,S.Z.Yao. J.Pharm.Biomed.Anal.40(2006)128.A new liquid phase micro-extraction method couple
10、d with HPLC for the determination of lidocaine in human urine Ren yi-jun, Zhang hong-lin，Gao feng-xi (Jingzhou hospital, Tongji medical college, Huazhong university of science and technology, jingzhou 434020, china) Abstract A method for determining lidocaine in human urine using a new single-drop L
11、PME based on PCR tube in conjunction with HPLC-UV detection was developed. There are several parameters which determine the mass transfer such as the extraction solvent, drop and sample volumes, extraction time , pH and ionic strength, stirring rate . These parameters were chosen to optimize the per
12、formance in the current study. The method was validated with respect to precision, accuracy and specificity. The respective inter-day precision values were calculated to be below 4.4 %. The mean absolute recovery was 106.1%. The calibration graphs obtained by plotting the peak-height ratios against
13、the concentrations of lidocaine added to the blank plasma were highly linear over the range 0.02-2.0mg/L, and the correlation coefficient for each calibration graph invariably exceeded 0.999. The mean regression equation is y=365.2x+4.962, where y is the concentration of lidocaine in human urine, and x is the peak area. The detection limits in urine were calculated to be 0.01mg/L. It was demonstrated that as long as the extraction procedure is consistently applied, quantitative analysis is performed accurately and reproducibly in human urine samples.
