《CD4+CD25+调节性T细胞在实验性矽肺大鼠模型中的研究》由会员分享，可在线阅读，更多相关《CD4+CD25+调节性T细胞在实验性矽肺大鼠模型中的研究（64页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、安徽医科大学硕士毕业论文英文缩略词英文全称C DT r e gF o x p 3P FI P FF bE C MI HD A BH ES PI F N 吖I L 1 0C T L A 4T N FN F r , BT G F - p 1中英文缩略词表中文名称C l u s t e ro f d i f f e r e n t i a t i o n白细胞分化抗原R e g u l a t o r yTc e l l s调节性T 细胞F o x h e a d b o xp r o t e i n 3叉头样转录因子蛋白3P u l m o n a r yf i b r o s i s肺纤维化I
2、d i o p a t h i cp u l m o n a r yf i b r o s i s特发性肺纤维化F i b r o b i a s t成纤维细胞E x t r a c e l u l a rM a t r i x细胞外基质I m m u n o h i s t o c h e m i s t r y免疫组织化学3 , 3 d i a m i n o b e n z i d i n e3 , 3 一二氨基联苯胺H e m a t o x y l i n E o s i n苏木素一伊红染色S t r e p t a v i d i nP e r o x i d a s e过氧化物酶
3、标记的链霉卵白素I n t e r f r o n 吖I n t e r l e u k i n 10干扰素吖白细胞介素1 0C y t o t o x i cTl y m p h o c y t ea n t i g e n 4细胞毒性T 细胞相关抗原4T u m o rn e c r o s i sf a c t o r肿瘤坏死因子N u c l e a rf a c t o r - r , B核转录因子1 出T r a n s f o r m i n gG r o w t hF a c t o r - 1 3 1转化生长因子一p 14安徽医科大学硕士毕业论文P B SB S AN SP
4、F AN a N 3F I T CP EA P CC T LP h o s p h a t eb u f f e r e ds a l i n e无钙镁的磷酸盐缓冲液B o v i n es e r u ma l b u m i nN o r m a ls a l i n eP a r a f o r m a l d e h y d eS o d i u ma z i d e牛血清清蛋白生理盐水多聚甲醛叠氮钠F l u o r e s c e i ni s o t h i o c y a n a t e异硫氰酸荧光素P h y c o e r y t h r i n藻红蛋白M l o p h
5、y c o c y a n i n别藻红蛋白C y t o t o x i cTl y m p h o c y t e细胞毒性T 细胞G l u c o c o r t i c o i d i n d u c e dt u m o rn e c r o s i sG I T Rf a c t o rr e c e p t o r糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体5学位论文独创性声明本人所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明
6、确说明并表示谢意。学位论文作者签名：趣兰日期：塑圣：型学位论文使用授权声明本人完全了解安徽医科大学有关保留，使用学位论文的规定。学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版，有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅，有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索，有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。学位论文作者戥冬杰了日期：灿参S - 叫导师签名：僦导师签名：C 铴尸，日期：扩，莎安徽医科大学硕士毕业论文C D 4 + C D 2 5 + 调节性T 细胞在实验性矽肺大鼠模型中的研究中文摘要背景：我国目前矽肺形
7、式十分严峻，矽肺病例呈现逐年增加的趋势。矽肺发病机制非常复杂，涉及矽尘毒性，脂质过氧化作用，肺内细胞机制，细胞因子网络理论等学说，虽然每种学说各有其合理之处，但都不能完全合理地解释其致病过程。其中，免疫学机制历来是研究者们关注的重点，在矽肺发生发展过程中伴随着细胞免疫或体液免疫功能的紊乱或下降。本实验试图建立实验性矽肺大鼠模型，全程监测矽肺大鼠体内T 淋巴细胞亚群的变化，了解细胞免疫状况；探讨C D 4 + C D 2 5 + 调节性T 细胞是否在矽肺的发病过程中起着调节免疫功能的作用。近年来，细胞因子网络在矽肺发病机制中的研究也备受关注，核转录因子1 c B 和转化生长因子B 1的生物学活性
8、都十分广泛，可能会在矽肺慢性炎症的持续过程中发挥重要的作用，本研究通过实时监控其在肺组织中的表达，探讨其在矽肺形成中的可能作用。目的：阐明间隔染尘后实验性矽肺大鼠细胞免疫状况的动态变化；初步探讨一次性染尘后C D 4 + C D 2 5 蜥g hT 细胞和C D 4 + C D 2 5 + F o x p 3 + 调节性T 细胞在矽肺发生发展中的可能作用；探讨N F 一1 c B 和T G F p l 在实验性矽肺大鼠肺组织中的表达和意义。方法：建立大鼠矽肺模型，间隔染尘：分别在染尘后第7 、1 4 、2 1 、2 8 、3 5 、4 2 、4 9 、5 6 、6 3 和7 0 d ( 天)
9、各处死实验组和对照组大鼠3 只，采集外周血和脾，用流式细胞术检测大鼠外周血、脾组织的T 淋巴细胞( C D 3 、C D 4 、C D 8 细胞) 百分率。一次性染尘：染尘后第7 、1 4 、2 1 及2 8 天各处死模型组6 只和对照组4 只大鼠，用流式细胞术检测大鼠外周血C D 4 + C D 2 5 1 1 i 曲T 细胞的频率及C D 4 + C D 2 5 + F o x p 3 + 调节性T 细胞的频率；染尘后第l 、3 、7 、1 4 、2 1 及2 8 天各取大鼠肺组织制作组织6安徽医科大学硕士毕业论文切片，免疫组化S P 法检测N F r B 和T G F 1 3 1 在3
10、6 例实验性矽肺模型大鼠和2 4 例正常大鼠肺组织中的表达，对N F r B 和T G F - p l 的表达进行定量分析。结果：间隔染尘后，实验性矽肺大鼠外周血和脾T 淋巴细胞亚群发生动态的变化。矽肺大鼠外周血C D 4 水平在实验早期( 1 4 w ) 高于对照组，在实验后期，在实验后期，C D 3 、C D 4 、C D 4 C D 8 明显低于对照组( P 0 0 5 ) I nt h el a t e rs t a g eo ft h ee x p e r i m e n tt h el e v e l so fC D 3 C D 4a n dt h er a t i oo fC D
11、 4 C D 8w e r eo b v i o u s l yl o w e r ( P 9 5 ) ，由中国预防医学院劳动卫生职业病研究所提供。2 1 2 主要试剂1 ) 小鼠抗大鼠C D 3 一P E 单克隆抗体为e B I O s c i e n c e 公司产品2 ) 小鼠抗大鼠C D 4 - F I T C ，C D 8 - F I T C 单克隆抗体、相同荧光标记的同种型免疫球蛋白、正常大鼠I g G 封闭抗体均为美国C a l t a g 公司产品3 ) 小鼠抗大鼠C D 2 5 一P E 单克隆抗体为美国C a l t a g 公司产品4 ) F o x p 3 一A P C
12、 试剂盒( 内含小鼠抗大鼠F o x p 3 - A P C 单克隆抗体、固定透膜液、1 2安徽医科大学硕士毕业论文透膜液) 为e B I O s c i e n c e 公司产品5 ) 氯化铵为S i g m a 公司产品6 ) 多聚甲醛( P F A ) 购白天津市光复精细化工研究所7 ) 叠氮钠( N A N 3 ) 为S i g m a 公司产品8 ) 牛血清白蛋白( B S A ) 为杭州四季青生物工程材料有限公司产品9 ) 一抗为兔抗大鼠N F r , B B ( P 6 5 ) 、T G F - p 1 克隆抗体，二抗为山羊抗兔I g G ，链菌素一过氧化物酶( S P ) 试剂
13、盒、显色剂D A B 均为北京中杉金桥生物技术有限公司产品1 0 ) 氯化钠、氯化钾、N a E H P O 。1 2 H 2 0 、K H 2 P 0 4 、N a H C 0 3 、无水乙醇、二甲苯、过氧化氢( H 2 0 2 ) 、中性树脂、多聚赖氨酸、盐酸等国产试剂均为分析纯1 1 ) 0 0 1 M 枸橼酸钠缓冲液为北京中杉金桥生物技术有限公司产品1 2 ) H E 染液、苏木素染液由安徽医科大学第一附院病理科提供1 3 ) 标准石英粉尘，含S i 0 2 9 5 ，由中国预防医学院劳动卫生职业病研究所提供1 4 ) 青霉素2 1 3 主要仪器1 ) 流式细胞仪( F A C S C
14、 a l i b u r ) ，B D 公司2 ) 离心机3 ) 快速恒温数显水浴箱、恒温振荡器为常州国华电器有限公司生产4 ) 普通显微镜为O L Y M P U S 公司产品5 1N i k o nE 6 0 0 P O L 偏振光显微镜6 ) R D M B 1 0 0 D 高纯水机购自杭州永洁达膜分离设备厂7 ) 电子天平8 ) 2 0 0 目不锈钢筛网9 ) 染尘架( 自制)l o ) 微波炉11 ) 超净工作台为苏州净化设备厂生产安徽医科大学硕士毕业论文1 2 ) 耳镜、反光镜均为安徽医科大学附属医院五官科提供2 1 4 主要溶液的配制1 ) 流式用液0 1 5 MP B S (
15、p H 7 2 ) 液：红细胞裂解液：1 0 叠氮钠：1 多聚甲醛染色缓冲液N a C l8 5 9K C l0 2 9N a 2 H P 0 4 1 2H E O3 6 9K H 2 P 0 42 8 9超纯水1 0 0 0 m l调节P H 值至7 2 ，4 “ C 保存N H 4 C l8 0 2 9N a H C 0 38 4 9E D T A - N a 23 7 9超纯水1 0 0 0 m l4 “ C 保存，临用前用蒸馏水1 ：1 0 稀释( 有效期为6个月)N a N 31 0 9超纯水1 0 0 m l室温保存。注：N a N 3 有毒，避免吸入粉末，使用其溶液时小心。P F
16、 Al gP B S1 0 0 m l称取1 9P F A 加入I O O m l P B S 中，并加入少许氢氧化钠，在酒精灯上边加热边摇晃至其溶解成透明溶液，滤纸过滤后用浓盐酸调节P H 值至7 2 左右( P F A有毒，操作应在通风橱中进行)含0 I N a N 3 和0 2 B S A 的P B S 溶液，4 “ C 保存1 4安徽医科大学硕士毕业论文2 ) 免疫组化用液3 H 2 0 2 ：用3 0 H 2 0 21 份+ 超纯水1 0 份混合，4 “ C 保存。D A B 显色剂：取l m l 超纯水，加试剂盒中A ，B ，C 试剂各l 滴，充分混匀，临用前配制。0 0 2 MP B S ( p H 7 4 ) 液：N a C l8 5 9N a H 2 P 0 4O 4 9N a 2 H P O a2 8 9超纯水1 0 0 0 m l4 保存3 ) 矽肺模型用液2 Q 堡g 纽! 墨i Q 2 趋尘量遗；S i
